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小 G 蛋白 Rap 的信号通路与生物学功能
Rap 在细胞内控制着许多重要的信号通路，这些通路与细胞极性的形成、细胞增殖、分化和癌变、细胞黏附和运动等重要的生物功能密切相关，并进一步在组织器官水平影响一些重要的生理功能，如神经极性的建立、神经突触生长、突触可塑性和神经元迁移等。Rap 属于 Ras 家族，含有Rap1和 Rap2两个亚类。Rap 通过结合 GTP 或 GDP，在激活与失活两种状态之间切换，从而发挥分子开关的功能。此外，Rap 在癌症的发生和发展过程中也发挥着关键作用，它可抑制癌基因 Ras 诱导的细胞转化；还可通过与其下游靶分子的相互作用，作为细胞信号通路上的一个开关分子诱导细胞恶性转化。本文对上述 Rap 的生物学功能做了概括总结，并在此基础之上探究 Rap 及受其调控的蛋白质对肿瘤和神经系统疾病的药物开发和治疗的重要意义。
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视网膜血管瘤样增生
视网膜血管瘤样增生(RAP)是年龄相关性黄斑变性的一种特殊类型,起源于视网膜感觉层毛细血管.患者女性,50岁,右眼0.3.右眼黄斑区视网膜轻度水肿、隆起,中心凹上方约1/2DD黄色病灶与视网膜血管连接.
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RAP结合肽-hFcγ1融合蛋白的表达与初步活性鉴定
目的:将肽库筛选到的正调控金黄色葡萄球菌(金葡菌)外毒素分泌的关键分子RAP(RNA Ⅲ activating protein)的结合肽与人IgG1抗体Fc片段(hFcγ1)融合表达,检测其干扰金葡菌外分泌毒素产生的活性.方法:根据噬菌体肽库筛选到的RAP结合肽序列,选用大肠杆菌偏爱的密码子合成基因片段,将其融合在人IgG1抗体Fc片段基因序列的5′端,构建pET-rapbp-fc融合表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达.以包涵体形式存在的目的蛋白经变性、复性后,ELISA实验分别证实其与抗人IgG抗体及纯化RAP的结合活性.以MDBK细胞株为模型,MTT实验观察融合蛋白对金葡菌196菌株外分泌毒素水平的影响.结果与结论:融合基因在大肠杆菌中获得表达.复性后,融合蛋白的Fc片段及结合肽部分分别能够与抗人IgG抗体及RAP结合,且能在一定程度上降低金葡菌196株上清中的毒素水平.
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小儿再发性腹痛120例临床分析
再发性腹痛(reurrent abdominal pain,RAP)是小儿时期常见的临床症状,因其反复发作,一般治疗常达不到理想疗效,又因其病因广,常涉及小儿内、外科多种疾病,故临床易误诊.本研究对我科2000年6月至2008年6月诊治的120例RAP患儿进行观察和随访,着重进行病因分析,对如何减少误诊提出对策.
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发育期大鼠反复持续惊厥对皮层AMPK/mTOR表达及雷帕霉素的干预作用
目的:研究发育期大鼠反复惊厥后海马AMPK/mTOR表达及雷帕霉素对其影响.方法:日龄为21d的SD大鼠120只(随机数字法)分成3组:对照组、惊厥组(SR组)、雷帕霉素组(RAP组),每组40只,SR组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作,每天一次,每次30min,连续6d.对照组不吸入三氟乙醚,RAP组于惊厥发作前3d及发作0.5h前予西罗莫司(雷帕霉素商品名)以1mg/kg·d共9d连续灌胃,同样方法吸入三氟乙醚诱导惊厥,惊厥方法同惊厥组.三组大鼠于后一次惊厥后分别按1.5h、3h、6h、12h、24h后取大脑皮层,采用免疫组化检测各组AMPK、mTOR的表达,采用方差分析进行比较.结果:RAP组较SR组同一时间各点(1.5h、3h、6h、12h、24h) AMPK的表达明显减少,mTOR的表达明显增高.结论:①惊厥后脑损伤时可见AMPK及mTOR有表达,其表达方式有可能是通过自噬途径来完成的.②RAP可能在惊厥脑损伤中可能通过AMPK/mTOR通路起到脑保护作用.
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抑癌基因ARHI与卵巢肿瘤
抑癌基因ARHI属小GTP结合蛋白,与Ras、Rap基因有着50%～60%的同源性,但拥有独特的基因序列YLPTIENTY.ARHI与肿瘤发生关系密切,具有参与细胞信号转导及负向调节细胞生长等功能.ARHI在卵巢肿瘤中表达降低,利用ARHI基因对卵巢癌进行基因治疗有其可能性.
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黄酮类化合物作用mTOR抑制VSMCs增殖的研究进展
VSMCs的异常增殖是血管增殖性疾病的病理基础.mTOR具有调控细胞存活、增殖和凋亡等重要功能.RAP与mTOR结合,抑制下游底物磷酸化,阻止细胞周期进程,抑制增殖.黄酮类化合物结构与RAP相似,可作用于mTOR及其结合蛋白,抑制VSMCs增殖.
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人源受体相关蛋白在大肠杆菌中表达的优化及纯化
目的获得人源受体相关蛋白(RAP),对表达条件进行优化.方法 RAP cDNA被插入到原核表达质粒pT7-PL和pET-28a(+)中,分别构建成RAP重组表达载体,转化两种BL21菌株后,转化菌用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,选择pT7-PL-RAP质粒进行表达条件的优化,采用镍离子亲和层析纯化所获得的RAP,通过检测与巨噬细胞的结合能力评估其生物活性.结果两个重组质粒均获得了RAP的高表达,对于pT7-PL-RAP质粒,RAP在BL21(DE3,plysS)菌株中的表达显著高于在BL21(DE3)菌株的表达; 有氯霉素存在时表达高于无氯霉素时;诱导表达的RAP大部分为可溶性的;镍离子亲和层析树脂纯化所获得的RAP,可与富含低密度脂蛋白受体(LDLR)家族受体的小鼠巨噬细胞系RAW264.7结合.结论本实验获得了有生物学功能的RAP,为进一步开发生产此蛋白打下良好的基础.
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ERCP在复发性急性胰腺炎病因诊断中的价值
急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的发病率呈上升趋势,在综合治疗及个体化治疗的原则下,约70%～80%的患者获得了较好的疗效,但有一部分患者经治愈后反复发作,称为复发性急性胰腺炎(recurrent acute pancreatitis,RAP).RAP常见病因为胆道疾患、饮食不当、酗酒、高脂血症以及一些少见的如胰腺分裂,Oddi括约肌功能障碍和胰腺肿瘤等.一部分患者在入院后常规检查和无创检查不能明确病因的RAP患者,进一步的病因检查和治疗手段的选择成为难题.ERCP和EUS 被认为是诊断胆管和胰管疾病的金标准[1-2].然而ERCP由于其有创操作和并发症风险等原因在病因诊断上已逐渐被MRCP所取代.然而在对一些如胆泥、胆管微结石,Oddi括约肌功能障碍及十二指肠乳头肿瘤的诊断上优于MRCP.目前我国大部分中小医院都没有超声内镜检查.因此,本文就这部分常规检查和MRCP检查阴性既往归于特发性复发性胰腺炎的患者行ERCP检查,探讨其在这些患者的病因诊断中价值.
