首页 > 文献资料
-
程序性坏死机制与缺血再灌注损伤
程序性坏死是一种具有可调控的信号传导通路的细胞坏死方式.多种刺激可导致程序性坏死的发生,复合体Ⅰ、复合体Ⅱ和RIP1-RIP3坏死体是通路中的信号分子,而Necstatin-1是程序性坏死的特异性阻断剂.程序性坏死可能是缺血再灌注损伤中细胞死亡的重要方式.
关键词： 程序性坏死 受体相互作用蛋白激酶1 受体相互作用蛋白激酶3 -
坏死性凋亡在干细胞移植改善心搏骤停后神经功能的作用
目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对心搏骤停(CA)后大鼠脑组织受体相互作用蛋白激酶1和3(RIP1和RIP3)表达的影响.方法 该实验在福建省急诊医学研究所完成.SD大鼠随机(随机数字法)分为sham组(n=8)、CA组(n=8)和MSCs组(n=8).通过窒息法诱导CA后进行心肺复苏(CPR),复苏后1h,MSCs组和CA组分别经尾静脉注射1×106/0.5mL MSCs与等体积磷酸盐缓冲液.CPR后3d,对各组大鼠进行神经功能缺损评分(NDS),荧光显微镜下检测MSCs在脑内分布,脑组织HE染色观察皮层坏死神经元,Western blot检测脑组织RIP1和RIP3表达水平.组间比较采用方差分析或Kruskal-Wallis H检验.结果 CPR后3d,MSCs组NDS明显高于CA组[72.5(71.5,73.2)与63.0(62.5,64.1),Z=3.376,P=0.001],DAPI标记的MSCs主要分布在脑皮层,MSCs组皮层坏死神经元明显低于CA组[(29.6±5.9)％与(57.2±6.4)％,t=8.922,P＜0.01],MSCs组脑组织RIP1和RIP3表达水平均低于CA组[RIP1:0.227(0.193,0.243)与0.599(0.535,0.629),Z=3.151,P=0.001;RIP3:0.217(0.203,0.274)与0.543(0.533,0.555),Z=3.361,P=0.001].结论 MSCs移植可能通过抑制坏死性凋亡从而改善CPR后大鼠神经功能.
-
RIP3介导肠化胃上皮细胞IL-33的表达
目的 探索受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIP3)信号通路与胃黏膜肠上皮化生(gastric intestinal metaplasia,GIM)的关系,及其对炎性细胞因子的调控作用.方法 收集健康对照,患有慢性非萎缩性胃炎、GIM和异型增生的胃黏膜组织标本,通过免疫组化和qRT-PCR分析RIP3在GIM中的表达情况.用脱氧胆酸钠(sodium desoxycholate,DCA)刺激GES-1人-胃黏膜上皮细胞系,western blot观察肠上皮化生的关键基因CDX2与RIP3信号通路的关系,及RIP3信号通路对炎性细胞因子的调控.结果 与对照组和慢性非萎缩性胃炎组相比,GIM组和异型增生组的胃黏膜RIP3 mRNA表达上调;同时GIM组和异型增生组胃上皮细胞RIP3蛋白水平表达上调.受DCA刺激的GES-1细胞,RIP3信号通路相关蛋白表达与CDX2蛋白表达均上调,伴随着IL-33表达的上调;RIP3信号通路的特异性抑制剂(necrostatin-1,Nec-1)对CDX2表达无影响,但可显著下调RIP3信号通路相关蛋白及IL-33的表达.结论 RIP3信号通路对GIM的发生无影响,然而其可能通过调控肠化的胃上皮细胞IL-33的表达影响GIM进展,提示其可能成为阻止GIM进展的潜在治疗靶点.
关键词： 受体相互作用蛋白激酶3 胃黏膜肠上皮化生 IL-33 -
RIPK3介导肝细胞程序性坏死在乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭中的作用
目的 探讨受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)介导肝细胞程序性坏死在乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭中的作用.方法 共纳入140例受试者并采集血清,其中乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)40例、乙型肝炎肝硬化(HBV-LC)40例、慢性乙型肝炎(CHB)40例以及健康对照(HC)20例.检测血清RIPK3水平的表达,并与ALT、AST 水平进行相关性分析.结果 总的肝病患者血清RIPK3水平(447.41 ± 1089.425)pg/mL显著高于健康对照组[(0.62 ± 2.78)pg/mL,P<0.0001],且随着疾病严重程度的增加,血清RIPK3水平呈递增趋势,其中以 HBV-ACLF组(1195.31 ± 1622.95)pg/mL高.所有肝病患者血清中 RIPK3水平与 ALT(r= 0.5804,P< 0.0001)、AST(r= 0.8114,P<0.0001)、总胆红素(r=0.5388,P<0.0001)、PT(r=0.5690,P<0.0001)和INR(r=0.5724,P<0.0001)呈显著正相关.结论 RIPK3介导的肝细胞程序性坏死在乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭病情进展中发挥重要作用.
关键词： 慢加急性肝衰竭 乙型肝炎病毒 程序性坏死 受体相互作用蛋白激酶3 -
程序性坏死参与油酸诱导的大鼠急性呼吸窘迫综合征的发病过程
本研究旨在明确程序性坏死在急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)发病中的作用.通过尾静脉注射油酸(oleic acid,OA)制备大鼠ARDS模型,并观察4h.通过动脉血气分析、肺干湿重比(lung wet-dry weight ratio,W/D)、肺组织HE染色及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白测定、白细胞计数及分类计数来评估ARDS模型.通过ELISA检测BALF中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)水平.通过免疫组化和蛋白免疫印迹观察受体相互作用蛋白激酶1 (receptor interacting protein kinase 1,RIPKl)、RIPK3、mixed lineage kinase domain-like protein (MLKL)在肺组织中的表达水平.通过免疫沉淀观察RIPK1和RIPK3之间的相互作用.结果显示,OA注射4h后,与对照组比较,OA组大鼠肺泡-动脉氧分压差[P(A-a)O2]、W/D、BALF中白细胞总数、中性粒细胞比例、蛋白浓度及TNF-α水平均显著上升,而氧合指数(PaO2/FiO2)下降;OA组大鼠肺组织中RIPKl、RIPK3、MLKL表达明显增加,且RIPK1与RIPK3之间的相互作用显著增强.以上结果表明,在ARDS的发生、发展过程中,TNF-α分泌增加,RIPKl/RIPK3/MLKL信号通路被激活并表达上调,提示程序性坏死可能在ARDS的发病机制中发挥作用,这可能为治疗ARDS的新药开发提供新思路.
-
Necroptosis与疾病的关系
Necroptosis作为一种新发现的细胞死亡形式,在近些年成为研究的热点,Necroptosis是一种可被机体内多种信号转导因子高度调控的程序性坏死路径,属于细胞程序性死亡方式的一种特殊类型,被称为细胞程序性坏死或坏死性凋亡.该过程依赖于受体相互作用蛋白激酶RIP3及其底物混合谱系激酶结构域MLKL,且抑制剂Necrostain-1以及MLKL、PGAM5、RIP1、RIP3构成的坏死复合物是细胞程序性坏死的重要调节因子,坏死复合物的构成和磷酸化过程是Necroptosis的关键性步骤,也是Necroptosis发生的特异性标志.Necroptosis已经被认为是在病理环境下发生的细胞死亡和炎症的重要原因,与诸多疾病的病理和器质损伤有关,例如神经病变,病毒感染,心、脑、肾的缺血-再灌注损伤,恶性肿瘤和许多其它的病理情况等.该文将从Necroptosis的基本特点、机制以及与疾病的关系等多个方面进行概述.
-
RIPK3基因转染的 SH-SY5Y 细胞中 HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化
目的：观察受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α（ HIF-1α） mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的pCMV6-AC-GFP质粒（重组质粒），培养SH-SY5Y细胞，分为实验组及对照组，分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白，分别于培养8、14、20、26、32、38 h后，通过MTT实验检测细胞增殖情况（ OD值）。采用转录组测序技术（ RNAseq）及Ingenuity Pathway Analysis（ IPA）软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR（ ddPCR）检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量（0．806±0．0975）高于对照组（0．455±0．0886），P＜0．05。随培养时间延长，实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量（0．01543±0．00347）低于对照组（0．04628±0．01026），P＜0．05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中，筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白（ UBC）、希佩尔－林道蛋白（ VHL）、转录延伸因子B多肽1（ TCEB1）、血管内皮生长因子A（ VEGFA）。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后，细胞中HIF-1αmRNA表达下调，同时HIF-1α信号通路相关基因（ UBC、VHL、TCEB1、VEGFA）的表达水平受到影响。
-
程序性坏死研究进展
程序性坏死是近年来发现的一种由死亡受体介导的caspases非依赖性细胞死亡模式,通常在凋亡被抑制的情况下发生,具有坏死细胞的形态学特征.研究发现程序性坏死同细胞凋亡一样受细胞内信号因子的周密调节,激酶受体相互作用蛋白激酶1和受体相互作用蛋白激酶3是其关键的调控因子.程序性坏死在炎症性病变、缺血性心脑血管病、神经退行性疾病等多种疾病的发生发展及肿瘤细胞的耐药方面具有重要意义.
关键词： 程序性坏死 受体相互作用蛋白激酶1 受体相互作用蛋白激酶3 肿瘤耐药性 -
受体相互作用蛋白激酶3在大鼠神经病理性疼痛模型中的表达及其作用机制
目的 观察受体相互作用蛋白激酶3 (receptor-interacting protein kinase 3,RIP3)在大鼠脊神经结扎模型中的表达,并探讨其是否参与大鼠神经病理性疼痛的发生.方法 40只大鼠随机分为手术组、生理盐水组、抑制剂组和假手术组,每组10只.手术组、生理盐水组和抑制剂组分别建立腰5脊神经结扎模型,假手术组只做手术,不结扎神经.生理盐水组、抑制剂组分别在建模30 min前鞘内注射生理盐水和GSK'872.记录各组大鼠的行为学改变与机械痛域,采用免疫组化和Western blot检测各组R1P3的表达水平,并通过ELISA法检测各组大鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)含量.结果 手术组、生理盐水组分别与抑制剂组、假手术组相比,均有明显行为学改变且机械痛域值明显下降(P＜0.05),RIP3与TNF-α、IL-1β蛋白表达水平均显著上调(P＜0.001);抑制剂组机械痛域值与RIP3含量均小于手术组和生理盐水组(P＜0.05).结论 RIP3在大鼠神经病理性疼痛模型中表达上调,可能参与神经病理性疼痛的发生.
关键词： 受体相互作用蛋白激酶3 神经病理性疼痛 腰5脊神经结扎模型 -
肾脏疾病中Necrostatin-1的作用研究进展
坏死性凋亡是一种非半胱天冬酶依赖的细胞程序性死亡方式,它通过死亡受体及精确的细胞通路来介导发生.在坏死性凋亡途径的激活中,受体相互作用蛋白激酶1和3(RIP1/3)扮演着重要的角色,上游的信号分子启动后,RIP1可以发生泛素化、去泛素化、磷酸化等一系列的反应,当蛋白激酶8被抑制时,RIP1与RIP3发生相互磷酸化,并形成了坏死性凋亡小体,从而介导了坏死性凋亡的发生.Necrostatin-1 (Nec-1)是RIP1的特异性阻断剂,可以阻断RIP1发生磷酸化,进而使细胞不发生坏死性凋亡.本文对坏死性凋亡的产生机制、Nec-1的结构和作用机制以及Nec-1在肾脏疾病方面应用的研究进展作一个综述,希望能够为肾脏疾病的诊断和治疗提供一些思路及靶点.
-
RIP1/RIP3通路介导氯化血红素诱导的HT-22海马神经细胞损伤的研究
目的 探索受体相互作用蛋白激酶1(RIP1)/RIP3通路是否参与氯化血红素(hemin)诱导的HT-22海马神经细胞损伤以及研究Necrostatin-1(Nec-1)在hemin诱导的HT-22细胞死亡中潜在的神经保护作用.方法 给予不同浓度的hemin(0、25、50、100μmol/L)作用HT-22细胞24 h后测定碘化丙啶(PI)阳性细胞数和细胞存活率.用Necrostatin-1、zVAD和活性氧(ROS)清除剂叔丁基茴香醚(BHA)分别处理hemin诱导的HT-22细胞,24 h后分别测定各组PI+细胞数、细胞存活率,使用MitoSox Red指示ROS水平.后研究使用siRNA敲低RIP3水平对hemin诱导HT-22细胞死亡的影响,测定各组PI+细胞数、细胞存活率及ROS水平.结果 Hemin可剂量依赖性的诱导HT-22神经细胞死亡;RIP1抑制剂Necrostatin-1可显著抑制hemin诱导的HT-22细胞死亡,PI+细胞数明显减少,细胞存活率提高,并且减少ROS积聚;BHA可显著减少hemin诱导的HT-22细胞的PI+细胞数.更进一步的使用siRNA敲低RIP3表达水平可以显著减少hemin诱导的HT-22细胞死亡,PI+细胞数明显减少,细胞存活率明显提高,ROS积聚水平显著减低.结论 RIP1/RIP3通路及ROS可能介导hemin诱导的HT-22海马神经元细胞死亡,Necrostatin-1在其中起神经保护作用.
