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钙蛋白酶在视网膜疾病中的作用
钙蛋白酶(calpain)是一类与细胞凋亡和坏死过程密切相关的蛋白,在包括视网膜在内的人体众多组织中,它的活化均与神经变性和细胞死亡有关,其抑制剂在多种神经细胞中具有神经保护作用,但它的特异性和潜在副作用仍需进一步研究.本文综述钙蛋白酶及其抑制剂在神经损伤与保护方面的作用,并探讨它在治疗多种视网膜疾病中的应用前景.
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抗钙蛋白酶抑素C端Ⅳ区抗体在类风湿关节炎患者中的意义
目的检测抗钙蛋白酶抑素C端Ⅳ区抗体(ACAST-DⅣ)在类风湿关节炎(RA)中的阳性率,探讨ACAST-DⅣ在RA中的意义.方法人工合成已鉴定的钙蛋白酶抑素C端Ⅳ区A、B、C 3个抗原表位多肽,分别以A、B、C肽(均为9肽)为抗原,并将3个肽稀释后混合作为Ⅳ区抗原.用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测191例RA、147例其他风湿病患者和106名正常人血清中抗A、B、C肽和ACAST-DⅣ的水平及阳性率.同时分析ACAST-DⅣ与类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体相关性,比较ACAST-DⅣ阳性组与阴性组的血沉(ESR)、RF、C反应蛋白(CRP)和日常生活能力(HAQ).结果 RA患者ACAST-DⅣ抗原表位A、B和C肽的吸光度值水平和阳性率均明显高于其他风湿病和正常对照组(P＜0.01),对RA诊断的敏感性分别为33.3%、28.9%和46.7%;特异性分别为96.7%、96.7%和87.8%.ACAST-DⅣ(3个肽混合)在RA、骨关节炎(OA)、系统性红斑狼疮(SLE)、脊柱关节病(SPA)和正常对照组中的阳性率分别为74.3%、2.8%、0、0和6.6%(P＜0.01).ACAST-DⅣ对RA诊断的敏感性和特异性为74.3%和96.3%;阳性预测值92.6%,阴性预测值85.8%.ACAST-DⅣ与抗CCP抗体之间有相关性(P＜0.05),与RF之间无明显相关.ACAST-DⅣ阳性组ESR明显高于阴性组(P＜0.05),但CRP、RF和HAQ两组之间差异无统计学意义.结论 ACAST-DⅣ对RA诊断有较好的敏感性(74.3%)和特异性(96.3%).ACAST-DⅣ与抗CCP抗体相关,且该抗体阳性患者的ESR明显升高,可能与疾病活动有关.ACAST-DⅣ可作为RA的血清学诊断指标.
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CSL载体构建表达纯化及活性鉴定
目的 构建Calpastatin N末端结构域Calpastatin domain L(CSL)(a.a.150-230)融合蛋白质粒,表达、提取、纯化CSL蛋白并进行生物学活性鉴定.方法 将CSL的cDNA片段插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导蛋白表达,超声破碎法提取CS;蛋白.利用Glutathione-Sepharose 4B(GS-4B)beads和PreScission蛋白酶分离纯化蛋白,pull down assay检测其生物学活性.结果 CSL质粒经测序比对后表明构建成功;超声破碎法提取的CSL蛋白纯度和浓度均较高,并具有能够与GST-CT1融合蛋白浓度依赖性结合的生物学活性.结论 成功构建CSL融合蛋白质粒,提取纯化具有生物活性的CSL蛋白,为探讨Cav1.2钙通道自身调节机制奠定基础.
关键词： 钙蛋白酶抑素 Pull down assay 质粒构建 -
钙蛋白酶和钙蛋白酶抑素在老年聋大鼠耳蜗中的表达
目的 确定钙蛋白酶在老年聋大鼠耳蜗中的表达和钙蛋白酶-钙蛋白酶抑素平衡变化与老年耳聋的相关性.方法 采用免疫组织化学染色确定钙蛋白酶在老年大鼠耳蜗中的表达水平和组织定位,采用即时PCR技术分析耳蜗提取物中钙蛋白酶和钙蛋白酶抑素 mRNA水平的变化.结果 钙蛋白酶主要分布在耳蜗组织的内外毛细胞、神经元细胞和血管纹.在青年组大鼠耳蜗组织中钙蛋白酶有低水平表达,在老年大鼠耳蜗中的表达明显高于青年组.不同程度耳聋的耳蜗毛细胞、神经元和血管纹的钙蛋白酶表达趋势相似.但钙蛋白酶在血管纹中表达低于神经元和毛细胞.在老年耳聋组,耳蜗提取物中的钙蛋白酶 mRNA水平比青年组增高5.7倍(P＜0.01),而钙蛋白酶抑素的mRNA水平减低了3倍(P＜0.01).结论钙蛋白酶-钙蛋白酶抑素系统平衡紊乱在老年耳蜗组织退化和听力障碍发生过程中有重要作用.
