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混合系激酶区域样蛋白的研究进展
程序性坏死是近年来发现的一种由死亡受体介导的 caspases 非依赖性细胞死亡模式，通常在凋亡被抑制的情况下发生，具有坏死细胞的形态学特征。受体相互作用蛋白（receptor interacting protein，RIP）1和3是程序性坏死信号通路中极为重要的调节蛋白。MLKL 作为 RIP1／RIP3的下游调控物质，已被证明在 TNF 诱导的程序性坏死下游通路中起着重要作用。本文就 MLKL 的发现、生理功能及其分子机制进行综述。
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MLKL磷酸化在红花黄色素对保护大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 研究MLKL磷酸化在红花黄色素保护大鼠心肌缺血再灌注损伤中的机制及作用.方法 雄性SD大鼠30只,随机分为5组(n=6):正常对照(control)组、缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/R)组、红花黄色素干预组根据浓度不同分成3个亚组(A组:0.1 mmol/L;B组:0.3mmol/L;C组:0.9 mmol/L).灌注前后监测心功能指标,包括HR、LVSP和LVEDP;再灌注120 min末,取心,观察心肌细胞的形态;免疫印迹法分析MLKL的磷酸化水平,酶联免疫分析(ELISA)测定TNF-α含量.结果 与Control组相比,各组心肌纤维排列紊乱;与I/R组相比,红花黄色素处理组心肌纤维排列渐规则,C组改变更显著;与Control组相比,I/R组HR、LVSP降低,LVEDP升高,MLKL的磷酸化水平升高、TNF-α含量增加,差异有统计学意义(P＜0.05);与I/R组相比,C组HR、LVSP升高,LVEDP降低,MLKL的磷酸化水平降低、TNF-α含量减少,差异有统计学意义(P＜0.05);A、B组各指标改变无显著差异(P＞0.05).结论 在心肌缺血再灌注中,红花黄色素通过下调MLKL磷酸化水平,抑制炎症反应,减轻缺血再灌注损伤.
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程序性坏死参与油酸诱导的大鼠急性呼吸窘迫综合征的发病过程
本研究旨在明确程序性坏死在急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)发病中的作用.通过尾静脉注射油酸(oleic acid,OA)制备大鼠ARDS模型,并观察4h.通过动脉血气分析、肺干湿重比(lung wet-dry weight ratio,W/D)、肺组织HE染色及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白测定、白细胞计数及分类计数来评估ARDS模型.通过ELISA检测BALF中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)水平.通过免疫组化和蛋白免疫印迹观察受体相互作用蛋白激酶1 (receptor interacting protein kinase 1,RIPKl)、RIPK3、mixed lineage kinase domain-like protein (MLKL)在肺组织中的表达水平.通过免疫沉淀观察RIPK1和RIPK3之间的相互作用.结果显示,OA注射4h后,与对照组比较,OA组大鼠肺泡-动脉氧分压差[P(A-a)O2]、W/D、BALF中白细胞总数、中性粒细胞比例、蛋白浓度及TNF-α水平均显著上升,而氧合指数(PaO2/FiO2)下降;OA组大鼠肺组织中RIPKl、RIPK3、MLKL表达明显增加,且RIPK1与RIPK3之间的相互作用显著增强.以上结果表明,在ARDS的发生、发展过程中,TNF-α分泌增加,RIPKl/RIPK3/MLKL信号通路被激活并表达上调,提示程序性坏死可能在ARDS的发病机制中发挥作用,这可能为治疗ARDS的新药开发提供新思路.
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麦冬皂苷D'通过RIP1/MLKL诱导前列腺癌PC3细胞程序性坏死
目的 研究天然皂苷类化合物麦冬皂苷D'(Ophiopogonin D',OPD')对雄激素非依赖的前列腺癌PC3细胞的抗肿瘤效应及其机制.方法 不同浓度的OPD'处理前列腺癌PC3细胞后,MTT实验检测细胞生长能力,流式细胞术检测Annexin V-Fitc和PI双染,Western blot检测程序性坏死相关蛋白——受体相互作用蛋白1(receptor interacting protein-1,RIP1)、混合谱系激酶结构区域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like,MLKL)的表达,结晶紫染色、透射电镜观察细胞形态学的改变.结果 OPD'抑制PC3细胞生长活性,24 h IC50值为(6.25±0.31) μmol/L.5μmol/L OPD'处理24 h诱导PC3细胞凋亡和坏死,5μmol/L OPD'处理6 h PC3细胞在晚期凋亡/坏死象限呈明显的时间依赖关系(r =0.728,P＜0.001).OPD'诱导PC3细胞Caspase非依赖性死亡,且其死亡能被程序性坏死(necroptosis)特异性抑制剂necrostatin-1(Nec-1)所抑制(P =0.047),表明OPD'诱导PC3细胞程序性坏死.OPD'下调Cleaved-RIP1、上调RIP1的表达;上调p-MLKL四聚体的表达,并呈明显的时间依赖关系(r =0.907,P=0.005).形态学上OPD'诱导PC3细胞坏死样改变.结论 OPD'抑制前列腺癌细胞生长具有明显的抗肿瘤效应,而诱导其通过RIP1/MLKL通路发生程序性坏死可能是其发挥抗肿瘤效应的机制之一.
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坏死性凋亡调控机制及其在肿瘤病理机制中的作用
坏死性凋亡是非caspase依赖的程序性细胞死亡形式,由受体相互作用蛋白激酶1/3(receptorinteracting protein kinase 1/3,RIPK1/3)和混合连接激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)介导,具有与坏死相同的形态学特征.坏死性凋亡在肿瘤病理机制中具有双重作用,可以补偿性清除和杀灭凋亡耐受的肿瘤细胞,发挥抑制肿瘤效应;也可以通过激发肿瘤微环境炎症反应,促进肿瘤发生发展、侵袭转移.本文综述了坏死性凋亡的调控机制及其在肿瘤发生进展的生物学效应和病理学意义.
