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NHE1的结构研究及其在缺血再灌注中的作用
钠氢交换体1( sodium/hydrogen exchanger1,NHE1)是已知唯一一种在心肌细胞膜上显著表达的钠氢交换体(NHE)亚型,由N端的介导离子转运的跨膜结构域和C端胞内调节结构域两部分构成,对于维持正常心肌细胞内的pH值具有重要的作用,并且在代偿心肌缺血再灌注造成的细胞内pH值的变化中发挥主要作用.本文主要论述NHE1的结构以及其在心肌缺血再灌注中的研究进展.
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DNA损伤时钠氢交换蛋白1在K562和HL-60细胞中的表达和对细胞凋亡的影响
本研究主要探讨在依托泊苷引起的DNA损伤下,BCR-ABL阳性细胞系K562中钠氢交换蛋白-1(NHE1)的表达变化情况,并初步探讨其在何种水平被调控.采用实时定量PCR技术检测NHE1在mRNA水平的表达;Western blot检测依托泊苷对细胞NHE1在蛋白水平的影响;流式细胞术测定细胞凋亡情况;构建NHE1启动子区荧光素酶报告载体,并测定不同依托泊苷浓度作用下的荧光素酶活性.结果表明:DNA损伤引起HL-60细胞NHE1在mRNA和蛋白水平升高(p<0.05),在K562细胞中未发现明显变化(P>0.05);依托泊苷对HL-60细胞有明显的促凋亡作用,阻止细胞内pH值的升高可以降低依托泊苷的促凋亡作用,依托泊苷对K562细胞凋亡率无明显影响;K562细胞在DNA损伤时,NHE1启动子区构建的荧光素酶表达载体活性升高.结论:依托泊苷造成的DNA损伤,促进HL-60细胞凋亡,并且依赖PHi的改变;在K562细胞中NHE1表达没有改变,但其转录活性升高.
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钠氢交换蛋白在依托泊苷诱导HL-60细胞凋亡中的作用及其机制的初步研究
本研究探讨钠氢交换蛋白(Na+/H+exchangen-1,NHE1)在依托泊苷诱导HL-60细胞凋亡过程中的表达变化及其对凋亡过程的调控机制.应用DNA片段化检测和远末端缺口标记(TUNEL)法分析细胞凋亡;实时定量聚合酶链反应检测NHE1 mRNA表达量,Western blot法检测NHE1蛋白表达水平,并应用激光共聚焦显微镜分析细胞内pH值(pHi)的变化.同时应用NHE1特异抑制剂卡立泊来德(cariporide)作用于细胞观察凋亡及pHi的变化情况.结果表明:依托泊苷作用24小时后能有效诱导HL-60细胞凋亡,作用12小时后NHE1 mRNA表达增高了2.848±0.886倍(p＜0.01),NHE1蛋白表达水平也升高(p＜0.01).依托泊苷作用24小时后细胞内pHi从7.11升高到7.46,而卡立泊来德预处理组的细胞在依托泊苷处理24小时后pHi没有明显升高并且凋亡率明显降低.结论:依托泊苷诱导的HL-60细胞凋亡过程中会出现NHE1表达上调,凋亡结果依赖于NHE1表达量升高导致的细胞内pH值升高.
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抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化
本文主要探讨低氧微环境对慢性粒细胞白血病细胞系K562 分化的影响,以及钠氢交换蛋白1(NHE1 )在该过程中的作用.利用低氧模拟物CoCl2 或于低氧(2% O2、5% CO2 和93% N2)环境中培养K562 细胞;应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH 值,瑞士染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR 检测基因表达,Western blot 技术检测MAPK 磷酸化水平的改变.结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562 细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/ 增强子结合蛋白(C/EBP α)的mRNA 水平上调.特异性NHE1 抑制剂Cariporide 预处理能够促进低氧诱导的K562 细胞分化.Cariporide 处理后K562 细胞的p38 和ERK5 蛋白激酶磷酸化水平显著增强.结论:低氧及低氧模拟物能够诱导K562 细胞系分化.抑制NHE1 活性协同促进低氧诱导的K562 细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK 蛋白激酶磷酸化水平,从而促进分化.
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白桦脂酸增强 K562/A02细胞株对阿霉素敏感性的研究
目的：探讨低剂量白桦脂酸对 K562/A02细胞对阿霉素敏感性的影响及其相关机制。方法单用阿霉素和低剂量白桦脂酸联用阿霉素处理 K562/A02细胞，分别采用 MTT 法和流式细胞术检测低浓度白桦脂酸对阿霉素诱导的 K562/A02细胞增殖、凋亡及胞内 pH 值的影响；通过 real-time PCR 和 Western Blot 分别检测低浓度白桦脂酸对阿霉素诱导的 K562/A02细胞 NHE1及 MDR1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果低浓度的白桦脂酸可以显著提高阿霉素诱导的 K562/A02细胞的增殖抑制效应（P<0.05），使其凋亡显著增强（P<0.05）。低浓度白桦脂酸联合阿霉素作用 K562/A02细胞后，胞内 pH 值降低（P<0.05），同时 NHE1和 MDR1 mRNA 的表达减少（P<0.05），NHE1和 P-gp 蛋白表达下降（P<0.05）。给予 NHE1抑制剂Amiloride 处理 K562/A02细胞后，再用白桦脂酸联合阿霉素处理，P-gp 的表达与单用 Amiloride 处理 K562/A02细胞相比无明显变化，而 BA 处理组、Amiloride 处理组、BA 联合 Amiloride 处理组的 NHE1和 P-gp 的表达均较对照组显著下降（P<0.05）。结论低浓度白桦脂酸可以增强 K562/A02细胞株对阿霉素的敏感性，这可能与其降低 NHE1表达，进而减少 P-gp 的表达，改变细胞内 pH 值有关。
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I型钠氢交换蛋白调节细胞内酸碱平衡对胃癌细胞迁移、侵袭的影响
目的：观察I型钠氢交换蛋白（NHE1）通过调控胃癌细胞SGC-7901内酸碱值（pH）对其迁移、侵袭的影响。方法采用共聚焦显微镜观察比较用特异性阻断剂5-（N-乙基- N-异丙基）阿米洛利（EIPA）阻断胃癌细胞SGC-7901的NHE1功能前后胞内pH值的变化，划痕实验观察细胞迁移能力的改变，transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力的改变。结果共聚焦实验发现对照组细胞内pHi为（7.2±0.12），EIPA阻断剂组（5μm）为（7.01±0.23），EIPA阻断剂组细胞内的pH值明显降低（<0.05）；进一步划痕和侵袭实验证明加入不同浓度的EIPA （5、10和20μmol）后均能有效地抑制胃癌细胞SGC-7901的迁移和侵袭能力（<0.05，<0.01），并且抑制的程度与EIPA的浓度呈剂量依赖性。结论阻断NHE1可以降低胃癌细胞pH值，进而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。
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miRNA-27b抑制PPARγ促进乳腺癌细胞增殖
目的:通过体外实验研究过表达miR-27b对乳腺癌细胞系MCF-7增殖方面的影响,并探讨miR-27b的作用机制.方法:通过脂质体介导,将miR-27b mimics转染入MCF-7细胞,用荧光定量PCR检测细胞miR-27b的表达,用Western Blot检测PPARγ与NHE1的表达情况,再通过CCK8实验观察细胞增殖能力的改变.结果:MCF-7转染miR-27b mimics后,miR-27b的表达明显上调(P＜0.05).在蛋白水平,过表达miR-27b后,PPARγ的表达明显下调,而NHE1的表达明显上调.CCK8结果显示过表达miR-27b,细胞增殖作用增强.结论:miR-27b可抑制MCF-7细胞中靶基因PPARγ的表达,上调NHE1的表达水平,并且促进细胞增殖.
