首页 > 文献资料
-
抑制NHE1和p38 MAPK通路增加白血病细胞对伊马替尼的敏感性
本研究旨在探讨抑制NHE1活性和细胞内酸化能否逆转白血病细胞对伊马替尼的耐药,以及慢性髓系白血病(CML)患者细胞的BCR/ABL下游分子网络.对CML患者原代白血病细胞或K562/DOX,K562/G01耐药细胞株进行酸化处理,检测细胞内P-糖蛋白(Pgp)基因及蛋白表达,药物在细胞内蓄积.考察细胞酸化后原代白血病细胞ERK1/2、p38 MAPK磷酸化水平的变化.结果表明:细胞酸化后进展期患者细胞内药物蓄积增加,对伊马替尼的敏感性增强.随着细胞内pH的降低,进展期CML患者的细胞内p38MAPK磷酸化水平呈下降趋势,ERK1/2磷酸化水平3 min时升高、30 min后下降.特异性p38 MAPK抑制剂SB203580可与NHE1抑制剂卡立泊来德协同下调Pgp蛋白的表达.结论:抑制NHE1活性能够显著降低耐药细胞中Pgp表达,增加CML疾病进展期患者细胞中罗丹明123及阿霉素的累积,增加细胞对伊马替尼的敏感性,p38 MAPK信号传导通路参与其中.
-
抑制钠氢交换蛋白下调IL-8表达和促进p38磷酸化
我们前期的研究证明,抑制钠氢交换蛋白1(NHE1)可以减少VEGF表达从而抑制K562细胞诱导的血管生成.本研究探讨抑制NHE1后其他可能的血管生成因子变化及相关机制.用NHE1特异性抑制荆卡立泊来德10 μmol/L处理K562细胞；蛋白芯片筛选NHE1抑制后血管生成因子的表达变化,实时定量PCR验证卡立泊来德处理后白介素-8(IL-8)的表达水平；构建K562稳定干扰NHE1细胞株,实时定量PCR验证干扰NHE1后IL-8的表达变化,Western blot检测卡立泊来德处理后细胞内p38磷酸化水平；p38抑制剂SB203580处理K562细胞,实时定量检测IL-8表达变化.蛋白芯片筛选结果显示,卡立泊来德处理后K562细胞中IL-8表达显著下调；实时定量结果进一步验证了这种抑制效应；卡立泊来德处理后p38磷酸化水平显著上调；卡立泊来德处理后加入SB203580抑制p38,IL-8表达可以部分恢复.结论:抑制NHE1可能通过促进p38磷酸化,下调促血管生成因子IL-8的表达.
-
抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化
本研究主要探讨低氧微环境对慢性髓系白血病细胞系K562分化的影响及钠氢交换蛋白1(NHE1)在该过程中的作用.利用低氧模拟物CoCl2或于低氧(2%O2、5%CO2和93%N2)环境中培养K562细胞,应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(intracellular pH,pH;),瑞氏染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR检测基因表达,Western blot技术检测MAPK磷酸化水平的改变.结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)的mRNA水平上调;特异性NHE1抑制剂Cariporide 预处理能够促进低氧诱导的K562细胞分化,Cariporide处理后K562细胞的P38和ERK5蛋白激酶磷酸化水平显著增强.结论:低氧及低氧模拟物能够诱导K562细胞系分化,抑制NHE1活性协同促进低氧诱导的K562细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK蛋白激酶磷酸化水平促进分化.
-
siRNA沉默NHE1基因对MHCC97-H肝癌细胞侵袭迁移的影响
目的:探讨RNA干扰沉默NHE1基因后对人肝癌细胞株MHCC97-H细胞侵袭迁移的影响,方法:应用NHE1基因小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)转染人肝癌细胞株MHCC97-H细胞,同时设立空白对照组和无关对照组.转染成功后采用RT-PCR和Western blot分别从基因和蛋白水平检测RNA干扰沉默NHE1基因的效果.MTT法测定转染后三组细胞的增殖状况,Transwell小室检测沉默NHE1基因对MHCC97-H细胞侵袭、转移能力的影响,进一步采用免疫荧光观察其对MHCC97-H细胞骨架和伪足的影响,结果:与两对照组比较,转染NHE1-siRNA组NHE1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05);细胞侵袭、迁移实验结果显示,NHE1-siRNA组穿透人工基底膜的细胞数(34.1±5.2,120.2±12.8)较空白对照组(56.9±6.1,235.2±16.8)和转染无关对照组(57.2±6.1,231.9±14.7)均明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),而空白对照组与无关对照组比较差异无统计学意义;MTT结果显示,转染后48 h和72 h-组细胞间增殖活性差异无统计学意义;NHE1基因沉默后与两对照组相比,MHCC97-H细胞膜伪足形成减少,细胞内肌动蛋白网排列紊乱,结论:siRNA沉默NHE1基因后可能通过影响MHCC97-H细胞骨架的重组和伪足的形成,从而抑制MHCC97-H细胞的侵袭和迁移能力.
-
钠氢交换蛋白1及其抑制剂的研究进展
钠氢交换蛋白1(NHE-1)是一种细胞膜蛋白,主要分布于人和哺乳动物的心肌细胞中,调控细胞内外离子交换.目前越来越多的基础研究证实,NHE-1在多种心血管疾病中,尤其是心力衰竭、心肌肥厚、冠心病等的发生、发展中起着重要作用.虽然近十余年来,多项针对NHE-1抑制剂的临床研究结果差强人意,但我们应从中归纳总结、辩证分析,以期寻找到其真正的临床意义.
-
钠氢交换蛋白1在肿瘤侵袭转移中的研究进展
恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病,尽管现代医学技术不断进步,但肿瘤发病率、病死率仍居高不下.肿瘤发病机制目前仍不明确,侵袭、转移是其重要特性,也是患者治疗失败的主要原因,因此深入研究肿瘤侵袭、转移的机制对临床治疗大有裨益.钠氢交换蛋白1(NHE1)是广泛表达于哺乳动物细胞膜表面的离子转运体,近年来研究发现其在肿瘤细胞中过表达,通过改变肿瘤细胞内外pH、降解细胞外基质、改变细胞侵袭性结构等促进肿瘤的侵袭转移,并涉及多种细胞信号通路的改变.随着研究深入,NHE1将为肿瘤的治疗提供新策略.
-
EF-hand对钙调磷酸酶B同源蛋白2的生物学功能影响
目的 探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响.方法 通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法、免疫共沉淀等手段,明确CHP2结合Ca2+的数量、部位,以及对CHP2与NHE1结合的影响;在血清饥饿条件下,观察表达EF-hand突变的CHP2(NHE1/CHP2-EF3m/4m)对细胞生存的影响.结果 分别突变EF-hand结构EF3或EF4,CHP2结合Ca2+减少;同时突变EF3和EF4,CHP2不能结合Ca2+;免疫共沉淀实验结果显示乙二胺四乙酸(EDTA)剥夺CHP2携带的Ca2+之后,CHP2与NHE1结合的数量明显减少;不携带Ca2+的CHP2在细胞内与NHE1结合的数量也明显减少;在血清饥饿条件下,表达不携带Ca2+的CHP2的细胞存活数量减少.结论 CHP2能结合2个Ca2+,结合部位在EF3和EF4;携带Ca2+能增强CHP2与NHE1的结合能力;在血清饥饿条件下,携带Ca2+的CHP2能提升细胞抵抗死亡的能力.
关键词： 钙调磷酸酶B同源蛋白2 钠氢交换蛋白1 EF-hand Ca2+ -
Cariporide对宫颈癌HeLa细胞体外转移及MT1-MMP表达的影响
目的:通过体外实验研究钠氢交换蛋白1(NHE1)特异性抑制剂Cariporide对人宫颈癌HeLa细胞体外转移能力的影响,并初步探讨其作用机制.方法:用Cariporide处理HeLa细胞,采用细胞-基质粘附实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测Cariporide对HeLa细胞的粘附、迁移和侵袭能力的影响;Real-time RT-PCR、Western blot法分别检测Cariporide对HeLa细胞膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)mRNA及蛋白表达的影响.结果:细胞-基质粘附实验结果显示,与对照组相比,Cariporide处理过的HeLa细胞体外粘附率降低25%,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,Caripo?ride处理后,HeLa细胞损伤愈合的速度和穿过滤膜的细胞数量均明显少于对照组;Real-time RT-PCR及Western blot结果表明Cariporide可显著降低MT1-MMP mRNA和蛋白水平的表达量(P 均<0.05).结论:Cariporide可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的体外转移能力,其作用机制可能与降低MT1-MMP的表达有关.
关键词： 钠氢交换蛋白1 膜型基质金属蛋白酶1 粘附 迁移 侵袭 -
钠氢交换蛋白1基因在体外对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭作用的影响
目的:观察钠氢交换蛋白1(Na+/H-exchanger 1,NHE-1)基因对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测NHE-1 mRNA及其蛋白在人食管癌EC-9706、KYSE-450、EC-1和KYSE-70细胞中的表达情况.将化学合成的靶向NHE-1的小干扰RNA (small interference RNA,si RNA)体外转染入KYSE-70细胞,实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法检测转染24、48和72 h后KYSE-70细胞中NHE-1 mRNA及其蛋白的表达,MTT和Boyden小室法检测KYSE-70细胞的增殖及侵袭能力.结果:NHE-1 mRNA及其蛋白在KYSE-70细胞中高表达.与阴性对照(转染阴性对照siRNA)及空白对照(未转染的KYSE-70细胞)组相比,靶向NHE-1的siRNA可抑制KYSE-70细胞中NHE-1 mRNA及其蛋白的表达,差异具有统计学意义(P＜0.05);与阴性对照组、空白对照组及NHE-1 siRNA转染24 h组比较,NHE-1 siRNA转染48和72 h后的KYSE-70细胞体外增殖能力和侵袭能力明显受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:干扰NHE-1基因的表达可以抑制食管癌KYSE-70细胞的体外增殖和侵袭能力,NHE-1基因有望成为食管癌基因治疗的重要靶点.
-
钠氢交换蛋白1抑制剂对严重烧伤后多脏器损伤大鼠的保护作用研究
目的 探讨钠氢交换蛋白1(NHE1)抑制剂对严重烧伤后全身多脏器功能损伤大鼠的保护作用,并探讨其潜在的机制.方法 常规方法建立30%体表面积烫伤的大鼠模型.用NHE1抑制剂(卡立泊来德)干预后,通过观察组织病理学及炎症因子的改变来探讨NHE1在烧伤后多脏器损伤时所起的作用.结果 NHE1在烧伤后大量表达,而NHE1的抑制剂可显著减轻烧伤后心脏、肺脏、肾脏及小肠的损伤.同时NHE1抑制剂也可以降低肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、髓过氧化物酶(MPO)水平.结论 NHE1抑制剂显著减轻烧伤后大鼠多脏器损伤,其部分机制可能是抑制了组织的炎症反应.
-
卡立泊来德对K562细胞诱导的血管生成的影响
目的 研究卡立泊来德(cariporide)处理对K562细胞诱导的血管生成能力的影响.方法 应用MTT检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞增殖能力的影响;transwell 检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞迁移能力的影响;基质胶血管形成法检测K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞体外血管形成能力的影响;激光扫描共聚焦显微镜测定K562细胞的细胞内的pH;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测K562细胞上清中血管内皮生长因子的表达水平.结果 cariporide处理可以明显降低K562细胞上清液对脐静脉内皮细胞增殖,迁移和体外成管能力的诱导;cariporide处理后K562细胞的细胞内pH明显下降,分泌VEGF能力也受到抑制.结论 cariporide能抑制K562细胞的血管生成诱导能力,这种抑制是通过细胞内pH下降以及VEGF分泌减少引起的.
-
NHE1 mRNA在肝癌组织的表达及意义
目的 探讨钠氧交换蛋白1(NHE1)mRNA在原发性肝细胞肝癌组织及癌旁组织的表达及意义.方法 采用RT-PCR检测诊断为HCC患者34例的肝癌及癌旁组织中NHE1 mRNA的表达情况.结果 所有肝癌组织和癌旁组织NHE1均有表达,相对表达量分别为2.892±0.882和0.802 ± 0.206,两者存在显著性差异(P<0.001).作为对照的21例肝组织NHE1的相对表达量为0.872 ± 0.186.肝癌组织与对照肝组织比较存在显著性差异(P<0.001);癌旁组织与对照盯组织比较差异无统计学意义(P>0.10).将从同一患者取材的肝癌组织和癌旁组织检测到的NHE1 mRNA的表达量进行配对t检验,两者间存在显著性差异(P<0.00 1).结论 NHE1 mRNA在肝癌组织的表达增高,可能在肝癌的发尘中起一定的作用.
-
连翘苷对动脉粥样硬化模型大鼠的治疗作用及机制研究
目的:探讨连翘苷对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型大鼠的治疗作用及其机制.方法:将48只清洁级SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、洛伐他汀6mg/kg组、连翘苷50mg/kg组、连翘苷100mg/kg组、连翘苷150mg/kg组,每组8只.实验采用高脂喂饲+右侧颈总动脉球囊损伤+腹腔注射维生素D3的方法复制AS大鼠模型.4周后正常组用等量生理盐水ig,ig洛伐他汀6mg/kg,ig连翘苷50、100、150mg/kg,1次/d,10周后超声下观察右侧颈总动脉形态并计算AS斑块面积;肉眼及光镜下观察右侧颈总动脉形态;检测右侧颈总动脉血管舒缩功能;检测血管组织中AS相关炎性因子和氧化性指标;免疫组化和Western技术检测钠氢交换蛋白1 (Sodium hydrogen exchange protein 1,NHE-1)的蛋白表达水平;PCR技术检测NHE-1的基因达水平.结果:150mg/kg连翘苷可以减小AS斑块面积;提高动脉舒缩功能;降低血管组织细胞间粘附因子-1(IACM-1)、血管细胞间粘附因子-1(VACM-1)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-6(IL-6)含量,增加大鼠组织中NO、SOD含量并减少MDA含量;降低血管组织NHE-1的蛋白表达水平和基因表达水平.结论:150mg/kg连翘苷有可能通过降低NHE-1的基因和蛋白表达减少机体氧化应激,进一步降低AS相关炎性因子,起到治疗AS的作用.
-
钠氢交换蛋白1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响
目的：观察钠氢交换蛋白1（Na＋／H＋，exchanger 1，NHE1）在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达变化，以及对SGC‐7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时逆转录聚合酶链式反应（real time PCR ，RT‐PCR）和免疫印迹（Western Bloting）技术检测比较NHE1在正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞株GES‐1和胃癌细胞株SGC‐7901中的表达；用不同浓度的NHE1特异性阻断剂[5‐（N‐乙基‐N‐异丙基）]阿米洛利[5‐（N‐ethyl‐N‐isopropyl） amiloride （EIPA ）]处理胃癌 SGC‐7901细胞24 h ，MTT法检测其对SGC‐7901细胞增殖的影响。结果 NHE1在人正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞和胃癌细胞中均有表达，但在人胃癌组织和 SGC‐7901胃癌细胞中，其mRNA 和蛋白表达水平均明显增高（P＜0．05）；EIPA10μm／mL ，20μm／mL ，30μm／mL处理，均能抑制胃癌SGC‐7901细胞的过度增殖（P＜0．05），且呈现良好的剂量‐效应关系。结论 NHE1 mRNA和蛋白表达水平在胃癌中表达显著升高；NHE1特异性阻断剂EIPA能抑制胃癌SGC‐7901细胞的增殖，N H E1的改变可能与胃癌细胞的增殖密切相关。
-
钠氢交换蛋白1抑制剂对脓毒症大鼠心脏损伤保护作用的实验研究
目的：观察钠氢交换蛋白1（NHE1）抑制剂对脓毒症大鼠心脏损伤的保护作用，并探讨其可能的机制。方法：常规方法建立大鼠脓毒症模型诱导心脏损伤。将SD大鼠随机分为对照组、脓毒症组和脓毒症治疗组，脓毒症治疗组大鼠注射钠氢交换蛋白1抑制剂卡立泊来德，于伤后12h检测左心室射血分数（LVEF）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK‐MB）、肿瘤坏死因子α（TNF‐α）、白细胞介素6（IL‐6）、髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）和丙二醛（MDA）水平。结果：脓毒症组大鼠心脏损伤高于对照组，表现为LVEF值的降低和LDH、CK、CK‐MB值的升高；脓毒症治疗组大鼠较脓毒症组大鼠心脏损伤显著减轻，表现为 LVEF值的升高、LDH、CK 和CK‐MB值的降低。脓毒症组大鼠TNF‐α、IL‐6、MPO、MDA水平高于对照组，差异有统计学意义；SOD、CAT 和GPx水平低于对照组，差异有统计学意义；治疗组大鼠上述指标显著改善。结论：N H E1抑制显著减轻脓毒症诱导的心脏损伤，其部分机制可能是抑制了炎症反应和氧化应激。
-
钠氢交换蛋白1抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用及其机制
目的 观察钠氢交换蛋白I(NHE1)抑制剂对烧伤脓毒症大鼠肠道损伤的作用,并初步探讨其可能机制. 方法 取SD大鼠90只,按照随机数字表法分为对照组、单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组,每组30只.单纯脓毒症组和NHE1抑制剂组大鼠背部建立20％ TBSAⅢ度烫伤(下称烧伤)模型后,背部创面中心注射2×105 CFU/mL的铜绿假单胞菌ATCC 27853菌液50 μL.烧伤脓毒症模型建立成功后,NHE1抑制剂组大鼠迅速腹腔注射0.1 mmol/L NHE1抑制剂卡立泊来德0.4 mg/kg,单纯脓毒症组大鼠注射同体积的生理盐水.对照组大鼠除不制作烧伤创面和接种细菌外,其余操作与单纯脓毒症组大鼠相同.烧伤脓毒症大鼠在伤后12 h剖腹,于回肠远端注射0.1 mol/L异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖200 mL,30 min后左心室采血,切取回肠末端组织.荧光分光光度计检测大鼠血清FITC-葡聚糖含量(样本数为10),HE染色观察肠道组织形态(样本数为10),ELISA法检测血清和肠道组织IL-6和TNF-α含量(样本数均为20),比色法检测血清和肠道组织髓过氧化物酶(MPO)活性(样本数均为20),蛋白质印迹法检测肠道组织NF-κB-p65蛋白表达及MAPK信号通路相关蛋白p38MAPK、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)以及c-Jun氨基末端激酶1/2(JNKl/2)磷酸化水平(样本数为4).对照组大鼠于相同时相点同前采集标本进行相关检测.对数据行单因素方差分析、SNK检验. 结果 (1)单纯脓毒症组大鼠血清FITC-葡聚糖含量较对照组明显升高(P＜0.01),NHE1抑制剂组大鼠血清FITC-葡聚糖含量则较单纯脓毒症组显著降低(P＜0.01).与对照组比较,单纯脓毒症组大鼠肠黏膜可见大量炎性细胞浸润、黏膜溃疡以及黏膜坏死;NHE1抑制剂组大鼠肠道损伤情况较单纯脓毒症组有显著好转.(2)单纯脓毒症组大鼠血清IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(387±42)、(164.7±10.1)ng/mL及(7.5±1.5)U/mL,显著高于对照组的(75±17)、(13.1 ±6.5)ng/mL和(2.3±0.7) U/mL(P值均小于0.01);NHE1抑制剂组大鼠血清IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(176±37)、(64.9±9.3) ng/mL和(5.9±0.8) U/mL,均显著低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01).(3)单纯脓毒症组大鼠肠道组织IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(190±13)、(172.8±29.7) ng/mL及(8.7±1.5)U/mL,显著高于对照组的(20±3)、(11.9±2.3)ng/mL和(2.9±0.3)U/mL(P值均小于0.01);NHE1抑制剂组大鼠肠道组织IL-6、TNF-α、MPO含量分别为(35±6)、(45.2 ±6.1)ng/mL和(5.3±0.6) U/mL,均显著低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01).(4)单纯脓毒症组大鼠肠道组织NF-κB-p65蛋白表达量和p38MAPK、ERK1/2磷酸化水平显著高于对照组(P值均小于0.01),NHE1抑制剂组大鼠肠道组织NF-κB-p65蛋白表达量和p38MAPK磷酸化水平明显低于单纯脓毒症组(P值均小于0.01),3组大鼠肠道组织JNK1/2磷酸化水平无明显差异(P值均大于0.05). 结论 抑制NHE1可显著减轻烧伤脓毒症诱导的大鼠肠道损伤,其机制可能为通过调控NF-κB及p38MAPK信号通路,抑制肠道炎症反应.
