人脐带血造血干/祖细胞在裸鼠体内的毒性

利用人脐带血造血干/祖细胞(HS/PCs)移植来重建造血和免疫功能,是目前临床上对血液系统恶性肿瘤患者进行化疗的一种有效辅助治疗方法.

掌叶半夏提取物的有效部位不同给药途径对人宫颈癌细胞株CaSki裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察不同给药途径下掌叶半夏提取物的有效部位(PE)对CaSki裸小鼠皮下移植瘤的抑制作用,以探索PE的体内佳给药途径.方法:建立CaSki裸小鼠皮下移植瘤模型,待移植瘤体积增至大约100mm3,将裸小鼠随机分为阴性对照组、灌胃组、腹腔注射组、皮下注射组、顺铂阳性对照组.测量肿瘤径线,计算肿瘤体积并描绘肿瘤生长曲线.药物处理21d,第22天颈椎脱臼处死裸小鼠,称取瘤重,计算抑瘤率.HE染色观察移植瘤组织形态,免疫组化检测移植瘤组织中Ki-67的表达情况.结果:灌胃组、腹腔注射组、顺铂阳性对照组裸小鼠移植瘤重量明显小于阴性对照组和皮下注射组(P＜0.05),抑瘤率分别为38.71％,31.86％,45.92％.且灌胃组、腹腔注射组移植瘤组织K i-67表达明显低于阴性对照组和皮下注射组(P＜0.05).结论:PE能够抑制CaSki裸小鼠皮下移植瘤的生长,其体内实验的佳给药途径可以是灌胃或者腹腔注射,推荐实验中采取灌胃方式.抑制Ki-67的表达可能是PE体内抑瘤作用机制之一.

健脾解毒复方中药对裸鼠肝癌模型PTEN/ERK1的影响

目的:探讨肝癌裸鼠不同肝组织PTEN/ERK1的表达及健脾解毒复方中药对其的影响.方法:采用人肝细胞癌细胞株Bel-7402间接原位移植,造雄性肝癌裸鼠模型90只,造模24 h后随机分9组,即不同浓度复方中药A～G组,FT207化疗组,生理盐水组,10只裸鼠不造模作为正常对照组,给药每天1次,8周后处死裸鼠,免疫组化二步法检测肝组织、癌旁组织和癌组织PT]EN/ERKI的表达情况.结果:荷瘤裸鼠肝脏PFEN蛋白表达强度正常肝组织>癌旁组织>癌组织.中药组B,D,E组眦N在正常肝组织的表达高于生理盐水组、化疗组、正常照组,(P<0.05).中药组D组PTEN在癌旁组织的表达高于生理盐水组,(P<0.05),中药组在癌组织中PTEN的表达高于生理盐水组和化疗组,(P<0.05).荷瘤裸鼠肝脏ERK1蛋白表达强度癌组织>癌旁组织>肝组织,癌旁组织ERK1表达强度化疗组高于中药组和生理盐水组,癌组织ERK1表达强度生理盐水组和化疗组均高于中药C,D,E,G,F组.在癌组织中,PTEN和ERKl的表达呈负相关,(P<0.01).结论:在肝癌的发生发展过程中PTEN的缺失或突变可能导致了ERK1的过度活化,健脾解毒复方中药可能对PTEN/ERK1有良性调节作用.

人鼻型NK/T细胞淋巴瘤的裸鼠移植与传代

鼻型NK/T细胞淋巴瘤是常见的淋巴结外非B细胞淋巴瘤[1],在东南亚国家和地区发病率较高,具有特殊临床表现、免疫表型和生物学行为,肿瘤组织均存在不同程度的凝同性坏死和黏膜溃疡形成[2,3].实际工作中,局部活检组织多较小,除做常规病理诊断和免疫表型检测外所剩无几,致使对该肿瘤的研究工作难以深层次进行.为此,建立该肿瘤实验动物模型,模拟其体内生长状态是值得尝试和探讨的途径之一,但由于实验材料匮乏,工作非常困难,经检索尚未见成功报道.我们将人鼻型NK/T细胞淋巴瘤的实体瘤组织种植于BALB/c裸小鼠皮下,形成移植瘤,并成功传代.

弥漫性大B细胞淋巴瘤裸鼠脑内移植瘤模型的建立

原发中枢神经系统弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是较为独特的中枢神经系统淋巴瘤类型,临床进展快,常规治疗不理想,预后较差[1-4].深入探讨原发中枢神经系统DLBCL的临床与病理特征,寻找治疗的新切入点和改善预后具有重要的意义.建立稳定的脑肿瘤模型无疑是研究该肿瘤发生、发展、侵袭、转移等各种生物学行为必要和必需的条件.为此,我们参照于宝华等[5]建立DLBCL移植瘤模型的经验,尝试将人DLBCL细胞株Lyl和Ly8接种于裸小鼠(裸鼠)脑实质内,成功建立了DLBCL裸鼠脑内移植瘤模型,为该肿瘤的进一步研究奠定了基础.

人胰腺癌原位移植模型MRI增强扫描特征及病理对照研究

目的 探讨人胰腺癌原位移植瘤模型的MRI影像学表现及其病理基础.方法 应用3.0T磁共振成像仪及临床型乳腺线圈对30只胰腺癌裸鼠原位模型行冠状位及横断位TSE-T1 WI/T2 WI平扫,经腹腔注射钆喷酸葡胺(Gd-DTPA)行连续动态增强扫描,测量平扫和增强扫描各时相肿瘤信号强度,计算强化率,分析MR图像特征并与病理对照.结果 30只裸鼠荷瘤接种成功率为100%,组织学检查符合胰腺低分化腺癌.与邻近组织信号相比,90%(27/30)肿瘤T1 WI呈均匀稍低信号,10%(3/30)信号欠均匀;80%(24/30)肿瘤T2 WI呈不均匀高信号、内见斑片状更高或等信号区,20%(6/30)呈均匀等高信号.平扫肿瘤信号强度为228.35±11.71,增强扫描后1.5、3、6,9、12 min的肿瘤信号强度分别为258.20±11.17、301.75±17.09、358.65±25.13、480.05±19.01、558.35±40.49,均明显高于平扫(P值均<0.01);各时相强化率分别为0.13±0.04、0.35±0.11、0.56±0.10、1.10±0.10、1.45±0.18,各时相间差异均有统计学意义(P值均<0.01).MR强化明显区为供血丰富的肿瘤生长活跃区域,中央无强化区为坏死组织和(或)肿瘤细胞致密且毛细血管较少区域.结论 经腹腔注射对比剂后可获得清晰的移植瘤MRI图像,与病理检查结果具有很好的一致性.

外周血干细胞移植治疗裸小鼠心肌缺血模型的研究

天花粉蛋白对荷人肝癌裸小鼠的抑癌作用

目的探讨天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)对荷人肝癌裸小鼠的抑癌作用.方法采用人肝癌原位移植模型.将24只裸小鼠分为TCSI组、TCSlⅡ组、TCSⅢ组和对照组,TCS剂量分别为0.2 mg/kg、0.4 mg/kg、0.6 mg/kg,对照组用生理盐水0.2 ml/只腹腔注射,共10次.第21天称瘤重和裸小鼠体重,计算抑癌率.应用免疫组织化学技术,检测瘤组织中Ki67的表达.结果对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组平均瘤重分别为0.99g、0.81 g、0.22 g和0.20 g.用药组瘤重与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组抑癌率分别为18.18%、77.78%、79.80%.对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组平均鼠重增加为2.22 g、1.22 g、0.28 g、-2.37 g.用药组与对照组鼠重变化有显著性差异(P＜0.05).对照组、TCSⅠ组、TCSⅡ组和TCSⅢ组Ki67蛋白阳性表达百分率分别为31.33%、29.92%、10.25%和9.67%.TCSⅠ组Ki67百分率与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).TCSⅡ组和TCSⅢ组Ki67百分率与对照组相比有显著性差异(P＜0.05).结论 TCS对荷人肝癌裸小鼠的移植瘤有明显的抑癌作用.TCS抑制肿瘤细胞增殖可能是其抑癌的机制之一.

人胆囊癌裸鼠原位移植瘤模型的建立及初步观察

胆囊癌恶性程度较高,临床预后较差.为了寻找一种能更接近人体内胆囊癌特性的动物模型,我们通过瘤组织块原位接种建立了裸小鼠的胆囊癌原位移植瘤模型,现报告如下.

保持人肝癌生物学特性的人肝癌组织裸鼠肝内种植模型的建立

目的建立保持人肝癌特性的裸鼠肝内种植模型.方法用新鲜的人肝癌组织种植于裸鼠肝脏;B型超声观察种植瘤的体积变化;解剖及显微镜下观察种植瘤的转移情况及组织细胞病理特征;免疫组化和RT-PCR法测定其MDR1和LRP;SPECT检测荷瘤鼠骨转移情况.结果第1代种植8只裸鼠,2 w后种植瘤100%存活,并分泌AFP;8～10 w内有肝内转移的占75.0%,骨转移占37.5%,10 w末处死模型鼠,有肺转移的占37.5%;种植瘤的病理特征与瘤源患者肝癌一致;种植瘤与原肿瘤源组织MDR1、LRP蛋白及其mRNA表达差异均无显著性(P＞0.05).第2和第3代模型鼠各8只,种植后2w 100%存活;10～14w裸鼠出现衰竭症状后其肝内、肺和骨均有转移.结论该模型保持了人肝癌生物学特性,可用于体内研究人肝癌的模型.

靶向β-catenin短发夹RNA抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的 探讨靶向β-catenin的短发夹RNA(shRNA)对人结肠癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用.方法 构建两个靶向β-catenin的短发夹RNA的质粒载体CAT1、CAT2和阴性对照质粒Neg,并将其转入人结肠癌Colo205细胞,分组种植到裸鼠皮下以建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.随后观察监测各组裸鼠的肿瘤生长情况.第8周裸鼠处死并剥离出肿瘤组织,HE染色观察肿瘤细胞的形态,免疫组化方法检测β-catenin蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况. 结果各组裸鼠的内脏未受到明显的毒害和损伤.第8周CAT1、CAT2实验组裸鼠移植瘤的体积和质量与空白对照组相比均有显著性缩小(P <0.05),抑制率大约在50%左右.而且与空白对照组相比,CAT1、CAT2组移植瘤的β-catenin表达均有显著性下调,肿瘤细胞凋亡指数均有显著性的升高(P <0.05).阴性对照组的上述指标与空白对照组相比差异均无统计学意义.结论 所构建的靶向β-catenin的短发夹shRNA能够抑制人结肠癌Colo205细胞裸鼠移植瘤的生长,为结肠癌基因治疗开辟新的思路.

"彗星"分析法检测人癌裸鼠移植瘤的放射敏感性

目的探讨"彗星"分析法应用于人实体肿瘤放射敏感性检测的可能性.方法应用"彗星"分析法,以尾力距之比(RTM)作为终指标,检测人肺腺癌、人食管鳞癌和人鼻咽鳞癌等3种人癌裸小鼠移植瘤的放射敏感性.裸小鼠移植瘤组织被消化并稀释成细胞浓度为4×104ml的单细胞悬液后,分成对照组(0Gy)和不同剂量照射组,照射组分别给予2、5、10和15Gy的6MVX射线的冰上照射,照射后立即进行"彗星"分析.结果3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未照射时(0Gy)的尾力矩(TM)差异有显著性意义(F=9.11,P＜0.01).不同剂量(2、5、10和15Gy)照射后,3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未做校正时的TM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为:肺腺癌＞食管鳞癌＞鼻咽鳞癌,显然与临床一般印象不符;而经与对照组进行"本底"校正后的RTM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为:食管鳞癌＞鼻咽鳞癌＞肺腺癌,则符合临床一般印象.结论①应用"彗星"分析法检测实体肿瘤的放射敏感性,尾力矩必须进行"本底"校正,即扣除对照组本底误差后的尾力矩才能很好地反映实体肿瘤的放射敏感性差异.②"彗星"分析法可用于检测人体肿瘤组织的放射敏感性.

顺铂联合X射线照射人鼻咽癌裸小鼠移植瘤生物效应的实验研究

目的 探讨顺铂联合X射线照射对鼻咽高分化鳞癌(CNE-1)裸鼠移植瘤抑瘤率和CyclinB1、CyclinD1转录水平的影响.方法 建立CNE-1裸鼠移植肿瘤模型后随机分成对照、顺铂、急速照射、模拟调强放疗(IMRT)和模拟IMRT加顺铂组,照射剂量为单次20 Gy,顺铂剂量为15μg/g体重.绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤抑制率,并用RT-PCR方法测定各组肿瘤组织中CyclinB1、CyclinD1的转录水平.组间比较行单因素方差分析.结果 对照、顺铂、急速照射、模拟IMRT和模拟IMRT加顺铂组肿瘤抑制率分别为-129.1％、-71.2％、42.5％、35.3％和47.1％[急速照射与模拟IMRT组不同(P =0.034),但急速照射与模拟IMRT加顺铂组相似(P=0.222)]；CyclinB1转录水平分别为0.429、0.386、0.322、0.354和0.268[急速照射与模拟IMRT组、模拟IMRT加顺铂组均不同(P=0.007、0.000)]；CyclinD1转录水平分别为0.716、0.583、0.348、0.495和0.296[急速照射与模拟IMRT组不同(P =0.000),但急速照射与模拟IMRT加顺铂组相似(P=0.072)].结论 20 Gy单次X射线照射和加顺铂均能缩小肿瘤体积,但单用顺铂仅能延缓生长；20 Gy单次X射线照射和加顺铂以及单纯顺铂均可致CyclinBl、CyclinD1转录水平下调；而模拟IMRT因时间延长可使肿瘤抑制率下降和CyclinB1、CyclinD1下调减弱,但联合顺铂后或许能补偿这种降低效应.

恶性脑胶质瘤亚临床肿瘤分割照射方案优化的实验研究

目的 观察比较不同分割方案对人脑胶质瘤裸小鼠移植瘤亚临床肿瘤的剂量效应关系,筛选分割照射的优化方案.方法 采用人脑胶质母细胞瘤裸小鼠移植瘤亚临床肿瘤为实验模型进行不同总剂量(40、60 Gy)、不同分割方案(200 cGy5次/周、160 cGy2次/d、300 cGy5次/周和400cGy3次/周)及靶向药泰欣生联合常规分割照射.观察指标为成瘤率、肿瘤复发时间及肿瘤基底大径,总观察时间为24周.结果 总剂量40 Gy时大分割组近期疗效较好(400 cGy3次/周疗程结束时成瘤率为0),无论采用何种分割方案均未能阻断肿瘤持续生长.总剂量60 Gy时常规分割的控制效果差(成瘤率为100％),超分割方案的效果相对好(远期控制为25％),其次为300 cGy5次/周(远期控制为12.5％),400 cGy3次/周相对较差(近期控制较远期好).靶向药泰欣生联合常规分割60 Gy照射无改善作用.结论 对控制恶性脑胶质瘤亚临床肿瘤常规分割模式尚不是一个优化方案,超分割160 cGy2次/d和300 cGy5次/周是相对优化方案.

胶质瘤干祖细胞可诱导宿主脑胶质细胞癌变

目的 探讨可移植性人癌组织重构过程中,肿瘤干细胞植入方与宿主受体间的关系.方法 将红色荧光蛋白(RFP)基因稳定转染于已建株的胶质瘤干祖细胞SU3,再将建立的SU3-RFP细胞接种于表达绿色荧光蛋白(GFP)的裸小鼠脑内.取移植瘤组织,筛选高增殖力GFP细胞,单克隆化后,鉴定细胞类型,测定其DNA含量,行染色体显带分析.并将建系的GFP细胞H1和H9分别接种于裸小鼠腋下和颅内,观察致瘤率和癌性表型.结果 在可移植性肿瘤组织中,RFP、GFP和RFP/GFP细胞的比例分别为(88.99±1.46)％、(5.59±1.00)％和(4.11±1.02)％.经2次单克隆化的宿主GFP细胞株H1和H9,在体外表现出无限增殖、接触抑制消失、超四倍体等癌细胞特征,并表达少突胶质细胞特异性标志蛋白2’,3’-环腺苷酸-3’-磷酸二酯酶(CNP).H1和H2细胞的体内致瘤率均为100％,肿瘤均向接种周围组织呈广泛侵袭性生长.结论 在可移植性胶质瘤模型中的肿瘤细胞,并非像传统观点那样均由移植的肿瘤干祖细胞产生,被接种的肿瘤干细胞侵袭的宿主脑细胞也可以转化为肿瘤细胞.

人原发性肝恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立

目的建立人肝原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型,为探讨肝恶性淋巴瘤发病机制和实验治疗提供工具.方法采用人肝原发性恶性淋巴瘤术中新鲜瘤组织块植入裸小鼠肝实质内,观察原位移植成瘤率和移植瘤的侵袭、转移,并进行形态学(光镜、电镜、免疫组织化学)、血清学、染色体核型和流式细胞分析.结果在裸小鼠体内建成了一株人肝原发性恶性淋巴瘤原位移植模型(HLBL-0102).移植瘤的组织病理学为原发性肝恶性淋巴瘤(非霍奇金B细胞性),免疫组织化学显示,CD19、CD20、CD45和CD79a阳性,CD3、CD7阴性,甲胎蛋白(AFP)阴性,乙型肝炎病毒表面抗原(HbsAg)阳性,乳酸脱氢酶(LDH)1267.5 U/L.染色体众数范围55～59条;移植瘤细胞DNA指数值1.57～1.61,均为异倍体.HLBL-0102在裸鼠体内生长3年,已经传至37代,共移植裸鼠283只,其肿瘤的移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%.人原发性肝恶性淋巴瘤在裸鼠肝内自主侵袭性生长,瘤细胞侵入并破坏临近肝组织和门脉区内胆管及静脉,无其他组织、器官侵犯及远处淋巴结累及.结论 HLBL-0102是首次建立成功的人原发性肝恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,完整地模拟了人原发性肝恶性淋巴瘤患者的自然临床病理过程,为研究原发性肝恶性淋巴瘤生物学和实验治疗提供了理想的动物模型.

人脑恶性胶质细胞瘤组织裸小鼠原位移植模型的建立

目的 建立人脑间变性星形细胞瘤的裸小鼠原位移植模型,并探讨移植瘤细胞的生长状况.方法 将表达表皮生长因子受体(EGFR)的新鲜人脑间变性星形细胞瘤的手术标本移植于裸小鼠右尾状核并传代,观察各代移植瘤的生长特性及组织学特点.结果 移植瘤在裸小鼠右尾状核已连续传至7代,向周围鼠脑侵袭性生长;瘤细胞排列紊乱,核大深染且异型明显;移植瘤中EGFR的表达率为70%.结论 本法建它的人脑间变性星形细胞瘤的原位模型能够真实地模拟其原发脑肿瘤的生物学特性,为进一步对间变性星形细胞瘤的放、化疗等实验研究提供可靠的动物模型.

胶质瘤动物模型的制作

目的 探讨如何建立适合长期治疗的胶质瘤动物模型.方法 将C6胶质瘤株移植到雌性Balb/c无胸腺小鼠右肩皮下建立6只荷瘤鼠模型,观测肿瘤生长曲线、苏木素和伊红染色病理组织切片、流式细胞仪碘化丙啶染色液染色细胞周期划分及凋亡分析、免疫组织化学法测定胶质纤维酸性蛋白.结果 6只雌性Balb/c无胸腺小鼠右肩皮下均生长出持续增大的肿瘤(100%),生长曲线符合三次方程曲线(P＜0.001).苏木素和伊红染色显示符合恶性星型细胞瘤的表现.流式细胞仪碘化丙啶染色液染色显示大部分肿瘤细胞处于G0～G1期(90.26±3.15)%,S期(7.71±1.11)%,G2-M期(2.03±0.79)%.免疫组织化学法测定胶质纤维酸性蛋白,显示胞浆强阳性,证实为神经胶质来源.结论 皮下移植肿瘤细胞于裸小鼠形成的胶质瘤动物模型可靠且稳定.

T细胞缺陷裸小鼠部分肝切除肝再生异常

目的 利用小鼠70%肝切除模型探讨T细胞在肝再生过程中的调控作用.方法 对T细胞缺陷裸小鼠以及对照小鼠行70%肝切除术,检测小鼠肝质量体质量比、BrdU渗入水平、增殖细胞核抗原(PCNA)和M期标志蛋白p-HDAC3的表达量、血清转氨酶水平.结果 裸鼠肝质量体质量比的恢复明显晚于对照小鼠,BrdU渗入水平以及PCNA和p-HDAC3表达量的高峰出现时间点晚于对照小鼠,但肝损[]伤程度低于对照小鼠.结论 T细胞参与肝再生的调控,T细胞缺陷会延缓肝再生进程.

裸小鼠淋巴结的解剖和组织学特点

目的:研究裸小鼠淋巴结的解剖学和组织学特点.方法:使用手术显微镜解剖20只BALB/c裸小鼠和20只BALB/c小鼠,通过免疫组织化学方法比较了两者淋巴结中T淋巴细胞和B淋巴细胞表达的不同.结果:平均每只裸小鼠中包含23个淋巴结和一组大型淋巴结群.裸小鼠颈部淋巴结分布密度较高,其中颌下淋巴结及颈浅淋巴结在裸小鼠中大多数为2个(构成比分别为95％和90％),而在小鼠中大多数为4个(构成比分别为95％和90％),两者差异有统计学意义.无论小鼠还是裸小鼠的颈深淋巴结均为2个(构成比分别为100％和95％),两者差异无统计学意义.裸小鼠淋巴结中CD3阳性的T淋巴细胞减少.细胞膜和细胞质着色的CD3阳性表达的T细胞在裸小鼠的表达阳性率为15％,在小鼠的表达阳性率为100％,两者表达的差异有统计学意义.细胞膜阳性表达CD20的B细胞在裸小鼠中的阳性率为95％,在小鼠中的阳性率为100％,两者表达的差异无统计学意义.结论:裸小鼠淋巴结分布的解剖图对于初学者有一定的帮助,裸小鼠颈部淋巴结密度较高的解剖学特点和缺乏CD3阳性的T淋巴细胞将有助于更好地理解裸小鼠的淋巴结转移机制.