首页 > 文献资料
-
信号素4D影响直肠癌裸鼠移植瘤的血管新生
目的：本文利用慢病毒介导的RNA干扰，在结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型中研究信号素4D（Sema4D）对血管新生的影响。方法：包装制备对照慢病毒和Sema4D shRNA干扰慢病毒，感染直肠癌细胞HCT-116。Transwell迁移实验检测对照组和干扰组诱导内皮细胞迁移的能力。对照组和干扰组分别接种于裸鼠双侧腋窝皮下。观察记录肿瘤生长，收获移植瘤做免疫组化和免疫荧光检测。结果：研究发现干扰Sema4D的表达能减弱癌细胞诱导内皮细胞迁移的能力，显著减缓移植瘤生长速度并降低瘤内血管密度。结论：由于Sema4D在诱导血管新生中的作用，干扰其信号通路将可能通过抑制血管新生来阻止肿瘤生长或转移，因此Sema4D有可能成为肿瘤抗血管新生疗法中有价值的治疗靶点。
-
Sema4D/Plexin-B1在氟性骨损伤发生中作用的实验研究
目的 探讨信号素4D(Sema4D)及受体丛状蛋白B1(Plexin-B1)在氟性骨损伤发生中的作用.方法 SPF级SD大鼠48只,随机分为1个对照组和3个染氟组,采用氟化钠(NaF)溶液饮水染毒,3个染氟组NaF染毒浓度分别为1.6、16和32 mg/kg.在染氟第0天、第15天、第30天和第90天时,进行大鼠尾动脉取血,分别测定各时段血氟(微量电极法)、ALP(全自动生化分析仪法)和Sema4D/Plexin-B1(ELISA法).结果 染氟30 d后,3个染氟剂量组大鼠均发生氟斑牙,表现为下切牙色泽度差,表面棕、白色带增宽,横纹不规则甚至消失,并可见牙齿缺损.大鼠血氟与ALP随染毒剂量增加和时间延长呈升高趋势,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).大鼠Sema4D含量在染氟第15天开始降低,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).染氟第30天,高剂量组(12.20±0.73 ng/L)和中剂量组(13.70±0.68 ng/L)大鼠Sema4D含量下降明显,与对照组(19.20±0.68 ng/L)比较差异有统计学意义(P<0.01).染氟第90天,高、中、低剂量组大鼠Sema4D含量分别为(11.14±0.66)、(11.73±0.68)和(13.72±0.71)ng/L,与对照组(19.87±0.69 ng/L)比较明显降低(P<0.01).大鼠Plexin-B1含量也随着染氟时间的延长而有所下降,且高、中2个剂量组大鼠Plexin-B1含量下降较为明显,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 染氟组大鼠血清中Sema4D和Plexin-B1表达量明显降低,大鼠氟性骨损伤的发生可能与Sema4D/Plexin-B1表达水平有关.
-
siRNA沉默Sema 4D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响
目的:观察siRNA沉默信号素4D(semaphorin 4D,Sema 4D)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响.方法:构建靶向Sema 4D基因的siRNA,脂质体法转染MDA-MB-231细胞系,通过实时荧光定量-PCR、Western blotting检测干扰效率,筛选有效序列.siRNA有效干扰MDA-MB-231细胞Sema 4D表达后,CCK-8法及Transwell迁移实验检测细胞增殖及迁移能力的变化.结果:Sema 4D siRNA转染MDA-MB-231细胞后Sema 4D的(mRNA及蛋白)表达水平明显下降(P＜0.05),其中以siRNA-C明显(P＜0.05);与空白、阴性对照组相比,siRNA-C沉默MDA-MB-231细胞Sema 4D表达可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖(均P＜0.05),同时明显减弱细胞的迁移能力[穿膜细胞数:(105.60±12.07) vs(196.20±9.04)、(186.40 ±6.69)个,均P＜0.05].结论:siRNA沉默Sema 4D可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并抑制细胞迁移,可作为乳腺癌基因治疗的潜在位点.
-
RNA干扰Semaphorin 4D表达对乳腺癌细胞增殖、周期及迁移的影响
目的:研究Semaphorin 4D (Sema 4D)表达沉默对乳腺癌细胞增殖、周期及迁移的影响,初步探讨该蛋白在乳腺癌发生和发展中的作用.方法:实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测Sema 4D在不同转移潜能的乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7中的表达水平.采用短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)慢病毒感染法,建立Sema 4D稳定低表达的MDA-MB-231细胞系,然后采用CCK-8法、FCM法、划痕愈合实验及Transwell迁移实验检测细胞增殖、周期分布及迁移能力的变化.结果:Sema 4D在MDA-MB-231细胞中表达水平明显高于MCF-7细胞(P＜0.05); shRNA慢病毒感染可明显下调MDA-MB-231细胞中Sema4D的表达;与空白对照组比较,Sema 4D干扰组的MDA-MB-231细胞增殖明显被抑制(P＜0.05),G0/G1期细胞所占比例明显增高(P＜0.05),而细胞迁移能力明显降低(P＜0.05).结论:Sema 4D在高转移潜能的乳腺癌MDA-MB-231细胞中高表达,shRNA干扰Sema 4D表达可抑制该细胞的增殖和迁移,并阻滞细胞周期于G1期.
-
抑制Sema 4D表达介导的成骨前体细胞AKT磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移中的作用
目的 探讨抑制Sema 4D介导的成骨前体细胞AKT磷酸化水平上调在乳腺癌骨转移中的作用.方法 通过siRNA技术构建稳定的Sema 4D低表达人乳腺癌MCF-7细胞株,采用实时荧光定量PCR检测细胞Sema 4D mRNA表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力;采用Transwell小室建立成骨细胞和乳腺癌细胞的共培养体系,茜素红染色实验检测骨矿化能力,Western blot检测AKT、p-AKT蛋白表达.结果 MCF-7细胞Sema 4D mRNA相对表达量显著高于Hs578Bst细胞(P＜0.05).Sema 4D siRNA转染后,Sema 4D siRNA组Sema 4DmRNA相对表达量显著低于Control组和NC组(均P＜0.05),Control组和NC组Sema 4D mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Sema 4D siRNA组细胞增殖率显著低于NC组和Control组(均P＜0.05),Sema 4D siR-NA组细胞侵袭率亦显著低于NC组和Control组(均P＜0.05).MCF-7+ OM组和Sema 4D siRNA+OM组骨结节面积显著低于Control+ OM组(均P＜0.05),Sema 4D siRNA+ OM组骨结节面积显著高于MCF-7+ OM组(均P＜0.05).Control+OM组、MCF-7+ OM组、Sema 4D siRNA+OM组AKT蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05);MCF-7+OM组和Sema 4D siRNA+OM组p-AKT蛋白表达水平显著低于Control+OM组(均P＜0.05),Sema 4D siRNA+ OM组p-AKT蛋白表达水平显著高于MCF-7+ OM组(P＜0.05).结论 人乳腺癌细胞系MCF-7 Sema 4D表达显著上调,并与细胞增殖、侵袭等生物学行为有关;下调Sema 4D表达,能够提高AKT磷酸化水平,减弱对成骨细胞分化的抑制作用.
-
信号素4D在结直肠癌组织中的表达及其与微血管密度的关系
目的:探讨结直肠癌组织中信号素4D(semaphorin4D,Sema4D)的表达及其与微血管密度(microvessel density,MVD)的相关性.方法:回顾性分析2014至2015年间在云南省肿瘤医院结直肠外科接受结直肠癌根治性手术的61例患者的临床病理资料;采用免疫组织化学SP法检测该组患者的结直肠癌组织标本及其56例癌旁组织中Sema4D蛋白的表达水平;采用微血管密度计数法计数用CD34标记的微血管.结果:Sema4D主要表达于结直肠癌细胞膜及细胞质,癌旁组织细胞质内呈阴性表达.癌组织Sema4D表达阳性率(61/61)明显高于癌旁组织(0/56),差异有统计学意义(x2=113.027,P＜0.001).Sema4D与MVD两者作相关性分析,两者有显著的正相关(r=0.333,P=0.009).MVD表达量在Sema4D表达高低组间存在显著差异(P=0.003).结论:Sema4D在结直肠癌组织高水平表达,且与MVD存在明显的正相关性,提示其有望成为潜在的结直肠癌血管治疗靶点.
