首页 > 文献资料
-
疾病基因克隆的策略及主要方法
目录一、定位克隆 (positional cloning) 策略 (一)家系连锁分析法 (二)等位基因共占法 (三)人群相关分析法 (四)cDNA筛选二、消减杂交 (subtractive hybridization) 策略 (一)消减杂交法和抑制性消减杂交法 (二)差示反转录PGR法和差异消减显示法 (三)代表性差异分析法和Sl核酸酶介导的缺失基因探针富集法 (四)基因组错配扫描法 (五)比较基因组杂交法 (六)DNA微阵列杂交系统三、两类策略的联系
-
吸引素
Mahogany一词首先被用作描写Agouti小鼠基因变异所引起的毛发颜色的改变现象[1].定位克隆Mahogany小鼠的变异基因,发现它们是一个由1428个氨基酸组成的富含胱氨酸的Ⅰ型跨膜蛋白[2,3],具有较大的细胞外微区、跨膜微区和较小的细胞内微区,小鼠、果蝇和蠕虫的吸引素结构非常相似(图1).细胞外微区具有轴突诱导和细胞黏附分子的特征;目前我们还不了解细胞内微区的具体功能.Duke-Cohan等[4]在人体血浆内发现和Mahogany细胞外微区相似的分泌性糖蛋白,在体外能"attract"激活的T淋巴细胞向单核细胞运动,因而称为吸引素(attractin,Atrn).
-
microRNA调控基因表达作用及其对病原微生物致病性的影响
微小RNA(microRNA或miRNA)是近年来新发现的一类小RNA分子.自1993年Lee等用经典的定位克隆方法在线虫(Celegans)体内发现首个microRNA( Lin-4)以来,迄今已发现约16772个microRNA(miRBase数据库17版,http://microrna.sanger.ac.uk/sequences),成为目前已知大的基因表达调控家族.microRNA广泛存在于脊椎动物、果蝇、线虫、植物、细菌甚至病毒中,在进化上具有保守性,但在序列、结构、表达和功能上具有多样性.
-
武汉地区汉族人群T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白4基因多态性与变应性哮喘的相关性
变应性哮喘是一种以气道高反应性和慢性炎症为特征的气道炎症性疾病.其病因既受环境影响,又有明显的遗传倾向.有学者采用定位克隆法,在世界不同种族中发现人5q31-33是哮喘的重要基因候选区[1].
-
X-连锁肾上腺脑白质营养不良的分子诊断方法研究
X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,X-ALD)是过氧化物酶体病的一种,由ABCD1基因突变所致,该疾病基因定位于Xq28,其成熟mRNA长约3 700bp,编码1个含745个氨基酸残基的蛋白质,称为ABCD1蛋白.自ALD的致病基因被定位克隆以来[1],至今国际上已报告了900余种ABCD1基因突变(www.X-ald.nl),其中错义突变占60%[2].笔者于2006年7月至11月分别对6个X-ALD家系进行基因突变分析,现报告如下.
-
2型糖尿病易感基因定位克隆研究进展
糖尿病有遗传倾向且有遗传异质性.近年病因研究之深入发现了多种由单基因突变导致胰岛B细胞胰岛素分泌不足呈孟德尔遗传或线粒体母系遗传的糖尿病.但是,在糖尿病者中占很大比例的2型糖尿病(T2DM)是多基因遗传的复杂病(complex disease).复杂病是由多个易感遗传基因及环境因素共同参与且相互作用而致发病.阐明T2DM易感基因及其与环境因素相互作用参与发病的机制并非易事,但却是充分防治T2DM的前提之一.只有在计算机及分子生物技术飞速发展的今日方有可能摸索应用重组制谱(recombinant mapping)结合连锁不平衡制谱(linkage disequilibrium mapping)对T2DM易感基因进行定位克隆(positional cloning).本文就其进展作一介绍.
-
柳暗花明又一村——2型糖尿病的遗传学研究突破将糖尿病的病因学研究引入新的时代
2006年前T2DM的遗传学研究进展是相对缓慢的,糖尿病遗传学研究的艰难程度被人们称为"遗传学家的噩梦".上世纪90年代中期,采用了基因连锁分析的定位克隆研究策略,成功地发现了几个符合孟德尔遗传模式的糖尿病致病基因(如年轻的成人发病型糖尿病,MODY).在此鼓舞下,遗传界掀起了定位克隆普通T2DM基因的"小高潮".
-
对瘦素临床意义的重新认识
1994年,Friedman实验室首次定位克隆小鼠ob基因,并由其DNA顺序合成了ob蛋白,后者被命名为瘦素(leptin),ob基因又称为瘦素基因[1],瘦素基因缺陷的ob/ob小鼠及瘦素受体基因突变的db/db小鼠均表现为病态肥胖且丧失生殖能力.由于瘦素对其基因突变的ob/ob小鼠及非基因突变而因饮食过量引起的肥胖小鼠的显著减肥效应,研究肥胖的学者及众多肥胖症患者曾对此寄以厚望,并由此激发起以瘦素机制及临床应用为中心的对肥胖研究的热潮.7年多过去了,对瘦素与人类肥胖症的关系已经有了一些比较明确的结论:(1)瘦素及其受体基因的突变在人类中也引起病态肥胖.但迄今为止,仅发现3个家系有此现象,均为隐性遗传,父母都为近亲的杂合子[2-5].对中国人群也有一些研究,尚未见有瘦素基因及其受体突变的报道.(2)绝大多数肥胖症患者并非由于瘦素或其受体基因突变所致.与原先期望的相反,血清瘦素浓度与肥胖程度呈正相关,肥胖症者表现为"瘦素抵抗"[6].
-
青少年特发性脊柱侧凸病因学的分子遗传学研究进展
青少年特发性脊柱侧凸(AIS)严重危害着青少年的健康,但是关于它的确切病因仍不清楚.近年来,随着分子生物学技术的发展,国内外众多学者采用分子遗传学手段对遗传因素在AIS发病中的作用做了大量研究,本文就此进行综述,希望为下一步研究提供资料.
关键词: 青少年特发性脊柱侧凸 病因 定位克隆 候选基因 -
多囊卵巢综合征患者钙蛋白酶10基因单核苷酸多态性-19多态性分析
多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄期妇女常见的内分泌及生殖功能障碍性疾病,胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)不仅是PCOS患者的重要特征,而且可能是发生PCOS的主要病理基础,在PCOS发病早期起一定的作用[1].钙蛋白酶10(calpain 10,CAPN10)基因是第1个被定位克隆的与2型糖尿病有关的基因,该基因的变异与IR的发生有关,并影响2型糖尿病的遗传易感性[2].本研究主要对PCOS患者CAPN10基因多态性进行分析,旨在探讨CAPN10基因多态性与PCOS发病的关系,为PCOS发病机制的研究提供可能的实验依据.
-
先天性肌营养不良的研究进展
肌营养不良是一类以骨骼肌受累为主的遗传变性病,通过临床表现可诊断出20种以上的肌营养不良.自定位克隆手段发现Duchenne/Becker肌营养不良(DMD/BMD)的基因产物抗肌萎缩蛋白(dystrophin)以来,人们进行了广泛的研究来探讨肌营养不良的病理生理和治疗方法.
-
急性淋巴细胞性白血病6q21区域微缺失及其与临床关系的研究
在急性淋巴细胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的发生与发展过程中,牵涉到包括癌基因和抑癌基因改变在内的一系列遗传改变,而对染色体高频杂合性缺失(loss of heterozygosity ,LOH)区域的研究是寻找潜在抑癌基因的重要方法.大量的研究显示,6号染色体长臂(6q)在ALL中是常出现LOH的区域之一. 为了精确定位ALL中潜在抑癌基因的位置以利于进行进一步的定位克隆工作,我们选取分布于6q21上的11个多态性微卫星标记, 对2002年12月-2003年12月在我科住院和门诊确诊的93例ALL标本进行了LOH分析.
-
遗传性神经肌肉疾病研究现状与展望
随着分子生物学研究的不断深入,越来越多的神经肌肉疾病基因被定位克隆,基因结构及其分子发病机制得以阐明,国内不少单位相继开展了这些疾病的基因诊断、症状前诊断甚至产前基因诊断.而针对其基因治疗的研究,国内外正呈现新的热点.我们介绍其中主要疾病的研究现状及发展趋势.
-
先天性内耳畸形家系致病基因的定位克隆
目的 应用分子遗传学的方法揭示一个X-连锁遗传先天性内耳畸形家系的分子病理机制.方法 利用X染色体上的微卫星标记进行基因组扫描,通过连锁分析的方法进行致病基因的定位;在定位区域内选取候选基因进行突变筛查.结果 ①家系所有患者成员均为男性,表型特征为先天性极重度耳聋,颞骨CT扫描发现内耳道扩大,其基底部骨质缺损,蜗轴发育不全,遗传特点符合X-连锁遗传模式;②通过连锁分析在DXS990处得出的大LOD值为3.27(θ=0.0),将该家系定位在Xq13.1-23之间的区域内;③对定位区域内的基因进行分析后将POU3F4基因作为候选基因对家系成员进行突变检测,发现了与家系中患者成员内耳畸形表型共分离的POU3F4基因新的突变形式(925T→C),该突变位于POU同源结构域中的保守位点,导致编码蛋白氨基酸第309位的丝氨酸突变成脯氨酸(Ser309Pro),110例正常对照者中没有发现同样的突变.结论 POU3F4基因一种新的突变形式是导致中国先天性内耳畸形家系中患者的分子病理机制.
-
乳腺癌/卵巢癌患者BRCA1基因突变的检测及分析(附37例报告)
乳腺癌和卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤.Hall等[1]通过遗传连锁分析的方法识别了一个与家族性乳腺癌/卵巢癌密切相关的易感基因(breast/ovarian cancer susceptibility gene1,BRCA1),Miki等[2]采用定位克隆的方法将其分离出来.之后,国际间的乳腺癌连锁协作小组以充分的依据证实了BRCA1基因与乳腺癌和卵巢癌的密切关系.为了解我国汉族BRCA1基因突变情况,我们对2002年9月至2003年10月在我院肿瘤科就诊的37例北方汉族乳腺癌和卵巢癌患者进行了探讨,报告如下.
-
人类基因组计划现状与展望(下篇)
疾病的基因组学从"定位克隆"到"定位候选基因"人类基因组计划(HGP)的直接始动因素是要解决包括肿瘤在内的人类疾病的分子遗传学问题,因此与人类健康密切相关.另一方面,6千多种单基因遗传病和多种大面积危害人群健康的多基因疾病的致病基因和相关基因,代表了具有一定生物学冗余性的所有人类基因中结构和功能完整性至关重要的那一部分.因此,疾病基因的定位、克隆和鉴定,是HGP各种竞争中居于核心的部分,也是HGP启动以来在社会上显示度大的成就.
-
瘦素基因治疗肥胖症研究进展
肥胖症是一种与高血压、高血脂、冠心病、糖尿病密切相关的疾病,是一个世界性的健康问题,防治肥胖已迫在眉睫,有关肥胖的研究也日益受到重视.目前关于肥胖发生的分子机制尚未完全阐明,但已发现一些肥胖相关基因,其中主要的是瘦素基因(ob基因)和瘦素受体(ob-R)基因.1994年,Friedman实验室首次定位克隆小鼠ob基因,并由其DNA顺序合成了ob基因产物瘦素(leptin,LP).随着LP的发现及对其功能的逐步认识,LP cDNA克隆的成功,使肥胖的基因治疗在ob/ob小鼠身上获得了成功,为进一步研究人类肥胖的发生机制、预防和治疗开辟了一条崭新的途径.
-
分子生物学技术在肝癌研究中应用
肝癌的发生是有其分子生物学基础的.自80年代以来许多技术相继开发应用到肿瘤的分子生物学研究,并取得了显著的成效.一类主要用于基因组DNA的检测,如肝癌基因和抑癌基因的定位克隆,比较基因组杂交,代表性差异分析;用于cD-NA或mRNA或mRNA水平的技术包括消减杂交、差异显示PCR、cDNA代表性差异分析、DNA芯片及探针微列阵等.这些技术的应用为肝癌的分子生物学研究开拓了一个崭新的领域.
-
人类疾病基因研究
1986年,Duchenne肌营养不良、慢性肉芽肿和视网膜母细胞瘤等疾病基因的相继克隆,标志着人类疾病基因研究进入了“反向遗传学”或“定位克隆”时代。
-
2型糖尿病易感基因研究进展
2型糖尿病(DM)属于复杂遗传病,即多种基因和环境因素共同参与了DM的致病过程.环境因素参与发病的提示在于同一种族在不同生存环境中2型DM发病危险性有明显差异;而家族聚集性、同卵双生子发病的较高一致性以及在某些种族人群(如Pima印地安人、太平洋岛国居民、墨西哥裔美国人)中的高发率均强烈提示2型DM具有明显的遗传易感性,遗传因素在2型DM的发生和发展中起着重要作用,尽管目前对大多数普通型2型DM来说,这种作用尚不清楚.揭示2型DM的遗传基础,不仅可以从分子水平上提高对疾病发病机制的认识,并且对2型DM的诊断、预防和治疗具有十分重要的意义.笔者就当前2型DM易感基因的研究及其进展作一综述.