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  • 陈皮、半夏对衰老脐静脉内皮细胞中PI3K-Akt和磷酸化p38表达的影响

    作者:黄小波;王宁群;陈玉静;赵荣博;陈文强

    目的 研究陈皮、半夏对衰老脐静脉内皮细胞(HUVEC)中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路和磷酸化p38表达的影响.方法 0.25%胰岛素-柠檬酸盐诱导建立HUVEC衰老模型.采用Western blot方法检测陈皮、半夏干预后衰老HUVEC中PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化p38(p-p38)的表达水平.结果 与空白对照组和陈皮半夏对照组比较,诱导衰老组PI3K、p-Akt和p-p38表达显著升高(P<0.01);陈皮半夏干预组、PI3K阻滞组PI3K、p-Akt 和p-p38表达均较诱导衰老组显著降低(P<0.05,P<0.01).结论 陈皮、半夏对衰老HUVEC中PI3K-Akt通路和磷酸化p38的表达有抑制作用.

  • MTT法检测蒲黄提取物对脐静脉内皮细胞增殖的影响

    作者:王远航;黄文权

    目的 观察蒲黄提取物对体外培养的人脐静脉内皮细胞增殖的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法测定不同浓度蒲黄提取物对HUVEC的影响.结果 各浓度蒲黄提取物(100mg/L、75mg/L、50mg/L、25mg/L、10mg/L)均具有显著的促进血管内皮细胞增殖的作用,各浓度之间无明显差异.结论 蒲黄提取物可通过促进脐静脉内皮细胞增殖起到抗动脉粥样硬化的作用.

  • 导痰汤对人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1和p53表达的影响

    作者:陈文强;王玉来

    目的:通过研究导痰汤干预细胞间黏附分子1(ICAM-1)与p53的表达,分析导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制.方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC),传代培养1~3代用于实验.含药血清的制备为将导痰汤按照0.9g·kg-1·d-1剂量给SD大鼠ig 10d后,经腹主动脉采血,分离血清.实验共分7组:正常HUVEC为空白对照组,不含药血清处理HUVEC为空白血清对照组,肿瘤坏死因子α(TNF-α,200 U·mL-1)预处理HUVEC为TNF-α诱导组,先采用5% (0.015 g·mL-1),10% (0.03 g·mL-1),20% (0.06g·mL-1)含药血清预处理HUVEC,再与TNF-α共培养为5%,10%,20%导痰汤组,使用p53特异性阻滞剂PFT-α(0.009g·mL-1)处理HUVEC为PFT-α阻滞组.通过PCR和Western blot等方法,观察导痰汤对TNF-α刺激脐静脉内皮细胞培养内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达和p53表达的影响.结果:①TNF-α诱导组ICAM-1 mRNA和p53 mRNA的表达显著高于正常对照组和导痰汤对照组(P<0.01);使用导痰汤含药血清或PFT-α处理后,ICAM-1和p53 mRNA的表达显著下降(P<0.05);②TNF-α诱导组ICAM-与p53蛋白显著高于正常对照组和导痰汤对照组(P<0.01).使用导痰汤含药血清或PFT-α处理后,ICAM-1与p53表达显著下降(P<0.05);③p53mRNA与ICAM-1mRNA表达水平呈显著正相关(r=0.981,P <0.01);p53活性与ICAM-1水平呈显著正相关(r=0.854,P<0.01).结论:导痰汤可以通过调节p53表达而抑制TNF-α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM-1 mRNA的表达,故能起到治疗动脉粥样硬化的作用.

  • 苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的脐静脉内皮细胞NOX4蛋白表达的影响

    作者:冯晓帆;柳春;赵丹玉;刘恋;王艳杰;洪涌涛;刘博通

    目的:观察苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导的人脐静脉内皮(EA.hy926)细胞中还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)表达等指标的影响,探讨苦荞麦总黄酮在胰岛素抵抗(IR)信号传导通路中的作用机制.方法:将EA.hy926细胞株常规培养、传代,加入终浓度50 nmol·L-的胰岛素,分为空白组、模型组、苦荞麦总黄酮组(31.25,62.5,125 mg·L-1)和二甲双胍组,除空白组外,其他各组先用600 μmol·L-软脂酸造IR模型,苦养麦总黄酮组进一步加入125 mg·L-1苦荞麦总黄酮,二甲双胍组加入2 mmol·L-二甲双胍.利用双抗体夹心法测定非对称性二甲基精氨酸(ADMA)含量,硝酸还原酶法测定NO含量,Western blot测定NOX4蛋白表达.结果:苦荞麦总黄酮中、高剂量组与模型组比较,ADMA含量明显减少,NO含量明显增加,均有显著性差异;苦荞麦总黄酮组高剂量组与模型组比较,NOX4蛋白表达量显著减少.结论:苦荞麦总黄酮可通过抑制软脂酸诱导下产生IR的EA.hy926细胞中NOX4和ADMA的合成来促进NO的合成,进而抑制IR的发生.

  • 导痰汤通过NF-κB信号通路抑制人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的研究

    作者:黄小波;李宗信;王芬;陈文强;王宁群

    目的:研究导痰汤能否通过对核因子-κB( NF-κB)信号通路的调节而干预ICAM-1的表达,以揭示导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制.方法:通过PCR和Western blot等方法,观察导痰汤对肿瘤坏因子-α(TNF-α)刺激脐静脉内皮细胞( HUVEC)培养内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和NF-κB表达的影响.结果:TNF-α诱导组ICAM-1和NF-κB显著高于空白对照组和导痰汤对照组(P<0.01);使用导痰汤含药血清或吡咯烷二硫氧基甲酸( PDTC)处理后,ICAM-1和NF-κB p65表达显著下降(P<0.05,P<0.01);NF-κB活性与ICAM-1 mRNA水平呈显著正相关(r=0.716,P<0.01).结论:导痰汤可以调节NF-κB信号通路,从而有效抑制TNF-α刺激所致的脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达.

  • 黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞抗氧化应激机制探讨

    作者:王红芹;孙明杰;武乾;石晓路;孙丽华;吴旸

    目的:探讨黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞氧化应激的影响.方法:将培养至5代的脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组、模型组、模型+黄芪多糖组、模型+美托洛尔组,观察黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞活性、ROS、LDH、MDA含量、线粒体膜电位的影响.结果:与正常对照组比较,缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞ROS、MDA含量、LDH漏出率均显著升高,线粒体膜电位、细胞活性下降;黄芪多糖干预后,缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞ROS、MDA含量、LDH漏出率降低,线粒体膜电位、细胞活性升高.结论:黄芪多糖可能通过抑制自由基、脂质过氧化产物的生成,减少氧化应激而保护缺血再灌注损伤内皮细胞.

  • 槲皮素对转化生长因子诱导人脐静脉内皮细胞内皮-间质转化的影响

    作者:吴微;杨柳;徐翊

    目的:观察槲皮素对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)-12内皮-间质转化的影响,探讨其作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度槲皮素和/或TGF-β1干预HUVEC-1272 h后细胞活力;RT-PCR和免疫荧光双染检测内皮及间质标记物的转变;Western blot检测信号通路;RT-PCR检测在转变过程中发挥关键调节作用的转录因子。结果 RT-PCR和免疫荧光双染结果均提示,TGF-β1(10 ng/mL)连续刺激HUVEC-1272 h可诱导其转化为成纤维细胞表型,表现出更多的间质标记物升高,内皮标记物降低;Western blot和RT-PCR结果显示,槲皮素呈浓度依赖性抑制smad2/3的磷酸化;TGF-β1刺激后,下游调控内皮-间质转化的重要转录因子snail1、twist1、twist2、ZEB1、ZEB2均明显升高,而100μmol/L槲皮素则可显著下调下游的5种转录因子。结论槲皮素可抑制TGF-β1诱导的HUVEC-12发生内皮-间质转化而发挥抗纤维化的作用。

  • 吉马酮改善H2O2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用

    作者:陈琼芳;王钢;唐丽清;俞献文;李钊飞;杨秀芬

    该文主要研究吉马酮对过氧化氢(H2O2)诱导的脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制.使用500μmol·L-1H2O2诱导脐静脉内皮细胞3h,从而建立氧化损伤模型,再用不同浓度吉马酮(20,40,100,150,200 μmol·L-1)保护24h.利用MTT法检测吉马酮对H2O2损伤HUVECs细胞活力的影响;ELISA法检测PGI2,TXB2,ET-1,t-PA,PAI-1,TNF-α和IL-6;硝酸还原酶法检测NO;比色法检测NOS及GSH-Px;再分别采用TBA法、WST-1法和微量酶标法检测MDA,SOD和LDH的含量等;Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡情况;RT-PCR检测细胞中Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达.结果表明500 μmol·L-1H2O2作用3h细胞损伤率达到52%,而在20~200 μmol·L-1随着吉马酮浓度的增大被损伤细胞活性不断增强.与正常组比较,H2O2损伤使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA降低,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Bax mRNA和Caspase-3 mRNA增加;与模型组比较,吉马酮(200,100,50 μmol·L-1)使PGI2,NO,T-NOS,t-PA,SOD,GSH-Px和Bcl-2 mRNA增加,使PAI-1,ET-1,IL-6,TNF-α,TXB2,LDH,MDA,Ba)xmRNA和Caspase-3 mRNA减少.Hoechst 33258荧光染色与正常组比较,模型组细胞膜与细胞核呈浓缩致密的强蓝色荧光,细胞数量明显减少;与模型组比较,给药组的蓝色荧光强度降低等.以上研究结果表明,吉马酮可能通过抗氧化及抑制细胞凋亡等作用,从而改善H2O2诱导的脐静脉血管内皮细胞氧化应激损伤的作用.

  • pEGFP-VEGF165重组质粒的构建及在血管内皮细胞中的表达

    作者:张璇;胡海梅

    采用PCR技术,从原核表达质粒PUC19-VEGF165中获得上下游含有Hind Ⅲ和BamH I酶切位点的目的基因VEGF165,与真核载体pEGFP-C1构建重组质粒pEGFP-VEGF165,观察其在内皮细胞中的表达.结果 表明,带有绿色荧光蛋白报告基因的真核表达质粒pEGFP-VEGF165构建成功,并在PEI的介导下成功转染脐静脉内皮细胞(HUVEC),在荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,ELISA检测证明VEGF在细胞上清中有效表达,RT-PCR证明了VEGF165 mRNA水平上的有效表达.此研究结果将为再狭窄的基因治疗提供实验基础.

  • 重组人KNDC1腺病毒表达载体的构建及其促HUVEC衰老作用

    作者:李开济;郝晓方;章广玲;魏静波;魏洁;林雅军;甄永占

    目的 构建人KNDC1腺病毒表达载体,观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及功能.方法 扩增KNDC1基因并与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,经筛选、测序确认后转染进HEK293A细胞进行包装;按pAd-enoX试剂盒的步骤纯化重组腺病毒,通过终点稀释法测定病毒滴度;用pAdeno X-KNDC1感染HUVEC,48 h后用Western blot检测KNDC1蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况.结果 经测序确认目的基因KNDC1成功克隆入腺病毒载体中.转染HEK293A细胞后观察到细胞变圆、部分细胞漂浮的特征性病变效应,病毒滴度达到1×1011 PFU.感染了pAdeno X-KNDC1的HUVEC中KNDC1蛋白表达水平显著升高(P<0.05).随着pAdenoX-KNDC1剂量的增加,衰老HUVEC数量增多.结论 人KNDC1腺病毒表达载体构建成功并能促进HUVEC衰老.

  • 骨形态发生蛋白4通过ERK/MAPK信号通路影响人脐静脉内皮细胞的成血管能力

    作者:王琴;仉红刚;卡米拉·阿不里米提;张秋菊;修瑞娟

    目的 研究不同浓度的BMP-4对于脐静脉内皮细胞体外成血管能力的影响并对其作用机制做初步探讨.方法 BrdU参入法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移情况,基质胶法检测细胞体外成血管能力,Western blot 检测phospho ERK1/2表达情况.结果 BMP-4在低浓度时具有抑制HUVEC的增殖,迁移和成血管,然而随着BMP-4浓度的升高,这种抑制作用逐渐减弱,并有恢复至正常水平的趋势.结论 不同浓度的BMP4对于HUVEC的增殖,迁移及成血管能力具有不同的影响,BMP-4可能是通过ERK/MAPK信号通路影响HUVEC成血管能力的.

  • 氟伐他汀对C反应蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

    作者:吕琳;鹿克风;朱兴雷;王爱红;郭玲

    目的 探讨氟伐他汀对C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响.方法 进行HUVECs原代培养,取第3~6代进行实验.分别以5、10、50和100 mg/L浓度CRP作用HUVECs,分别作用6、12和24h,同时用氟伐他汀10-8、10-7、10-6和10-5 mol/L浓度进行干预.用ELISA法测ICAM-1蛋白含量,RT-PCR测ICAM-1 mRNA表达.结果 HUVECs对照组有少量ICAM-1蛋白和mRNA表达;CRP组ICAM-1蛋白和mRNA表达明显增强(P<0.01),且ICAM-1蛋白表达呈浓度和时间依赖性增加(P<0.01);氟伐他汀组ICAM-1蛋白及mRNA表达明显减弱(P<0.01),且氟伐他汀抑制CRP诱导的ICAM-1蛋白表达呈浓度依赖性(P<0.05).结论 氟伐他汀可能通过抑制CRP诱导ICAM-1产生,发挥抗动脉粥样硬化形成的作用.

  • 尿毒症毒素硫酸盐对甲酚对血管内皮细胞的体外作用

    作者:林伟;夏剑岚;王毅

    目的 探讨尿毒症毒素硫酸盐对甲酚(PCS)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的毒性作用及机制.方法 体外培养HUVECs,不同浓度对甲酚硫酸钠盐作用HUVECs,WST-1法检测细胞增殖;Matrigel法检测细胞成血管能力;特异性荧光探针2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞活性氧自由基(ROS)水平;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中炎症因子及黏附分子表达情况.结果 硫酸盐对甲酚对HUVECs增殖及成血管能力未有显著影响,分子机制研究发现,其能显著诱导细胞中ROS水平上调并促进其分泌炎症因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1).结论 尿毒症毒素硫酸盐对甲酚可以加剧血管内皮细胞氧化应激及炎症反应状态,提示其可能参与慢性肾病患者动脉粥样硬化的发生发展.

  • 炎性环境下内皮微粒介导单核细胞促内皮细胞增殖的作用

    作者:王雪颖;王世坤;田铧;索宁;房云海;魏玉梅;扈燕来;宋涛

    目的 探讨炎性环境中内皮微粒(EMPs)在单核细胞参与的促内皮细胞增殖中的作用,并探讨EMPs对单核细胞表达内皮细胞标志物的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激内皮细胞,超速离心法获取EMPs;用透射电镜观察其形态和结构;运用酶联免疫吸附法(ELISA)检测经EMPs激活的单核细胞株THP-1对血管内皮生长因子(VEGF)中VEGF-A、VEGF-C的表达情况;将HUVECs和THP-1细胞或者经EMPs诱导的THP-1细胞共培养,检测HUVECs的增殖情况;运用RT-PCR和免疫荧光细胞化学技术,观察经EMPs激活的THP-1细胞对内皮细胞标志物vWF和血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)的表达情况.结果 内皮细胞经炎性因子刺激后释放EMPs,EMPs刺激的THP-1细胞上清中VEGF-A和VEGF-C蛋白水平明显升高;HUVECs细胞增殖实验中,与THP-1细胞或者经EMPs诱导的THP-1共培养的两种情况下,HUVECs均显著增多;与EMPs共培养3d后,THP-1中vWF和VEGFR-2蛋白表达为阳性,基因表达为阴性,共培养8d后,vWF和VEGFR-2的蛋白和基因表达均为阴性.结论 炎性环境中内皮细胞释放EMPs可以促使单核细胞分泌VEGF-A和VEGF-C,后两者可使HUVECs增殖,EMPs仅能使单核细胞一过性呈现内皮表型,而不能将其转分化为内皮细胞.

  • 金黄色葡萄球菌α溶血素诱导脐静脉内皮细胞凋亡的研究

    作者:管俊昌;刘婷婷;刘勇;马丽娜;夏佩莹

    目的 研究金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)α溶血素诱导脐静脉内皮细胞的凋亡效应. 方法 用不同浓度金葡菌a溶血素感染脐静脉内皮细胞,2、4、8和12 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡率. 结果 金葡菌α溶血素10、30、90和270 ng/ml均可诱导脐静脉内皮细胞发生凋亡,以30 ng/ml时诱导细胞凋亡能力强,作用2 h后细胞即发生凋亡,并随着诱导时间的延长,细胞凋亡率逐渐增加. 结论 金葡菌α溶血素可诱导脐静脉内皮细胞凋亡,并存在明显的时间、剂量效应关系,这可能是金葡菌L型垂直感染影响胎儿宫内发育的重要机理之一.

  • 剪切力对脐静脉内皮细胞凋亡的影响

    作者:乔元华;王云;曾衍钧;颜光涛;胡金麟;张小娟;徐小虎;于晓军;赵虎;徐虹

    内皮细胞的炎症反应和凋亡是动脉粥样硬化过程中的关键环节,因此通过建立HUVEC(人脐静脉内皮细胞)体外培养模型,以LPS(脂多糖)刺激,观察其损伤效应.并在此基础上施加两种大小剪切力,以探讨流体动力学对血管内皮细胞凋亡的影响.同时,观察此过程中IL-6及IL-8的变化.结果显示,LPS加入细胞培养中可明显诱导HUVEC的凋亡,并随着作用时间的延长,细胞凋亡率也相应增加.在此基础上,将两种大小剪切力与LPS共同作用于细胞,发现剪切力(15dyn/cm2)可以抑制LPS诱导凋亡,而剪切力(4dyn/cm2)效果则不明显.同时,剪切力与LPS这两种均能单独诱导IL-6及IL-8分泌的刺激因素并不能协同作用,剪切力会抑制LPS诱导的IL-6分泌.且剪切力(15dyn/cm2)比剪切力(4dyn/cm2)时的抑制作用要强.

  • 人脐静脉内皮细胞抑制单核细胞源树突状细胞的产生

    作者:刘元林;江小霞;苏永锋;霍思维;朱恒;吴英;毛宁;张毅

    本研究旨在探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对树突状细胞(DC)发育的影响.首先,利用酶消化法从人脐带分离获得HUVEC,从细胞形态、表型和功能进行鉴定;进一步将获得的HUVEC结合细胞因子配伍与CD14+单核细胞共培养,检测HUVEC对CD14+细胞向DC分化的影响;流式细胞术检测分化细胞的表型,混合淋巴细胞反应检测分化细胞的免疫学功能;采用中和抗体实验和Western blot检测对细胞增殖和分化起重要调控作用的IL-6和VEGF以及ERK和p38MAPK通路的改变.结果表明,从脐静脉分离获得的细胞呈长梭形形态,细胞表型为vWF+ CD31+ CD73+CD45-HLA-DR-CD86-CD34low,Dil-Ac-LDL吸收实验为阳性,且细胞可诱导形成血管样结构,提示分离获得了HUVEC;进一步将HUVEC与CD14+单核细胞共培养,流式细胞仪检测结果表明HUVEC可抑制CD14+单核细胞向DC的分化,诱导获得的细胞CD1a表达显著降低,混合淋巴细胞检测结果显示,与HUVEC共培养获得的DC刺激T细胞增殖作用显著降低,且具有剂量依赖性;中和抗体实验分析其可能的作用机制表明,IL-6和VEGF在CD14+单核细胞向DC分化过程中具有重要调控作用,Western blot检测结果说明其主要通过ERK和p38通路完成调控作用.结论:人内皮细胞参与DC的发育,且起到抑制作用.

  • 间充质干细胞条件培养液对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和黏附的影响

    作者:郑飞;李霞;张蕾;孔霞;郭凌陨;杨建业;黄永章;唐俊明;王家宁

    本研究探索间充质干细胞(MSC)条件培养液对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和黏附能力的影响及其可能的机制.采用经典全骨髓贴壁法培养MSC,用流式细胞术鉴定MSC表面标志特征.收集MSC条件培养液(MSC-CM),过表达基质细胞细胞衍生因子1(SDF-1)的MSC条件培养液(Ad-SDF-1 -MSC-CM),以2% FBS-DMEM、15% FBS-DMEM培养液为对照,将MSC-CM、Ad-SDF-1 -MSC-CM等条件培养液加入人脐静脉内皮细胞株( CRL1730)作用24 h后,用MTT法检测CRL1730细胞的增殖情况,利用划痕法和黏附模型评价MSC-CM对CRL1730细胞迁移能力和黏附能力的影响.结果表明,与MSC-CM相比,Ad-SDF-1-MSC-CM处理的CRL1730细胞表现出更强的增殖能力,加入阻断剂AMD3100后,MSC-CM所介导的促增殖效应明显降低.MSC-CM、Ad-SDF-1-MSC-CM促进CRL1730细胞的迁移,AMD3100明显抑制其所介导的CRL1730细胞迁移.与MSC-CM相比,Ad-SDF-1 -MSC-CM处理的CRL1730细胞黏附能力明显增强,AMD3100能显著降低其增强CRL1730黏附能力的作用.结论:MSC-CM对CRL1730细胞的促增殖、迁移和黏附能力与其分泌的细胞因子SDF-1密切相关.

  • 人脐静脉内皮细胞内化膜微粒通路的初步探索

    作者:卫小娟;张红超;申征征;王芳;王燕;郭子宽;刘朝中

    目的:探讨人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)内化骨髓间充质干细胞(MSC)来源膜微粒(microparticles,MP)的可能途径.方法:将人骨髓MSC经低氧低营养诱导后收集上清,超速离心机分离提取MP,电子显微镜鉴定其形态及大小;流式细胞术检测MP表面标记物及磷脂酰丝氨酸(PS)的表达;细胞免疫荧光技术观察HUVEC是否表达PS受体(PSR).将DiI标记的MP与HUVEC共孵育,体系中加入PSR封闭性抗体,在共聚焦显微镜下观察MP的内化过程.结果:MSC在低氧低营养条件下诱导产生的膜微粒高表达PS,内皮细胞表面表达PSR.MP可快速进入内皮细胞,并主要分布于细胞核周围胞浆.抗体封闭内皮细胞PSR后,HUVEC内化MP的过程明显受抑,抑制率达80%以上.结论:MSC-MP表面的PS与HUVEC表面PSR的特异性结合,是MP内化的关键环节.

  • TNF-α刺激的人脐静脉内皮细胞组织因子表达及其分子机制

    作者:宋善俊;王林林;魏文宁

    为探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在肿瘤坏死因子(TNF-α)刺激下组织因子(TF)的表达及其分子机制,用流式细胞术检测HUVEC膜表面TF蛋白的表达,用RT-PCR方法检测TF mRNA的表达和用Western印迹方法检测HUVEC核蛋白中核因子κB(NF-κB).结果发现,TNF-α能刺激HUVEC细胞膜表面TF表达增加,其增加与TF mRNA合成增加具有高度一致性,且TF表达的增高滞后于mRNA升高数小时之后;TF表达增加的同时伴有核蛋白(κB)显著的活化.结论:TNF-α刺激HUVEC后,迅速活化NF-κB,启动TF的转录,TF mRNA表达增加,TF蛋白合成增加,导致TF在HUVEC膜表面表达增加,激活凝血途径.

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