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抑制钠氢交换蛋白下调IL-8表达和促进p38磷酸化
我们前期的研究证明,抑制钠氢交换蛋白1(NHE1)可以减少VEGF表达从而抑制K562细胞诱导的血管生成.本研究探讨抑制NHE1后其他可能的血管生成因子变化及相关机制.用NHE1特异性抑制荆卡立泊来德10 μmol/L处理K562细胞；蛋白芯片筛选NHE1抑制后血管生成因子的表达变化,实时定量PCR验证卡立泊来德处理后白介素-8(IL-8)的表达水平；构建K562稳定干扰NHE1细胞株,实时定量PCR验证干扰NHE1后IL-8的表达变化,Western blot检测卡立泊来德处理后细胞内p38磷酸化水平；p38抑制剂SB203580处理K562细胞,实时定量检测IL-8表达变化.蛋白芯片筛选结果显示,卡立泊来德处理后K562细胞中IL-8表达显著下调；实时定量结果进一步验证了这种抑制效应；卡立泊来德处理后p38磷酸化水平显著上调；卡立泊来德处理后加入SB203580抑制p38,IL-8表达可以部分恢复.结论:抑制NHE1可能通过促进p38磷酸化,下调促血管生成因子IL-8的表达.
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钠氢交换蛋白在依托泊苷诱导HL-60细胞凋亡中的作用及其机制的初步研究
本研究探讨钠氢交换蛋白(Na+/H+exchangen-1,NHE1)在依托泊苷诱导HL-60细胞凋亡过程中的表达变化及其对凋亡过程的调控机制.应用DNA片段化检测和远末端缺口标记(TUNEL)法分析细胞凋亡;实时定量聚合酶链反应检测NHE1 mRNA表达量,Western blot法检测NHE1蛋白表达水平,并应用激光共聚焦显微镜分析细胞内pH值(pHi)的变化.同时应用NHE1特异抑制剂卡立泊来德(cariporide)作用于细胞观察凋亡及pHi的变化情况.结果表明:依托泊苷作用24小时后能有效诱导HL-60细胞凋亡,作用12小时后NHE1 mRNA表达增高了2.848±0.886倍(p＜0.01),NHE1蛋白表达水平也升高(p＜0.01).依托泊苷作用24小时后细胞内pHi从7.11升高到7.46,而卡立泊来德预处理组的细胞在依托泊苷处理24小时后pHi没有明显升高并且凋亡率明显降低.结论:依托泊苷诱导的HL-60细胞凋亡过程中会出现NHE1表达上调,凋亡结果依赖于NHE1表达量升高导致的细胞内pH值升高.
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钠氢交换体1对糖尿病db/db小鼠心脏钙蛋白酶和糖原合成酶激酶-3β的调节作用
目的 探讨钠氢交换体1(NHE1)抑制剂卡立泊来德(CAR)对2型糖尿病db/db小鼠心脏钙蛋白酶(Calpain)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白的调节作用.方法 选取7周龄雄性C57BL/KS db/db小鼠和野生型(WT)小鼠各16只,采用随机数字表法分为4组:对照组(WT)、CAR组(WT+CAR)、模型组(db/db)和CAR干预组(db/db+CAR).10周后行血流动力学检查,测定空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)及胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);观察心肌病理改变,测定心肌组织氧化/硝化应激反应;RT-PCR测定心肌组织磷酸烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶p22phox和gp91phox亚基、转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9 (MMP-9)的mRNA水平.Western blotting检测心肌组织中钙蛋白酶1和2(Calpain-1和2)、钙调磷酸酶(CaN)、蛋白激酶B(AKT)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白的表达;并测定心肌Calpain和CaN酶的活性.两两比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析.结果(1)与db/db组比较,CAR+db/db组小鼠FPG、TC、TG和HOMA-IR有下降趋势(t=1.213~2.112,P>0.05).(2)与WT组比较,db/db组心肌胶原含量、TGF-β1和MMP-2 mRNA水平明显增加,MMP-9 mRNA水平明显下降(t=3.695~4.905,P<0.05),而CAR干预后可逆转上述指标的改变(t=2.491~2.925,P<0.05).(3)CAR+db/db组小鼠±dp/dtmax绝对值增大,LVEDP下降(t=2.865~6.404,P<0.05),并且小鼠心肌损伤情况明显改善.(4)与db/db组比较,CAR干预能明显改善db/db小鼠心脏组织中氧化/硝化应激,两组相比较有统计学差异(t=2.519~4.845,P<0.05).(5)与db/db组比较,CAR能降低db/db小鼠心肌Calpain、CaN酶活性和蛋白含量(t=2.634~3.253,P<0.05),还能上调p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达(t=2.827,4.090,P<0.05).结论 CAR能改善db/db小鼠心脏损伤,其机制可能与CAR改善高糖高脂和胰岛素抵抗,抗氧化应激能力及调节Calpain和AKT/GSK-3β蛋白有关.
关键词： 糖尿病心肌病 钠氢交换体1 卡立泊来德 钙蛋白酶 糖原合成酶激酶-3β -
Cariporide降低K562/DOX细胞株表达P-糖蛋白而逆转耐药的影响
目的 探讨cariporide对耐药细胞株K562/DOX中P-糖蛋白(P-glycopmtein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multidrug resistance,MDR)提供新方法.方法 应用cariporide对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定野生型细胞系K562及耐药细胞株K562/DOX细胞内pH值及细胞酸化对K562和K562/DOX细胞内阿霉素累积的影响.采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响.应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/DOX细胞中P-gP功能的影响.采用实时定量RT-PCR技术检测MDRI基因在mRNA表达水平的变化.结果 Cariporide处理3 h对K562及K562/DOX细胞的活力影响较小.在K562/DOX细胞中,P-gp的外排药物能力随细胞内pH值的降低而减弱,cariporide明显增加了细胞对罗丹明123(rhodaminel 123,Rh123)和阿霉素的累积.细胞酸化还在mRNA水平抑制了K562/DOX细胞中P-gp的表达.结论 Cariporide能够抑制K562/DOX耐药细胞株中MDRI基因表达和P-gp的功能.
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匹那地尔合用卡立泊来德对离体大鼠心肌梗死范围的影响
三磷酸腺苷(ATP)敏感性钾通道(KATP通道)是受细胞内ATP浓度等多因素调节的钾通道,KATP通道在缺血及再灌注损伤的发生和发展中起很重要的作用.匹那地尔可开放KATP通道,对心脏有保护作用[1].Na/H+交换蛋白是一种存在于细胞膜上的糖蛋白,在生理状态下受很多因素的调节[2].Na·/H+交换阻滞剂卡立泊来德[3]和KATP通道开放剂均可缩小心肌梗死的范围,但两者联合应用的放果如何,目前还不清楚.
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卡立泊来德的合成工艺改进
以对异丙基苯甲酸为原料,经过氯磺化、还原、甲基化、胍解得到卡立泊来德,总收率为45.3%.改进后的工艺路线,降低了成本,简化了操作和反应条件.
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心肌钠氢交换抑制药在心血管疾病治疗中的应用
心肌钠氢交换抑制药通过抑制心肌细胞内外钠氢交换,从而防止或减少心肌细胞内钙超负荷.研究表明心肌钠氢交换抑制药对心肌缺血、再灌注损伤、心肌肥厚和心力衰竭有明确的治疗作用.
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卡立泊来德对K562细胞诱导的血管生成的影响
目的 研究卡立泊来德(cariporide)处理对K562细胞诱导的血管生成能力的影响.方法 应用MTT检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞增殖能力的影响;transwell 检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞迁移能力的影响;基质胶血管形成法检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞体外血管形成能力的影响;激光扫描共聚焦显微镜测定K562细胞的细胞内的pH;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测K562细胞上清中血管内皮生长因子的表达水平.结果 cariporide处理可以明显降低K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞增殖,迁移和体外成管能力的诱导;cariporide处理后K562细胞的细胞内pH明显下降,分泌VEGF能力也受到抑制.结论 cariporide能抑制K562细胞的血管生成诱导能力,这种抑制是通过细胞内pH下降以及VEGF分泌减少引起的.
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卡立泊来德预处理减轻离体大鼠肺热缺血再灌注损伤机理的研究
探讨选择性Na~+/H~+交换抑制剂卡立泊来德预处理对离体大鼠肺热缺血/再灌注损伤(WI/RI)的保护机理.建立离体大鼠肺灌流模型,30只大鼠随机分为正常对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和卡立泊来德组(CP组),连续监测平均肺动脉压(mean pulmonary artery pressure,MPAP)和气道峰值(peak airway pressure,pAwP);再灌注结束进行右支气管肺泡灌洗,记录支气管肺泡灌洗液(bronchoaveolar lavage fluid,BALF)回收率(BALF re-covery rate,BALFRR),测定其总蛋白和白蛋白含量;取左肺组织测定肺组织含水量(lung water content,LWC)、超氧化物歧化酶(superodeide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malonodialdehyde,MDA)含量,并进行肺组织病理学观察.与IR组比较,CP组的BALF总蛋白、肺组织MDA含量、LWC以及再灌注后MPAP明显降低,肺组织SOD活性明显增高,组织病理形态学变化明显减轻.缺血前经离体肺动脉灌注卡立泊来德,可能通过抑制离子耦联机制降低再灌注过程细胞内钙超载,减轻钙依赖的黄嘌呤氧化酶途径的氧自由基释放,同时促进内源性抗氧化途径,增强组织抗氧化能力,从而有效减轻肺热缺血再灌注损伤.
关键词： Na~+/H~+交换 卡立泊来德 肺 热缺血再灌注损伤 -
卡立泊来德预处理对肺缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨选择性Na+/H+交换-1拮抗剂卡立泊来德预处理对兔肺缺血再灌注损伤的作用.方法 将24只新西兰大白兔随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、低钾右旋糖酐组(LPD组)和卡立泊来德组(HOE组),每组6只.麻醉后开胸,游离左肺门绕过阻断带,分别于30 min内经静脉泵入等量生理盐水、LPD液或含卡立泊来德的新型器官保护液,除Sham组观察180 min外,余3组均结扎左肺门60 min后,再开放观察120 min,建立在体兔肺缺血再灌注损伤模型.于结扎前(即缺血期前),开放即刻(即再灌注即刻),再灌注后15、30、60、90和120 min分别抽取股动脉血进行血气分析.再灌注结束后取左肺组织测定肺含水量(lung water content,LWC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)活性、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量和钠氢转运体-1(natrium hydrogen exchanger-1,NHE1)表达量,并进行肺组织病理学观察.结果 同IR组相比,LPD组和HOE组氧合指数(再灌注开始后)和肺组织SOD活性升高,肺组织LWC、MDA含量、IL-6含量、TNF-α含量、NHE1表达量(P＜0.05)和肺组织病理学评分降低(P＜0.008);除肺组织病理学评分外(P＞0.008),HOE组余各项指标均较LPD组改善明显(P＜0.05),但仍未恢复至Sham组水平(P＜0.05).结论 卡立泊来德可通过减少NHE1蛋白表达以减轻缺血再灌注期间氧化应激和炎症反应,并同时增强组织抗氧化能力,从而有效减轻在体兔肺缺血再灌注损伤.
