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UPLC同时测定酸枣仁中4种活性成分的含量
目的：建立UPLC同时测定酸枣仁中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸含量。方法：采用ACQUITY UPLC, HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)，流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液，进行梯度洗脱，流速0.5 mL·min-1，波长204 nm，进行检测。结果：斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸的质量浓度与峰面积分别在29.70~594.0μg·mL-1，10.68~213.6μg·mL-1，6.175~123.5μg·mL-1，22.00~440.0μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率均在98.3%~99.4%之间，RSD均小于1.4%。结论：该方法快速、准确、简便，为全面控制酸枣仁质量提供依据。
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马甲子鲜叶干燥方法及提取工艺参数考察
目的:研究不同干燥方法对马甲子鲜叶中抗肿瘤活性成分的影响,并优化其提取工艺参数.方法:采用HPLC-ELSD测定马甲子素和白桦脂酸的含量,流动相乙腈(A)-0.1％甲酸溶液(B)梯度洗脱(0～10 min,55％A;10～ 35 min,55％～100％ A),检测波长320 nm.考察不同干燥方法对马甲子药材中有效成分含量的影响;以马甲子素和白桦脂酸提取量的综合评分为指标,通过正交试验考察乙醇体积分数、乙醇用量和提取时间对有效成分提取工艺的影响.结果:冷冻干燥和阴干法处理时,白桦脂酸和马甲子素的保存效果较好.佳提取工艺为加4倍量95％乙醇冷浸提取2次,每次48 h;此工艺下测得冷冻干燥样品中白桦脂酸和马甲子素平均质量分数分别为4.61,0.077 4 mg·g-1.结论:马甲子的干燥方法适宜采用冷冻干燥法,但考虑大生产成本,建议选择阴干法.优化的提取工艺稳定合理、有效成分提取率高,为马甲子药材资源的开发利用提供参考.
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中药鸡血藤化学成分的研究
目的:研究中药鸡血藤Spatholobus suberectus的化学成分.方法:用色谱法分离,用波谱法鉴定结构.结果:分离并鉴定了5个化合物,分别为2-甲氧基4-(2′-羟乙基)-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、正丁基-O-β-D-吡喃果糖苷(2),二十五烷酸-α-单甘油酯(3),白桦脂酸(4),正二十六碳酸(5).结论:均为首次从该属植物中获得.
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蓝桉果实化学成分的研究
目的:研究蓝桉Eucalyptus globulus果实的化学成分.方法:应用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析等方法进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据等进行结构鉴定.结果:从蓝桉果实中分离得到12个化合物,鉴定了其中5个化合物:桦木酮酸 Ⅰ,白桦脂酸Ⅱ,熊果酸Ⅲ,2α,3β-二羟基乌苏酸Ⅳ.结论:化合物I,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ均为首次从该植物中分离得到.
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白桦脂酸在大鼠体肠吸收动力学的研究
目的:建立同时测定肠循环液中白桦脂酸和酚红浓度的HPLC-DAD法,并探讨白桦脂酸在大鼠各肠段的吸收动力学特征及不同药物浓度对吸收的影响.方法:采用大鼠在体肠吸收实验模型,并考察吸收部位、药物浓度和pH对药物吸收的影响.结果:在75 ～ 125 mg·L-1白桦脂酸的吸收速率与质量浓度呈线性关系,Ka基本保持不变；各肠段的吸收速率无显著性差异,十二指肠、空肠、回肠和结肠的Ka分别为(0.151 ±0.004 9),(0.159 ±0.005 6),(0.156±0.008 3),(0.149±0.0041)h-1.结论:白桦脂酸在小肠中吸收良好,没有特定吸收部位；不同浓度对白桦脂酸在大鼠全肠道的吸收无显著影响,其在肠道的吸收呈一级吸收动力学特征,吸收机制为被动扩散.白桦脂酸是难溶性药物,可以通过增加药物的溶出度,进而提高药物的生物利用度.
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白桦脂酸对质粒急性感染模型小鼠的HBV DNA抑制作用研究
桦木酸是一种天然存在的五环三萜系化合物,它具有抗逆转录病毒,抗疟疾和抗炎特性.该研究主要目的是观察白桦脂酸对Payw1.3质粒急性感染小鼠模型的HBV DNA复制的抑制作用.实验的Payw1.3质粒急性感染小鼠模型(n=15)采用水动力转染技术构建,随机分为PBS对照组(n=5),白桦脂酸药物治疗组(n=5)及拉米夫定对照组(n=5),建模成功后次日分别予以白桦脂酸(100 mg·kg-1),拉米夫定(50mg·kg-1),PBS药物灌胃,每日1次,连续7d,分别在3,5,7d眼眶静脉后采血,ELISA法测血清中HBsAg及HBeAg表达,并在7d后处死小鼠,southern法检测肝组织HBV DNA表达.结果发现与PBS对照组相比,5d时白桦脂酸能明显抑制Payw1.3质粒急性感染小鼠HBsAg表达(P＜0.05),与拉米夫定效果无明显差异.与对照组相比,白桦脂酸和拉米夫定对HBeAg表达均无明显抑制作用,白桦脂酸和拉米夫定对肝组织HBV DNA表达均有抑制作用.这些结果揭示了白桦脂酸能够抑制Payw1.3质粒急性感染小鼠血清HBsAg表达及肝脏内HBV DNA的复制.
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聚合物键合ODS液相色谱-质谱联用法分析大枣中三萜酸含量
目的:建立1种液相色谱-质谱联用法测定大枣中三萜酸的含量.方法:采用聚合物键合的ODS色谱柱Ultimate XB-PAH色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm)进行分离,以乙腈-水(90∶10)为流动相,电喷雾质谱负离子选择离子模式检测,对不同产地大枣中的白桦脂酸、齐墩果酸和熊果酸3种三萜酸成分进行了测定和比较.结果:所建立的检测方法灵敏度高(50.8～113.9 pg),分离度好(R≥1.7),线性关系良好(r≥0.999 0),重复性好(RSD≤3.5％).结论:聚合物键合的ODS固定相可以对三萜酸同分异构体进行高效分离,并且HPLC-MS对大枣中的三萜酸含量分析,专属性和灵敏度显著提高,可满足实际检测需要.
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酸枣仁中白桦脂酸的提取和制备
白桦脂酸(betulinic acid)属五环三萜类有机酸,广泛存在于多种中药中.除有抗炎抑菌、降血脂及抗疟疾等活性外,对黑素瘤[1]、神经外胚层[2]及恶性脑肿瘤[3]等多种肿瘤有强烈的毒杀效应,而对正常细胞无杀伤力[4],同时其抗HIV-1病毒活性强于某些现有临床应用药物[5],为治疗艾滋病、肿瘤的新物质.现有提取分离白桦脂酸的方法多采用二氯甲烷为提取溶剂,通过柱色谱得到白桦脂酸晶体[6],该方法不适应于白桦脂酸的工业生产,从而限制了白桦脂酸的开发和利用.酸枣仁为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa(Bunge)Hu H.F.Chou的干燥成熟种子,含有白桦脂酸[7],有关其工业提取方法,未见报道.本研究建立了适合于酸枣仁中白桦脂酸工业提取的方法.
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白桦脂酸对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226凋亡的诱导
为了探讨白桦脂酸对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226的诱导凋亡作用,用MTT、Annexin-V/PI双标记流式细胞术、PI单标记流式细胞术和Hoechsd3258染色分别检测白桦脂酸对RPMI-8226增殖抑制、凋亡诱导、细胞周期的作用和形态学变化.用RT-PCR技术检测加药后RPMI-8226凋亡相关基因bcl-xl和caspase 3的表达的变化.结果表明:白桦脂酸对RPMI-8226作用24和48小时的IC50值分别为10.156±0.659和5.434±0.212μg/ml,在一定浓度范围内,白桦脂酸对其增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性.RPMI-8226细胞的凋亡率随药物浓度的增加而增加.细胞周期测定显示,随药物浓度的增加G0/G1期的细胞比例增高,处于S期的细胞比例减低,药物对G2/M期细胞影响不明显.Hoechst33258染色在荧光显微镜下可见药物处理组和对照组之间细胞形态的显著变化.RT-PCR测定示,随加药浓度的增加,bcl-xl基因的表达呈降低趋势,而caspase 3基因的表达呈增高趋势.结论:在一定的浓度范围内,白桦脂酸可诱导RPMI-8226发生凋亡且呈时间剂量依赖性,该过程可能与其上调caspase 3和下调bcl-xl基因的表达有关.白桦脂酸还可以影响RPMI-8226细胞系的G1/S期,使细胞阻滞在G0/G1期.
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白桦脂酸对人NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞影响及机制探讨
目的 观察中药白桦脂酸对人NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞的影响,并初步探讨可能机制.方法 分离健康人外周血单个核细胞,细胞因子诱导培养NK细胞达实验要求;不同浓度(0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.25、12.5、25、50和100 μg/mL)的白桦脂酸分别诱导NK细胞、SW1990胰腺癌细胞48 h后,CCK8法检测白桦脂酸对NK细胞增殖的影响;四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测白桦脂酸对SW1990胰腺癌细胞株增殖的影响;流式细胞术(flow cymetory,FCM)检测白桦脂酸作用48 h后NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放法检测白桦脂酸对NK细胞杀伤SW1990胰腺癌细胞的影响;蛋白质印迹法检测白桦脂酸对NK细胞表达磷酸化的ERK1/2(phosphorylation-ERK1/2,p-ERK1/2)的影响.结果 培养10 d的NK细胞比例达74.43％.与对照组比较,白桦脂酸在其浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.25、12.5和25 μg/mL时显著促进NK细胞增殖,F=129.476,P＜0.01;并抑制胰腺癌细胞增殖,F=278.222,P＜0.01.浓度为0.05、0.2、0.8和3.2 μg/mL的白桦脂酸作用NK细胞48 h后,与对照组比较均能促进NK细胞对SW1990胰腺癌细胞的杀伤,F=36.451,P＜0.05.与对照组比较,白桦脂酸在浓度为0.2和0.8 μg/mL时不同程度促进NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达,P＜0.05.与对照组比较,浓度为0.8、3.2和12.5 μg/mL的白桦脂酸可促进NK细胞表达p-ERK1/2,F=83.708,P＜0.05.结论 白桦脂酸在一定的浓度范围内能够增强NK细胞对SW1990胰腺癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能通过促进NK细胞增殖,抑制胰腺癌细胞增殖,激活NK细胞内ERK信号通路,提高NK细胞颗粒酶B、穿孔素、IFN-γ和CD107a的表达.
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白桦脂酸对Jurkat白血病细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察白桦脂酸对人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探讨其分子机制.方法 以不同浓度的白桦脂酸处理Jurkat细胞,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTY)法检测细胞的增殖活性,Hoechst 33258染色和Annexin-V/PI双标法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期分布,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Jurkat细胞中cyclin D3和bcl-xlmRNA含量的变化,Western blot法检测cyclin D3和bcl-xl蛋白的表达.结果 白桦脂酸对Jurkat细胞有明显的增殖抑制作用,并呈时间和浓度依赖性.白桦脂酸可诱导Jurkat细胞凋亡,Hoechst 33258染色可见典型的凋亡小体;Annxin-V/PI双标法显示,20、60和100 μmol/L白桦脂酸作用于Jurkat细胞24 h时,细胞的早期凋亡率分别为8.7%±0.3%、28.0%±1.3%和33.6%±2.0%.白桦脂酸可使Jurkat细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期.白桦脂酸可使Jurkat细胞中凋亡相关基因cyclin D3和bcl-xl mRNA及蛋白的含量均明显减少,并呈浓度依赖性.结论 白桦脂酸可抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡,可使细胞阻滞于G0/G1期;其可能通过下调cyclin D3和bcl-xl mRNA及蛋白的表达而发挥抗肿瘤作用.
关键词： 白桦脂酸 Jurkat白血病细胞 cyclin D3 Bcl-xl 细胞凋亡 -
暴马子皮化学成分研究
目的 研究暴马子皮(Syringae Cortex)化学成分.方法 利用硅胶(200～300目)、凝胶Sephadex LH-20及制备高效液相等柱色谱技术进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构.结果 分离并鉴定了12个化合物:紫丁香苷(Ⅰ),sinapyl aldehyde 4-O-β-D-glucopyranoside(Ⅱ),丁香醛(Ⅲ),松柏醛(Ⅳ),白桦脂酸(Ⅴ),橄榄苦苷(Ⅵ),oleoside dimethyl ester(Ⅶ),ligstroside(Ⅷ),2″-epifraxamoside(Ⅸ),β-谷甾醇(Ⅹ),正三十烷酸(Ⅺ),对羟基苯乙醇三十烷酸酯(Ⅻ).结论 化合物Ⅱ～Ⅴ,Ⅶ,Ⅸ～Ⅻ均为首次从该植物中得到.
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千屈菜的化学成分研究
目的 研究千屈菜全草化学成分.方法 运用多种色谱技术分离千屈菜类成分,采用波谱技术和理化性质确定化合物的结构.结果 分离得到20个化合物,分别鉴定为白桦脂酸(1),2α,3α,24-三羟基乌苏酸(2),6-O-(E)-sinapoylpoligalitol (3),阿魏酰-6'-O-α-D-葡萄糖(4),7-oxo-β-sitosterol(5),en-tisolariciresinol(6),隐品巴马亭(7),秦皮乙素(8),芹菜素(9),(2E,6S)-2,6-二-甲基-6-O-β-D-吡喃木糖基-2,7-辛二烯酸(10),槲皮素-3-O-(6”-咖啡酰基)-β-D-葡萄糖苷(11),23-环木菠萝烯-3β,25--二醇(12),(1'S,6'R)-8'-hydroxyabscisic acid-β-D-glucoside(13),5,3'-二羟基-3,6,4'-三甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷黄酮(14),橙黄胡椒酰胺乙酸酯(15),5,6,3 ',4'-四羟基-3,7-二甲氧基黄酮(16),熊果酸(17),齐墩果酸(18),4-O-11-methyl-oleoside-p-hydroxyphenyl-(6'-11-methyloleoside)-β-D-Glucopyranoside (19)和6-O-没食子酰基熊果苷(20).结论除化合物8和9外其他均为首次从该植物中分离得到.
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高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定艹杏菜中白桦脂酸的含量
目的：建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法（ HPLC-ELSD 法）测定莕菜中白桦脂酸的含量。方法：采用 Hypersil C18（4.6 mm ×250 mm，5μm）色谱柱，流动相为甲醇-0.2％甲酸（V∶V＝80∶20），体积流量为1.0 ml／min；柱温为30℃；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为40℃，氮气流速为2.0 L／min。结果：白桦脂酸在0.130～0.650μg，线性关系良好，平均回收率为99.17％。结论：HPLC-ELSD法简便、准确、重现性好，可用于莕菜的质量控制。
关键词： 高效液相色谱-蒸发光散射检测法 莕菜 白桦脂酸 -
一测多评法同时测定酸枣仁的多个成分含量
目的:建立一测多评法测定酸枣仁中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、白桦脂酸含量的方法,并验证该方法在酸枣仁中应用的准确性和科学性.方法:以白桦脂酸为指标,采用超高效液相色谱法(UPLC)计算斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B与白桦脂酸的相对校正因子,进而用该校正因子计算其他3种成分含量;同时外标法测定酸枣仁中4种成分含量,比较“一测多评”法所得结果与外标法测得结果的相似度.结果:一测多评法和外标法测得的酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素含量的计算值和实测值之间的夹角余弦值分别为0.999 72,0.999 71和0.998 36,两者相似度较好,没有显著性差异.结论:UPLC可以简便、快速地测出酸枣仁4个成分含量,一测多评法适用于酸枣仁中4种有效成分的含量测定,相对校正因子可信.
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白桦脂酸血浆蛋白结合率的测定
目的 建立白桦脂酸在大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白中蛋白结合率的测定方法.方法 采用平衡透析法测定白桦脂酸血浆蛋白结合率,利用HPLC测定血浆中白桦脂酸浓度,测定并比较不同血浆中白桦脂酸的血浆蛋白结合率.采用DiamonsilTM C18柱,柱温为30℃,流动相为乙腈-0.2％乙酸(75∶25),流速为1.0 mL/min,检测波长为203 nm.结果 在50～100 mg/L,药物浓度对血浆蛋白结合率无显著影响,白桦脂酸与大鼠和人的血浆蛋白结合率存在显著性差异,白桦脂酸与人血浆蛋白结合率高于与大鼠血浆蛋白结合率.结论 白桦脂酸与血浆蛋白具有较强的结合.HPLC法测定白桦脂酸与血浆蛋白结合率试验具有简便、快速、灵敏与选择性高的特点.
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抗癌原料药白桦脂酸生物合成研究取得新进展
本刊讯前不久，中国科学院大学武汉植物园硕士研究生周晨以白桦树树皮为研究材料，从中分离了控制白桦脂酸合成的关键细胞色素氧化酶基因并在微生物酵母细胞中人工重建了白桦脂酸生物合成途径。
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马甲子的化学成分研究
目的 研究马甲子Paliurus ramosissimus的化学成分.方法 马甲子乙醇提取物通过反复硅胶柱色谱和高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质及NMR、MS等波谱技术对化合物进行结构鉴定.并采用MTT法对新化合物2进行体外抗肿瘤活性实验.结果 从马甲子乙醇提取物中分离得到2个化合物,分别鉴定为白桦脂酸(1)和2α,27-二反式对羟基肉桂酰氧基白桦脂酸(2).化合物2对HepG-2细胞和HeLa细胞的IC50分别为20.34、14.83 μmol/L.结论 化合物2为新化合物,命名为马甲子素,属于白桦脂酸型五环三萜类化合物,化合物1和2均为首次从本植物中发现,化合物2表现出显著的体外抗肿瘤活性.
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毛麝香的化学成分研究
目的 对毛麝香Adenosma glutinosum全草进行化学成分研究.方法 采用硅胶柱色谱、ODS、凝胶Sephadex LH-20柱色谱、半制备液相色谱等技术进行分离纯化,经现代波谱数据分析以及物理常数对照等方法鉴定化合物结构.结果 从毛麝香95％乙醇提取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为白桦脂酸(1)、白桦脂醇(2)、3β-羟基-乌苏烷-11-烯-13β,28-内酯(3)、乌苏酸(4)、对羟基苯甲酸(5)、反式对羟基肉桂酸(6)、对羟基苯甲醛(7)、富马酸(8)、己二烯二酸(9)、5,6-二羟基-7,8,4'-三甲氧基黄酮(10)、7-羟基胡椒酮(11).结论 所有化合物均为首次从毛麝香中分离得到.
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夏枯草的化学成分及其三萜成分的抗肿瘤活性研究
目的研究夏枯草Prunella vulgaris果穗的化学成分及其抗乳腺癌细胞活性.方法运用硅胶、ODS、Sephadex LH-20等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据并参考文献鉴定化合物的结构;通过MTT法,对化合物体外抗乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的活性进行筛选.结果从复枯草果穗中分离得到14个化合物,分别鉴定为寡肽(1)、5 α,8α-过氧麦角-6,22-二烯-3β-醇(2)、β-香树素(3)、白桦脂酸(4)、3-羟基-11-烯-11,12-脱氢-28,13-乌苏酸内酯(5)、大戟醇(6)、2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸(7)、candelabrone 12-methyl ether (8)、cyclopentaneacetic acid (9)、2α-羟基熊果酸(10)、α-菠菜甾醇(11)、齐墩果酸(12)、熊果酸(13)、β-谷甾醇(14).结论化合物2、5、6、8和9均为首次从该属植物中分离得到;化合物10和13对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及正常乳腺细胞MCF-10A均具有明显抑制作用;化合物4对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231具有明显抑制作用,而对正常乳腺细胞MCF-10A抑制不明显,能选择性地抑制肿瘤细胞.
