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复方叶下珠对人HepG 2.2.15细胞移植裸鼠HBxAg表达的影响
中药复方叶下珠是深圳市中医院肝病中心结合乙型肝炎所致肝癌和癌前病变患者临床特点,通过辨证论治、精心设计并显示有较好临床疗效的经验方.本研究选择Balb/c-nu小鼠人肝癌细胞(HepG 2.2.15)移植瘤模型,以复方叶下珠进行处理,研究造模前后裸鼠的形态学、HBxAg表达等相关指标,试图从在体动物角度,为复方叶下珠的肝癌防治作用提供试验依据.
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融合蛋白anti-CD19（Fab）-LDM对B细胞淋巴瘤的抑制作用
目的：探讨融合蛋白anti?CD19（Fab）?LDM在体内对B细胞淋巴瘤生长的抑制作用。方法利用流式细胞检测技术分析anti?CD19（Fab）?LDP抗体与B型淋巴瘤细胞体外免疫结合活性，并分析其平衡解离常数。建立Balb/c裸鼠Raji细胞移植瘤模型，活体成像技术观察Cy5标记的anti?CD19（Fab）?LDP在裸鼠体内靶向定位作用。将融合蛋白anti?CD19（Fab）?LDM经尾静脉注射入Raji荷瘤裸鼠体内，观察其对肿瘤生长的抑制情况，计算抑瘤率，评价疗效。结果 anti?CD19（Fab）?LDP抗体与靶抗原的亲和活性与anti?CD19（Fab）抗体相当，两者的平衡解离常数分别为3.3×109M-1和4.3×109M-1。成功建立Raji淋巴瘤细胞皮下移植瘤模型，体内活体成像结果表明，融合蛋白anti?CD19（Fab）?LDP可靶向定位到肿瘤部位。融合蛋白anti?CD19（Fab）?LDM对裸鼠移植性CD19+B细胞淋巴瘤的生长具有抑制作用，并且具有剂量依赖性。结论融合蛋白anti?CD19（Fab）?LDM，具有较强的特异抗肿瘤疗效，作为抗体靶向药物，在B系淋巴瘤治疗中具有很好的应用前景。
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南瓜蛋白抗人慢性髓系白血病细胞系K562的作用研究
本研究观察南瓜蛋白(Cucurmosin,cus)在人慢性髓系白血病(CML) K562细胞-NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤和白血病模型体内抗肿瘤活性.采用建立K562-NOD/SCID小鼠皮下移植瘤和白血病模型,分别使用二种模型评价CUS在小鼠体内的抗K562活性.结果表明,给药剂量为0.5 mg/kg和1 mg/kg的CUS对人CML皮下移植瘤的抑瘤率分别为53.45％和59.43％;而剂量为0.25 mg/kg和0.5 mg/kg的CUS给药组小鼠的生存时间分别为39.8±5.5d和43.4±6.6d,抑瘤率分别为24.9％和36％.结论:CUS对小鼠体内人CML细胞系K562具有显著的抑制作用.
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黄芩苷对高致瘤HL-60细胞裸鼠移植瘤模型的体内抑瘤作用和机制探讨
本研究旨在探讨黄芩苷对高致瘤人白血病HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的体内抑瘤作用及其作用机制.制备高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为6组:阴性对照组(注射5％ NaHCO3),黄芩苷25、50和100 mg/kg剂量组,联合用药组(黄芩苷50 mg/kg + VP16 2 mg/kg)和VP16 4 mg/kg阳性对照组,每组10只裸鼠.采用腹腔注射方式给药,14 d后每组处死5只裸鼠,对剥取的瘤块称重计算抑瘤率；通过电子显微镜观察瘤组织超微结构,病理组织学观察裸鼠各主要脏器结构改变,瘤块组织蛋白检测信号转导通路指标.观察裸鼠生存时间.结果表明,黄芩苷可抑制裸鼠HL-60细胞皮下移植瘤的生长,呈剂量依赖性.瘤组织病理组织学和透射电子显微镜检查结果显示,黄芩苷组和联合用药组的肿瘤坏死和细胞凋亡现象较阴性对照组多见.黄芩苷可能通过抑制Akt活性,下调p-Akt、mTOR和p-mTOR的表达来抑制裸鼠异种移植瘤的增长.联合用药组裸鼠中位生存时间明显长于阴性对照组(P＜0.05).结论:黄芩苷可抑制高致瘤HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的生长,诱导瘤组织中HL-60细胞的凋亡,其机制之一可能与抑制Akt活性并下调PI3 K/Akt/ mTOR信号通路有关；黄芩苷与VP16联用可明显提高荷瘤裸鼠的中位生存期,具有协同抗高致瘤HL -60细胞裸鼠异种移植瘤的作用.
关键词： 黄芩苷 HL-60细胞 移植瘤模型 PI3K/Akt信号通路 BABL/c裸鼠 -
磁性纳米Fe3O4颗粒协同化疗药物及5溴汉防己甲素在荷瘤鼠体内逆转耐药的研究
本研究探讨5溴汉防己甲素(5-Brlret)、磁性纳米Fe3O4(Fe3O4-MNP)协同化疗药在动物模型体内逆转耐药的作用及其作用机理.建立恶性血液病荷瘤鼠模型,将其随机分为5组.A组:生理盐水;B组:单用DNR;C组:5-BrTet复合DNR;D组:Fe3O4-MNPs复合DNR;E组:Fe3O4-MNPs复合DNR及5-BrTet.观察各组肿瘤生长特征,肿瘤重量、体积.取各组肿瘤以及心、肝、肾等脏器行组织病理观察.Western blot检测耐药肿瘤BCL-2,BAX,以及caspase-3表达.结果表明:对于K562移植瘤,B、C、D、E 4个组之间肿瘤抑制率没有明显的差别.对于K562/A02移植瘤,Fe3O4-MNP复合DNR及5-BrTet可明显抑制移植瘤的增殖,促进肿瘤细胞凋亡;肿瘤组织病理观察显示肿瘤坏死明显.5-BrTet联合Fe3O4-MNP抑制K562/A02移植瘤的BCL-2蛋白的表达,下调BAX和caspas-3的表达.结论:在耐药肿瘤动物模型体内,Fe3O4-MNPs协同DNR和5-BrTet具有很强的肿瘤抑制作用.
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弥漫性大B细胞淋巴瘤裸鼠脑内移植瘤模型的建立
原发中枢神经系统弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是较为独特的中枢神经系统淋巴瘤类型,临床进展快,常规治疗不理想,预后较差[1-4].深入探讨原发中枢神经系统DLBCL的临床与病理特征,寻找治疗的新切入点和改善预后具有重要的意义.建立稳定的脑肿瘤模型无疑是研究该肿瘤发生、发展、侵袭、转移等各种生物学行为必要和必需的条件.为此,我们参照于宝华等[5]建立DLBCL移植瘤模型的经验,尝试将人DLBCL细胞株Lyl和Ly8接种于裸小鼠(裸鼠)脑实质内,成功建立了DLBCL裸鼠脑内移植瘤模型,为该肿瘤的进一步研究奠定了基础.
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IL-2联合IL-12激活A-NK细胞治疗人肝癌HepG-2
目的:研究A-NK细胞体外抗肿瘤作用及小鼠体内抗肿瘤作用.方法:用淋巴细胞分离液分离健康人外周血中的血单个核细胞,PME(5 mmoL/L)室温处理40 min,PME处理后的人外周血单个核细胞重悬于AIMV中.分为四组分别为:IL-2(6 MU/L)组,IL-2(1MU/L)组,IL-12(5 ug/L)组,IL-2(1 MU/L)+IL-12(5 ug/L)组;每瓶细胞浓度为5×109/L,于37℃,50 mL/L CO2饱和湿化空气的培养箱中水平培养4-5 h,移去含未黏附于塑料表面的细胞悬液,收集黏附于塑料表面的细胞(即A-NK细胞),MTT比色法检测A-NK细胞体外细胞毒作用;然后建立肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型,以肿瘤体积、抑瘤率、生存期等指标观察A-NK对移植瘤的抑制作用.结果:A-NK+IL-2+IL-12组细胞毒活性明显高于其他三组(aP＜0.05),体内实验表明A-NK+IL-2+EL-4/IL-12治疗组的移植瘤生长速度缓慢,体积明显小于生理盐水对照组(bP＜0.05),生存期显著延长(cP＜0.05).结论:IL-12辅助IL-2激活的A-NK细胞的体外杀伤活性较单独用IL-2或IL-12强,体内实验显示具有明显的抗肿瘤作用.
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DPC4基因转染对结肠癌血管生成的影响
目的:研究DPC4基因转染对结肠癌血管生成的影响.方法:利用脂质体介导转染技术建立表达Smad4蛋白的DPC4+-SW620(PcDNA-DPC4转染的SW620细胞)细胞模型;Western blot检测细胞中Smad4的表达;利用ELISA法检测细胞上清中VEGF蛋白的表达;利用RT-PCR检测细胞内VEGF mRNA的表达;利用皮下注射法建立裸鼠结肠癌移植瘤模型;利用免疫组织化学S-P法检测裸鼠肿瘤组织中VEGF的表达及微血管密度.结果:建立了表达Smad4蛋白的DPC4+-SW620细胞系;DPC4+-SW620细胞,其Smad4蛋白表达于细胞质及细胞核,以胞质为主;DPC4+-SW620细胞其Smad4蛋白表达水平明显高于SW620细胞及PcDNA-SW620细胞(PcDNA3.1转染的SW620细胞);DPC4+-SW620细胞其VEGF蛋白、VEGFmRNA水平明显低于SW620细胞及PcDNA-SW620细胞(P＜0.05);成功地建立了裸鼠结肠癌移植瘤模型;DPC4+-SW620组裸鼠肿瘤生长速度慢于SW620细胞组及PcDNA-SW620细胞组(P＜0.05);DPC4+-SW620组裸鼠肿瘤重量低于SW620细胞组及PcDNA-SW620细胞组(P＜0.05);DPC4+-Sw620组裸鼠肿瘤组织VEGF蛋白、肿瘤组织微血管密度均低于SW620细胞组及PcDNA-SW620细胞组(P＜0.05).结论:DPC4能够抑制裸鼠结肠癌移植瘤的生长.
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卵巢癌原位移植-转移动物模型的建立
卵巢癌具有早期可发生盆腔、腹腔内种植转移或淋巴结转移的特点,不仅是病人死亡的主要原因,也是临床治疗的难题,卵巢癌转移动物模型将是研究卵巢癌转移的生物学行为和进行实验治疗的重要工具.常用的裸鼠皮下移植瘤模型和腹水瘤模型因与人卵巢癌自然生物学过程存在差距,在实际应用中受到限制.近年,人们发现如能将人肿瘤组织移植到受体动物的对应组织或器官(即原位移植),从而获得与人体内实际情况相似的微环境,不仅移植成功率高,而且移植瘤易发生类似病人的转移,且转移率高 [1].本实验即采用一株具有高转移特性的卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞株HO-8910PM,利用原位转移技术建立了裸鼠卵巢癌转移模型,现报道如下.
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高强度电脉冲对卵巢上皮性癌组织中基质金属蛋白酶9及其抑制物1蛋白表达的影响
近年来研究发现,高电压、高频率、低脉宽的电脉冲可以在保持细胞膜完整的情况下,对细胞内结构发挥作用,在蛋白水平影响细胞的能量代谢、生长和功能[1-2].高强度电脉冲作用于肿瘤组织,可激活体内能量转换和物质代谢,使信号传导途径发生改变,肿瘤细胞发生坏死及其侵袭能力受到抑制,但具体机制尚不明确.肿瘤细胞浸润和转移的先决条件是细胞外基质降解,使细胞基底膜完整性受到破坏.细胞外基质成分均能被基质金属蛋白酶(MMP)降解,基质金属蛋白酶抑制物(TIMP)对MMP起抑制作用.MMP表达水平与肿瘤的浸润和转移能力呈正相关关系,与肿瘤的细胞分化程度、病理分级及临床预后相关[3].本实验利用卵巢上皮性癌(卵巢癌)裸鼠皮下移植瘤模型,观察高强度电脉冲对卵巢癌组织中MMP-9、TIMP-1蛋白表达的影响,并分析MMP-9/TIMP-1值的变化,为电脉冲治疗卵巢癌提供理论依据.
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构建卵巢上皮性癌原位移植瘤动物模型的新方法
构建卵巢上皮性癌(卵巢癌)的动物模型方法包括:裸鼠皮下移植瘤模型[1],腹腔移植瘤模型[2],裸鼠网膜移植瘤模型[3],原位移植-转移瘤模型[4]等.原位移植因为可以提供给被移植物类似于人体的微环境所以有广阔的应用前景.目前的原位移植技术主要是用细胞株构建裸鼠皮下移植瘤作为供瘤体,切成小块后在解剖显微镜下打开卵巢的包膜,将组织块植入卵巢实质[5].该技术只能间接反应卵巢癌细胞株的特点;此外难度高,需要解剖显微镜等特殊仪器.本研究在实验过程中巧妙地使用了一种新方法,将细胞悬液直接注射到小鼠的卵巢实质内,成功地建立了糖尿病合并重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠卵巢癌模型,现报道如下.
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c-myc和K-ras对小鼠卵巢上皮细胞体外转化和体内致瘤的研究
目的 探讨癌基因c-myc和K-ras在卵巢癌发生发展中的作用.方法 用逆转录病毒转基因系统,将正常的c-myc基因和突变的K-ras基因先后导入小鼠卵巢上皮(MOSE)细胞,建立表达c-myc和K-ras基因的细胞株,分别称为MOSE-Myc细胞、MOSE-Ras细胞和MOSE-RM细胞.通过细胞增殖实验、克隆形成实验、体外侵袭实验以及体内成瘤实验,研究转基因后MOSE细胞生物学特性的改变及恶性转化.结果 c-myc和K-ras基因容易被重组逆转录病毒导入MOSE细胞,转导后靶细胞内分别有相应的c-myc或K-ras mRNA转录,以及相应的c-myc(62 000)和K-ras(21 000)蛋白的表达.MOSE-Ras组和MOSE-RM(MOSE-Ras/Myc)组细胞增殖能力显著强于MOSE和MOSE-Myc组(P＜0.01),MOSE-RM组细胞增殖能力显著强于MOSE-Myc组(P＜0.05).MOSE-Ras和MOSE-RM组在软琼脂培养中均能形成克隆集落,而MOSE组和MOSE-Myc组不能形成克隆集落.MOSE-Ras组和MOSE-RM组能够穿透Matrigel,具有侵袭能力.MOSE-Ras组和MOSE-RM组细胞在裸鼠体内形成肿瘤,且肿瘤组织细胞仍然可见有K-ras和c-myc蛋白的表达;而MOSE组和MOSE-Myc组无肿瘤形成.结论 重组逆转录病毒载体作为转基因的工具,转导效率高,可稳定表达,可以感染正常的细胞;突变的K-ras可使MOSE发生恶性转化,在体内形成肿瘤;c-myc作为一个核转录调节因子,不能使MOSE发生恶性转化,但可协同其他因子,加强其他因子的功能.
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重组人生长激素对人胃肠道肿瘤细胞生长影响实验研究
人生长激素(hGH)具有促进蛋白质合成,加速脂肪酸分解氧化,纠正负氮平衡,调节免疫功能的作用.重组人生长激素(rhGH)对消化道恶性肿瘤患者术后进行代谢调理治疗,明显促进了肿瘤患者的康复.但人生长激素(hGH)作为一种生长因子能促进正常细胞的增生分裂,故有学者认为它可以促进肿瘤细胞的生长.因而肿瘤患者术后能否使用rhGH存在争议.本研究通过体外实验探讨rhGH对人胃、直肠癌细胞株BGC823、HR8348生长的影响以及建立裸鼠人胃癌细胞移植瘤模型探讨rhGH在体内对人胃癌细胞生长的影响,为临床胃、直肠癌患者术后能否应用rhGH进行代谢调理提供一定的参考.
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高淋巴结转移兔舌癌移植瘤模型建立的研究进展
舌癌发病率高,且早期易发生颈部淋巴结转移,而是否发生淋巴结转移对患者的治疗和预后会产生重大影响.动物模型在舌癌的研究中起着十分重要的作用,兔具有一定免疫力,更适合于舌癌及其淋巴结转移机制的研究,是目前常用的舌癌动物模型.而建立具有高淋巴结转移潜能的动物模型尤为必要,它将推动舌癌防治和淋巴结转移规律的研究.
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不同方法建立的人大细胞肺癌裸鼠移植瘤模型的生物学特点
目的 比较三种常用的皮下移植瘤造模方法建立的人大细胞肺癌NCI-H460裸鼠移植瘤模型的不同生物学特点,为不同的研究寻找合适的造模方法提供实验依据.方法 分别用NCI-H460细胞,NCI-H460移植瘤组织块和移植瘤匀浆液对于BALB/c-nu/nu裸鼠建立皮下移植瘤模型,运用一般生物学指标观察三种移植瘤的成瘤率、瘤重、倍增时间和组织形态；采用全自动生化分析仪检测其外周血中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、血糖(Glu)、尿素氮(BUN)和肌酐(CREA)等生化指标；利用血球分析仪检测白细胞总数(WBC)并进行分类,后体外对其腹腔巨噬细胞吞噬活性和NK细胞活性进行了考察.结果 本实验中细胞法和匀浆法的成瘤率及肿瘤生长速率显著高于埋块法且其生长更为均一,差异较小.接种5周后,与正常裸鼠比较,三组荷瘤小鼠血液中ALT、AST显著升高,BUN、CREA显著降低,埋块组的AST和BUN两项指标显著高于其他两荷瘤组.此外,接种2周后,荷瘤裸鼠的GLU显著低于正常裸鼠,匀浆液组的GLU降得低.白细胞中,三种方法组荷瘤小鼠血液中LYM％、MN％、HGB均有降低,匀浆液组和细胞培养组的荷瘤小鼠血液中WBC、NEUT％、PLT显著高于埋块组.免疫细胞活性方面,两种细胞均呈现出正常细胞组＞匀浆组＞细胞组＞埋块组的趋势.结论 细胞培养法接种数量可控,肿瘤生长均匀,适合建立不同实验需求的移植瘤模型,组织块移植法适于建立中药抗肿瘤筛选的动物模型,而匀浆液移植法则不推荐使用.裸鼠的生理生化状态和免疫功能与肿瘤的生长有密切的关系.
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促进重点实验室向高技术水平深层次发展的体会
本实验室进行了十几年的实验动物转基因技术应用的基础性研究.先后制备了裸鼠小鼠人喉癌移植瘤模型、裸杂鼠乳腺移植瘤模型.对人鼠移植与鼠间移植的异同,移植瘤的生物学特性,微波对移植瘤的影响等进行了研究.
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重组血管内皮抑素对荷人食管鳞癌裸鼠VEGF-C和LYVE-1表达水平的影响
目的 研究重组血管内皮抑素(ES)对荷人食管鳞癌裸鼠血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(LYVE-1)的调节作用.方法 构建人食管鳞癌裸鼠模型,6只瘤周皮下注射ES稀释液荷瘤裸鼠作为A组,6只瘤周皮下注射生理盐水荷瘤裸鼠作为B组,6只正常裸鼠作为C组,比较三组血清LYVE-1、VEGF-C的表达水平,观察ES对荷瘤裸鼠LYVE-1和VEGF-C基因表达的影响.结果 A、B组血清VEGF-C水平分别为(155.26±10.24)、(180.23±15.64)pg/L,均高于C组的(103.15±13.20)pg/L,差异具有统计学意义(P<0.01);A组血清VEGF-C水平低于B组,差异具有统计学意义(P<0.05).A、B组血清LYVE-1水平分别为(65.32±16.29)、(90.58±10.67)pg/L,均高于C组的(28.31±10.36)pg/L,差异具有统计学意义(P<0.01);A组血清LYVE-1水平低于B组,差异具有统计学意义(P<0.05).A、B组组织内VEGF-C、LYVE-1的PCR扩增倍数均高于C组,差异具有统计学意义(P<0.01);A组组织内VEGF-C、LYVE-1的PCR扩增倍数低于B组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 通过重组ES对TE-1食管鳞癌细胞荷瘤裸鼠干预,重组ES不仅抑制肿瘤新生血管的生成,而且重组ES可能通过抑制肿瘤组织内VEGF-C和LYVE-1的表达,对肿瘤新生淋巴管的发生起到抑制作用.
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柯萨奇病毒腺病毒受体在肺癌中的表达和意义
目的:明确柯萨奇病毒腺病毒受体(CAR)在正常肺组织、癌旁组织及肺癌组织中的表达情况以及在体外CAR失表达对人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞增殖与侵袭迁移的影响.方法:收集肺癌手术切除新鲜标本100例及其对应的癌旁组织和正常肺组织,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法检测CAR蛋白和mRNA的表达情况;在体外运用RNAi技术建立稳定的低表达CAR的人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞系,用平板克隆形成实验和Transwell侵袭及迁移实验观察RNAi抑制CAR基因表达对NCI-H520肺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响,并通过建立动物模型动态观察瘤体的生长.结果:免疫组织化学结果显示,CAR阳性率为48%.Western blot法检测CAR蛋白和RT-PCR检测CAR mRNA在肺癌组织中明显高于正常肺组织和癌旁组织.筛选得到三组CAR基因表达受到抑制的NCI-H520稳定细胞系.半定量RT-PCR和Western blot结果显示,三组稳定细胞系中CAR mRNA和蛋白质表达均有不同程度的下降,其中shRNA-2抑制作用强.平板克隆形成实验显示,shRNA-2抑制CAR基因表达后,NCI-H520细胞的增殖能力有所下降(P>0.05),Transwell侵袭及迁移实验显示,NCI-H520细胞侵袭迁移能力明显下降(P<0.05).动物模型结果显示,抑制CAR的表达,则动物体内移植瘤的生长就会缓慢.结论:CAR与肺癌形成和进展有关,并能够促进肺癌细胞的侵袭和迁移活动.裸鼠肺癌移植瘤模型构建成功,为以后肺癌的研究奠定基础.利用RNAi有效抑制了CAR基因的表达,并抑制NCI-H520细胞在裸鼠体内瘤体的生长,CAR有望成为肺癌基因治疗的靶点之一.
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信号素4D影响直肠癌裸鼠移植瘤的血管新生
目的：本文利用慢病毒介导的RNA干扰，在结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型中研究信号素4D（Sema4D）对血管新生的影响。方法：包装制备对照慢病毒和Sema4D shRNA干扰慢病毒，感染直肠癌细胞HCT-116。Transwell迁移实验检测对照组和干扰组诱导内皮细胞迁移的能力。对照组和干扰组分别接种于裸鼠双侧腋窝皮下。观察记录肿瘤生长，收获移植瘤做免疫组化和免疫荧光检测。结果：研究发现干扰Sema4D的表达能减弱癌细胞诱导内皮细胞迁移的能力，显著减缓移植瘤生长速度并降低瘤内血管密度。结论：由于Sema4D在诱导血管新生中的作用，干扰其信号通路将可能通过抑制血管新生来阻止肿瘤生长或转移，因此Sema4D有可能成为肿瘤抗血管新生疗法中有价值的治疗靶点。
