改良"彗星"分析法检测鼻咽癌放射敏感性的初步研究

目的评价改良"彗星"分析法应用于预测临床鼻咽癌放射敏感性的价值.方法应用改良"彗星"分析法对105例鼻咽癌患者放射治疗前的鼻咽活检组织标本进行分析.将鼻咽癌活检标本制备的单细胞悬液分为对照管和单次5Gy照射管.所有病例在放射治疗前及至50Gy时行螺旋CT或MRI检查,分别测量肿瘤大横截面积(S0为疗前,S50为疗中至50Gy时).临床放射敏感性评价应用肿瘤大横截面积的消退率表示[即Rs=(S0-S50)/S0],Rs≥0.9为高度敏感,0.7≤Rs＜0.9为中度敏感,Rs＜0.7为不敏感.实验室根据图像特点将"彗星"图分为Ⅰ A、Ⅰ B、ⅡA、ⅡB四类,根据尾力矩、DNA积分吸光度等参数设定实验室放射敏感性判断标准.统计分析采用SPSS10.0软件包,用Kappa分析法进行临床和实验室结果一致性分析.结果全组患者临床放射敏感性高度敏感41例,中度敏感21例,低敏感43例.改良"彗星"分析法放射敏感性敏感58例,不敏感47例.改良"彗星"分析法的敏感性为71.0%,特异性为67.4%,准确性为69.5%.两种检测方法接近中高度一致性(Kappa=0.38).结论改良"彗星"分析法检测人鼻咽癌活检标本,在放射治疗前能对鼻咽癌的临床放射敏感性作出预测,方法简单、检测周期短,具有较强的临床应用潜力.

"彗星"分析法检测人癌裸鼠移植瘤的放射敏感性

目的探讨"彗星"分析法应用于人实体肿瘤放射敏感性检测的可能性.方法应用"彗星"分析法,以尾力距之比(RTM)作为终指标,检测人肺腺癌、人食管鳞癌和人鼻咽鳞癌等3种人癌裸小鼠移植瘤的放射敏感性.裸小鼠移植瘤组织被消化并稀释成细胞浓度为4×104ml的单细胞悬液后,分成对照组(0Gy)和不同剂量照射组,照射组分别给予2、5、10和15Gy的6MVX射线的冰上照射,照射后立即进行"彗星"分析.结果3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未照射时(0Gy)的尾力矩(TM)差异有显著性意义(F=9.11,P＜0.01).不同剂量(2、5、10和15Gy)照射后,3种人癌裸小鼠移植瘤细胞未做校正时的TM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为:肺腺癌＞食管鳞癌＞鼻咽鳞癌,显然与临床一般印象不符;而经与对照组进行"本底"校正后的RTM所反映放射敏感性由高到低的变化趋势依次为:食管鳞癌＞鼻咽鳞癌＞肺腺癌,则符合临床一般印象.结论①应用"彗星"分析法检测实体肿瘤的放射敏感性,尾力矩必须进行"本底"校正,即扣除对照组本底误差后的尾力矩才能很好地反映实体肿瘤的放射敏感性差异.②"彗星"分析法可用于检测人体肿瘤组织的放射敏感性.

UCN-01增加鼻咽癌细胞放射敏感性的相关机制

目的在前期研究基础上,进一步探讨UCN-01增加鼻咽癌细胞放射敏感性的相关机制.方法应用流式细胞仪和凋亡试剂盒测定不同条件下CNE-1细胞的凋亡比例.应用彗星分析法测定不同实验组肿瘤细胞在照射后不同时间的DNA损伤程度,用以观察UCN-01对CNE-1细胞修复DNA损伤能力的影响.结果照射+UCN-01组与单纯照射组相比,细胞总凋亡比例仅有轻微增加(14.9%:13.6%),其中主要表现为早期凋亡比例轻度增加(5.0%:3.9%),两组细胞晚期凋亡比例相仿(9.9%:9.7%),细胞凋亡不是UCN-01对CNE-1细胞放射增敏的主要机制.照射后加入UCN-01组细胞的尾力矩下降速度较单纯照射组明显降低,即DNA的修复速度降低,两组的半修复时间分别为3.1、0.4 h,说明UCN-01使CNE-1细胞修复放射性DNA损伤的能力下降.结论 UCN-01未明显增加放射后CNE-1细胞的凋亡比例;UCN-01使细胞修复放射性DNA损伤的能力降低可能是该药放射增敏的重要机制之一.

彗星分析法/免疫系统——启动身体自愈能力/本草植物——天然完整的营养来源

碱性"彗星"法检测肺癌放射敏感性初步研究

目的采用碱性彗星法检测肺癌标本的初始DNA单链断裂,探讨碱性彗星法用于预测临床肺癌的放射敏感性的可行性.方法对2002年4月～2003年8月在本院经纤维支气管镜取样并为病理证实的150例肺癌标本采用碱性彗星法检测初始DNA单链断裂,以经本底较正的平均尾力矩(RTM)和平均中位尾力矩(mRTM)为评价指标;采用SPSS 10.0统计软件包以单因素方差分析法比较不同病理类型平均较正尾力矩差异,并分析影响结果的相关因素.结果纤维支气管镜取样,多数样品细胞数较少;样品质量对结果影响较大,35%样品中位RTM≤1.0,无显著性差异,全组平均较正尾力矩在不同病理类型中的分布均未显示出与临床一致的趋势,在细胞数小于100的样品中可见小细胞大于非小细胞的趋势;全组平均中位较正尾力矩尤其在中位RTM＞1.0的样本中,显示与临床放射反应一致分布趋势,但样本小,结果无统计学差异.结论碱性彗星法可初步显示不同病理类型肺癌细胞间的放射敏感性差异,样品质量对结果影响较大,分析方法有待改进完善.

中性彗星分析法检测肿瘤细胞的放射敏感性

[目的]研究中性彗星分析法检测肿瘤细胞内在放射敏感性的可靠性和影响因素.[方法]人鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE-1和人纤维肉瘤细胞株HT1080细胞,用6MV X线以0、100、200、300、400、600、800、1000cGy等不同剂量点照射,克隆形成法制定存活曲线,比较其放射敏感性的差异.然后进行两种细胞于600cGy照射后1、2、4、8h的中性彗星分析,以尾力矩为指标,动态检测不同时间点残留的DNA双链断裂,并与克隆形成分析结果相比较.[结果]克隆形成分析法显示CNE-1细胞的放射敏感性低于HT1080细胞,其2Gy照射后存活分数(SF2)和平均致死剂量D0值分别为0.397、0.331和1.898、1.287.两种细胞在照射后1、2、4h的中性彗星尾力矩分别为0.148±0.106、0.100±0.083、0.058±0.043和0.297±0.179、0.157±0.092、0.092±0.060,各时间点之间有显著性差异(P＜0.05),但差别逐渐减小;照射后2h和4h的尾力矩比值分别为0.637和0.630,与SF2比值和D0比值的倒数(0.834和0.678)较接近;两种细胞照射后8h的尾力矩比较差异无显著性.[结论]中性彗星分析法与克隆形成分析法的检测结果有确切的相关性,照射后一定时间内的残留DNA双链断裂有可能成为检测肿瘤细胞放射敏感性的指标.

彗星分析法研究靶向SMPD1的siRNA对小鼠卵母细胞凋亡的保护作用

目的 建立彗星分析小鼠卵母细胞凋亡的模型,研究靶向酸性鞘磷酯酶1(SMPD1)的siRNA对卵子自发性凋亡的保护作用.为建立新的生殖保护方法奠定基础.方法 通过同源性分析并结合siRNA设计软件设计并化学合成靶向SMPD1的3条siRNA,用超排卵技术对雌性BALB/c小鼠进行超排卵并杀鼠取卵,利用显微注射的方法将siRNA分别导人超排获得的小鼠卵子.分别于48 h和72 h观察卵子形态学变化,通过彗星分析检测卵细胞DNA破坏程度来分析卵子自发性凋亡情况.结果 彗星分析法观察到小鼠卵母细胞在体外培养24 h可见少量DNA泳出,48 h可见大量DNA泳出:通过显微注射导人siRNA 48 h后的彗星分析结果显示,其中1对siRNA注射组,即siRNA003组的卵母细胞泳出量与其它2个siRNA注射组及对照组相比显著降低(P<0.01),其它2对siRNA注射组与对照组无明显差异.结论 靶向SMPD1的siRNA能够有效保护卵子的自发性凋亡,有望成为新的生殖保护方法.