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Western blot检测TRAF3通路产物变化在青黄散治疗骨髓增生异常综合征的机理
目的 应用Western blot检测人骨髓增生异常综合征细胞(MUTZ-1)在明雄黄和靛玉红(青黛提取物)治疗后TRAF3通路蛋白产物的变化,揭示青黄散治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的机理.方法 人骨髓增生异常综合征细胞(MUTZ-1)培养,按A组为空白对照,B组为雄黄组(浓度1μmol/L),C组为雄黄(浓度1μmol/L)+低剂量靛玉红(浓度0.05μmol/L)组,D组为雄黄(浓度1μmol/L)+高剂量靛玉红(浓度50μmol/L)组等4组进行处理,Western blot检测IFN-γ、TRAF3、IL10、IRF3、RIP、GAPDH蛋白产物.结果 TRAF3在C组表达明显增多,D组明显减少.IRF3在C组表达明显增多,D组明显减少.RIP在C组表达明显增多,D组明显减少.IL-10在D组有明显增加,C组明显减少.但是IFN-γ在蛋白水平没有检测到表达.TRAF3、IRF3、RIP、IL-10和IFN-γ在A和B组表达无明显统计学差异.结论 青黄散通过作用于高度甲基化的TRAF3基因,使TRAF3基因去甲基化而重新发挥信号转导作用,青黛浓度较低时通过TRIF信号转导途径(上调IRF3、RIP表达,下调IL-10表达)促进机体产生IFN-γ,增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力;青黛浓度较高时通过TRIF信号转导途径(下调IRF3、RIP表达,上调IL-10表达)促进机体产生IL-10,抑制Th1细胞介导的免疫应答和炎症反应,起负调控的作用.
关键词： 血证 骨髓增生异常综合征 TRAF Westernblot -
犀角地黄汤合银翘散对流感病毒性肺炎小鼠肺组织GRKs-βAR-Gsα信号通路的影响
目的 以流感病毒性肺炎小鼠作为模型,检测犀角地黄汤合银翘散(XDY)对小鼠肺组织中GRKs-βAR-Gsα通路的影响,以明确其改善肺血管通透性的分子机制.方法 将50只雄性Balb/C小鼠按体重随机分为5组,每组10只,分别为正常组、病毒组和犀角地黄汤高、中、低剂量组.每组除正常组外,均以A/FM/1/34(H1 N1)病毒株滴鼻感染.1 h后,正常组、病毒组用蒸馏水灌胃,2次/d;其余三组分别用高、中、低剂量的XDY灌胃,2次/d.在感染后的第3天、第5天分别摘眼球处死小鼠,荧光定量PCR检测各组小鼠肺组织β-AR mRNA含量;Western blot检测肺组织GRK2、Gsα的蛋白表达水平.结果 第3天:与病毒组相比,XDY中剂量组GRK2蛋白表达水平显著下降(P<0.001),β-AR含量升高(P<0.01),而Gsα的表达无明显差异(P>0.05);第5天:与病毒组相比, XDY中剂量组GRK2蛋白表达水平仍显著下降(P<0.01),β-AR含量显著升高(P<0.001),Gsα的表达明显升高(P<0.05),差异有统计学意义.结论 流感病毒感染后,犀角地黄汤合银翘散可通过抑制GRK2蛋白表达,升高β-AR、Gsα含量,改善流感病毒肺炎小鼠肺血管通透性,从而发挥抗炎作用.
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微流控蛋白印迹杂交与传统Western blot对目的蛋白的检测效果比较
目的 借助微流控蛋白印迹实验实现对目的蛋白省时、省力和省试剂的定性以及相对定量分析.方法 选取O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白为目的蛋白,选用高表达MGMT蛋白的MCF7细胞为细胞模型,用传统蛋白印迹杂交和纸芯片蛋白印迹杂交实验法对经过药物MGMT阻断剂(lomeguatrib)处理后MCF7细胞的MGMT蛋白表达量做定性以及相对定量分析.结果 纸芯片蛋白印迹杂交可以成功进行MGMT的定性、相对定量分析,而且上样检测量可低至10~25 pg.这相比于传统Western blot的上样检测蛋白检测限1~5 ng,提高了3个数量级.整个操作流程只需要1h,所用试剂量少,实验成本更低.而且,纸芯片的多通道构造可以实现如同反向蛋白杂交分析(RPPA)一样的,对组织蛋白表达量进行高通量的系统检测.结论 微流控蛋白印迹杂交相较于传统Western blot可以检测到更微量级的蛋白,节省试剂和样品,省时和省力,并可进行高通量的定性以及相对定量分析.
关键词： 微流控纸芯片 Westernblot MGMT 定性检测 相对定量检测 -
创伤性脑损伤后缺氧诱导因子-1α 的表达
目的 探讨创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达及其临床意义.方法 病例组(标本为TBI患者外周血和开颅减压手术清除的脑组织)和对照组(标本为同期健康体检者外周血及手术摘除的脑血管瘤边缘少量正常脑组织)均60例.病例组再根据术前格拉斯哥昏迷评分(GCS)分为中度损伤组(9～12分,n=20),重度损伤组(3～8分,n=20)和特重度损伤组(<3分,n=20);根据发病至手术时间不同分为<6 h组(n=20)、≥6 h且≤24 h组(n=15)、>24 h且≤72 h组(n=14)、>72 h组(n=11).利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测两组人群HIF-1αmRNA及蛋白的表达水平.采用SPSS 18.0进行单因素方差分析和t检验.结果 病例组HIF-1αmRNA及蛋白表达水平明显高于对照组[外周血HIF-1αmRNA(0.35±0.12),HIF-1α 蛋白(0.28±0.06);脑组织标本HIF-1αmRNA(0.65±0.08),HIF-1α 蛋白(0.78±0.08)],差异有统计学意义(P<0.05);随着损伤程度加重,HIF-1α 表达增强,特重度损伤组HIF-1α 表达强,明显高于重度损伤组和中度损伤组,差异有统计学意义(P<0.05);随着伤后时间的延长,HIF-1α 表达量逐渐增多,>24 h且≤72 h组HIF-1α 表达强,明显高于>72 h组、≥6 h且≤24 h组和<6 h组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TBI后HIF-1α 的表达显著升高,表达强度与脑损伤程度密切相关,在TBI发病中可能具有重要的作用.
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基质金属蛋白酶在中耳胆脂瘤中的表达
目的 研究基质金属蛋白酶MMP(matrix metaIproteinase)2和9在中耳胆脂瘤中的表达情况.方法 采用RT-PCR和Western blot方法检测36例中耳胆脂瘤和29例外耳道皮肤组织标本中MMP2和MMP9的基因和蛋白的表达情况.结果 MMP2和MMP9在中耳胆脂瘤中的mRNA水平的表达明显高于外耳道皮肤,差异有统计学意义(P<0.01),MMP2和MMP9在中耳胆脂瘤中蛋白水平的表达高于外耳道正常皮肤,差异有统计学意义(P<0.05).结论 MMP2、MMP9的高表达可能在中耳胆脂瘤的发生发展过程中起到一定的促进作用,而MMP2和MMP9的高表达可能有助于为中耳胆脂瘤的临床实践提供新的诊疗思路.
关键词： 胆脂瘤 基质金属蛋白酶 RT-PCR Westernblot -
ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系中的表达及意义
目的 探讨ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系中的表达及意义.方法 应用Transwell(细胞体外侵袭实验)、WesternBlot检测在不同5-Fu剂量干扰下,HepG2肝癌细胞系中ANXA2、VEGF的表达及细胞侵袭力的变化.结果 Transwell检测HepG2肝癌细胞随着5-Fu剂的增加侵袭力明显降低,各剂量组间差异具有统计学意义(P＜0.05);WesternBlot方法检测HepG2肝癌细胞中ANXA2、VEGF蛋白质的表达随着5-Fu剂量的增加逐渐下降,各剂量组间差异具有显著统计学意义(P＜0.01),且两者具有相关性r=0.856.结论 ANXA2、VEGF在HepG2肝癌细胞系的侵袭转移机制中可能具有协同促进作用.
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自发性糖尿病长爪沙鼠Rxra在6种组织中的表达水平分析
目的 分析糖尿病长爪沙鼠Rxra基因在6种组织中的表达水平,以期探索长爪沙鼠糖尿病发生的分子机制.方法 选取糖尿病长爪沙鼠和正常沙鼠各6只,分别采集动物的骨骼肌、肝脏、脂肪、肾脏、心脏和脑组织,用Real?time PCR和Western blotting检测Rxra基因在各组织中mRNA和蛋白表达水平.结果 Real?time PCR的结果表明,Rxra基因的mRNA水平在糖尿病组动物骨骼肌和脂肪中显著降低,在肝脏中无差异,而在肾脏、心脏和脑组织中则有高表达趋势.Western blotting结果显示,糖尿病组RXRA的蛋白水平在骨骼肌组织中显著降低,在脂肪组织几乎检测不到,在其他各组织表达情况有所不同,但没有统计学差异.结论 Rxra在糖尿病长爪沙鼠骨骼肌和脂肪组织中低表达,在其他4种组织中表达水平无差异,说明Rxra对长爪沙鼠糖尿病的影响主要发生在骨骼肌和脂肪组织中.
关键词： 长爪沙鼠 2型糖尿病 RXRA 实时定量荧光PCR Westernblot -
低氧运动后不同恢复环境腓肠肌热休克蛋白70表达变化
目的:实验旨在观察急性间歇低氧(氧含量12.7%)跑台运动后不同恢复环境下大鼠腓肠肌热休克蛋白HSP70表达的时程变化.方法:雄性SD大鼠进行低氧环境下的急性间歇跑台运动,用Western blot方法检测低氧运动后即刻、低氧运动后低氧恢复及常氧氧恢复1 d、2 d、7 d的大鼠腓肠肌HSP70蛋白表达水平.结果:急性间歇低氧运动后即刻HSP70蛋白表达水平开始升高.常氧恢复第1 d HSP70蛋白表达水平显著高于常氧对照组,P<0.05.第2 d、第7 d呈现先降低后升高的趋势;低氧恢复中HSP70蛋白表达水平均显著高于常氧对照组,P<0.05.结论:急性间歇低氧运动后能诱导HSP70蛋白表达水平升高;低氧恢复过程中HSP70蛋白高水平表达维持的时间要比常氧恢复长.
关键词： 热休克蛋白70 Westernblot 蛋白表达 大鼠 腓肠肌 -
柯萨奇病毒腺病毒受体在肺癌中的表达和意义
目的:明确柯萨奇病毒腺病毒受体(CAR)在正常肺组织、癌旁组织及肺癌组织中的表达情况以及在体外CAR失表达对人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞增殖与侵袭迁移的影响.方法:收集肺癌手术切除新鲜标本100例及其对应的癌旁组织和正常肺组织,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法检测CAR蛋白和mRNA的表达情况;在体外运用RNAi技术建立稳定的低表达CAR的人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞系,用平板克隆形成实验和Transwell侵袭及迁移实验观察RNAi抑制CAR基因表达对NCI-H520肺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响,并通过建立动物模型动态观察瘤体的生长.结果:免疫组织化学结果显示,CAR阳性率为48%.Western blot法检测CAR蛋白和RT-PCR检测CAR mRNA在肺癌组织中明显高于正常肺组织和癌旁组织.筛选得到三组CAR基因表达受到抑制的NCI-H520稳定细胞系.半定量RT-PCR和Western blot结果显示,三组稳定细胞系中CAR mRNA和蛋白质表达均有不同程度的下降,其中shRNA-2抑制作用强.平板克隆形成实验显示,shRNA-2抑制CAR基因表达后,NCI-H520细胞的增殖能力有所下降(P>0.05),Transwell侵袭及迁移实验显示,NCI-H520细胞侵袭迁移能力明显下降(P<0.05).动物模型结果显示,抑制CAR的表达,则动物体内移植瘤的生长就会缓慢.结论:CAR与肺癌形成和进展有关,并能够促进肺癌细胞的侵袭和迁移活动.裸鼠肺癌移植瘤模型构建成功,为以后肺癌的研究奠定基础.利用RNAi有效抑制了CAR基因的表达,并抑制NCI-H520细胞在裸鼠体内瘤体的生长,CAR有望成为肺癌基因治疗的靶点之一.
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在INS-1细胞中构建胰腺组织硫氧还蛋白相互作用蛋白过表达模型:两种腺病毒感染方法的差异
背景:目前,通过腺病毒感染方法在细胞中构建蛋白质过表达模型的方法主要有2种,一是在腺病毒感染细胞4 h后补充1640完全培养基,24 h后换为完全培养基,再继续培养到48 h(方法Ⅰ);另一种是在腺病毒感染细胞4 h后用PBS洗去含有腺病毒的1640培养基,更换4 mL完全培养基培养到48 h,中间不做任何处理(方法Ⅱ).前者病毒的作用时间较长,感染效果较好,但病毒本身对细胞的损害程度较大,对实验模型的稳定性产生干扰.而后者病毒的作用时间短,对细胞的毒性低,但有时病毒感染效率较低,目的蛋白的表达效果欠佳.目的:在大鼠INS-1胰岛β细胞中,通过比较相同腺病毒载体介导的不同感染细胞的方法而寻找一种更加稳定而高效的硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-interacting protein,TXNIP)过表达模型.方法:构建含有绿色荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP)和TXNIP过表达腺病毒载体(Ad-TXNIP-GFP).分别设立正常组、空病毒组和TXNIP过表达组,按照上述2种不同的方法进行病毒转染.结果与结论:①方法Ⅱ中的绿色荧光蛋白荧光强度和阳性效率高于方法Ⅰ;②方法Ⅱ中的细胞形态更好且细胞存活率更高;③方法Ⅱ中,目的基因TXNIP在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况明显高于方法Ⅰ.由以上结果得出结论,腺病毒感染INS-1细胞4 h后,使用PBS将旧培养基洗去并更换新培养基,继续培养到48 h的方法更有利于在INS-1细胞中构建TXNIP过表达模型.
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阿尔茨海默病细胞模型中β淀粉样蛋白介导ERK信号通路的STEP61负性调控
背景:研究表明纹状体富集的酪氨酸磷酸酶61(striatal-enriched phosphatase,STEP61)在突触可塑性方面发挥重要作用.STEP位于后突触末端,影响突触增强的形成,可能的机制是使关键性信号蛋白如MAPK激酶ERK1/2去磷酸化并失活.目的:探讨STEP61负性调控阿尔茨海默病细胞模型中β淀粉样蛋白介导的ERK信号通路的机制.方法:实验分3组,正常组为C57BL/6小鼠原代皮质神经元细胞;阿尔茨海默病细胞模型组是利用1μmol/L凝聚态的β淀粉样蛋白1-42加入皮质神经元细胞中1 h作为阿尔茨海默病细胞模型;β淀粉样蛋白1-42+RNAi组为在阿尔茨海默病细胞模型基础上,利用sRNAi技术制作STEP61基因沉默组.应用Western Blot技术检测STEP61的RNAi对ERK信号通路的影响.结果与结论:Western blot结果显示,阿尔茨海默病细胞模型组与正常组相比STEP61蛋白表达增加了223％(P<0.05),使磷酸化STEP61的比例减少到(75.6±4.6)％(P<0.05).β淀粉样蛋白1-42+RNAi组STEP61磷酸化的比例与阿尔茨海默病细胞模型组相比差异无显著性意义.同时阿尔茨海默病细胞模型组pERK1/2的蛋白表达量较对照组减少(P<0.05),而β淀粉样蛋白1-42+RNAi组pERK1/2的蛋白表达量较阿尔茨海默病细胞模型组显著增加(P<0.05).结果说明:在阿尔茨海默细胞模型中证实了STEP61调控β淀粉样蛋白介导的ERKs活性,并且很可能是通过脱磷酸化使他们失活而实现的.
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MIF检测与胃癌临床病理特征之间的关系
目的 探讨外周血中巨噬细胞移动抑制因子MIF浓度与胃癌病理特征之间的关系,同时验证外周血MIF浓度与胃癌组织MIF蛋白和mRNA之间的相关性.方法 30例胃癌患者均为温州医学院附属第二医院手术并经病理活检证实,按照分化、分期、浸润深度、有无淋巴结转移分组,所有患者均在入院初检测外周血中MIF浓度,同时在手术后取胃癌标本检测MIFmR-NA和蛋白的变化,另取温州医学院附属第二医院经胃镜检查健康者10例.结果 胃癌患者的MIFmRNA、MIF蛋白、MIF外周血中浓度较健康对照组明显增高(P＜0.05),MIF浓度的高低与分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关(P＜0.05),MIF浓度≥8.96 ng/ml患者生存率较MIF浓度＜8.96 ng/ml患者生存率明显下降(P＜0.05),外周血MIF浓度与胃癌组织中MIFmR-NA、MIF蛋白具有明显相关性(P＜0.05).结论 外用血MIF浓度与患者分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关,且可以很好预测胃癌组织中MIF基因和蛋白的变化情况.
关键词： 胃癌 MIF RT-PCR Westernblot ELISA -
S100A11的表达及其与胃癌的关系
目的:探讨S100A11在胃癌和正常胃粘膜组织中的表达及意义.方法:采用RT-PCR和Western Blot技术检测21对配对胃癌组织和正常胃粘膜组织中S100A11的表达情况.结果:胃癌组织S100A11 mRNA的表达量(1.26±0.03)高于正常胃癌粘膜组织中的表达量(0.75±0.04),两组比较差异有统计学意义(p＜0.05).S100A11蛋白在胃癌组织中的表达量(0.94±0.05)明显高于在正常胃粘膜组织中的表达量(0.39±0.05),两组比较差异有统计学意义(p＜0.05).结论:S100A11在胃癌组织中的表达量明显高于正常组织,提示其与胃癌的发生和发展有关.
关键词： 胃癌 S100A11 Westernblot RT-PCR -
小鼠mP24基因的原核表达及多抗制备
目的:本研究是为后续实验中深入研究小鼠mP24基因的功能及活性提供mP24多克隆抗体.方法:mP24是小鼠中新发现的新基因,通过构建了pET-28a(+)/mP24原核表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导宿主细菌表达融合蛋白.经过SDS-PAGE分析,结果表明该蛋白能以可溶性蛋白形式存在.利用镍柱纯化融合蛋白,免疫新西兰兔,制备mP24多抗.结果:Western Blot结果显示,制备的抗小鼠mP24多克隆抗体具有较高的特异性.ELISA实验检测,该多抗时免疫抗原的效价高达1:9000,具有较高的效价.结论:本实验成功制备了mP24的多克隆抗体,为进一步开展mP24基因功能的研究奠定了基础.
关键词： mp24 多克隆抗体 原核表达 Westernblot ELISA -
针刺内关、水沟对脑缺血再灌注大鼠大脑皮层Caspase-3、PARP-1表达的影响
目的 探讨针刺内关、水沟抑制脑缺血再灌注大鼠大脑皮层Caspase-3、PARP-1 mRNA和蛋白表达的影响.方法 40只雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、针刺组.采用改进的Longa线栓法制备大脑中动脉梗塞模型.参考Bederson6级5分法进行神经功能评分,运用Real-time PCR、Western Blot检测脑缺血后24 h大鼠大脑皮层Caspase-3、PARP-1的mRNA及蛋白表达量变化.结果 与模型组相比,针刺组可改善缺血再灌注大鼠神经功能缺损症状(P<0.01);针刺可下调Caspase-3、PARP-1的mRNA及蛋白表达,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01;P<0.05,P<0.05).结论 针刺内关、水沟可下调脑缺血再灌注大鼠大脑皮层Caspase-3、PARP-1的mRNA及蛋白表达.
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Prohibitin2在脊髓损伤过程中的表达变化
目的:探讨Prohibitn2(PHB2)在正常和损伤脊髓组织中的表达变化.方法:将56只SD大鼠随机分为6个实验组和1个对照组,实验组按Allen法制作急性脊髓损伤模型,并分别按伤后6h、1d、3d、5d、7d和14d取材.用Western blot和免疫组织化学法观察PHB2在正常和损伤大鼠脊髓组织中的表达情况.结果:PHB2在大鼠正常脊髓灰质和白质中均有表达,且分布较均匀,PHB2蛋白表达从脊髓损伤后6h开始迅速下降,持续至3d,之后逐渐上升,于2w后接近正常水平.结论:PHB2在脊髓灰质和白质中均有表达,并在脊髓损伤后表达发生变化,提示PHB2在脊髓损伤中过程中起到一定作用.
关键词： Prohibitn2 Westernblot 免疫组织化学 脊髓损伤 -
嘌呤受体P2X7在正常人眼和开角型青光眼患者小梁网细胞上的表达对比研究
目的 探讨嘌呤受体P2X7在体外培养正常人眼小梁网细胞(NTMC)及开角型青光眼(POAG)患者小梁网细胞(PTMC)上的表达差异.方法 体外培养、鉴定2种人眼小梁网细胞,利用实时荧光定量PCR和Westernblot方法分别检测2种小梁网细胞上P2X7受体基因和蛋白的表达差异. 结果 形态学和免疫学方法成功鉴定了体外培养的2种人眼小梁网细胞;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和Westernblot证实正常人和POAG患者小梁网细胞上均有P2X7受体的基因和蛋白表达,且后者表达较前者增高.结论 POAG患者小梁网细胞上的P2X7受体表达较正常人眼小梁网细胞增高.P2X7受体在小梁网细胞上的作用值得进一步研究.
关键词： P2X7受体 人小梁网细胞 实时荧光定量PCR Westernblot -
SIRT6在结直肠癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨结直肠癌组织中去乙酰化酶6(SIRT6)的表达及其临床意义.方法 采用Western blot和实时荧光定量PCR法分别检测29对结直肠癌及癌旁正常组织中SIRT6 mRNA和蛋白的表达水平.免疫组化SP法检测SIRT6蛋白在113例(含前29例)结直肠癌及癌旁正常组织切片中的表达,分析SIRT6的表达与各临床参数之间的相关性.结果 结直肠癌组织中SIRT6 mRNA和蛋白水平的表达均明显低于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);SIRT6蛋白在不同的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期结直肠癌组织的表达差异有统计学意义(P<0.05).结论 SIRT6在结直肠癌中的低表达与结直肠肿瘤的发生发展有关,SIRT6可能是结直肠癌的抗癌蛋白之一,可成为结直肠癌诊断和治疗的新靶标.
关键词： SIRT6 结直肠癌 Westernblot RT-qPCR 免疫组化 -
Maspin基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中表达水平的研究
目的:在mRNA和蛋白水平检测5种不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中Maspin基因表达的差异,探讨Maspin基因与已知转移习性人鼻咽癌细胞株之间的相关性,为鼻咽癌发生转移的可能机制及临床预测转移风险提供理论基础.方法:体外培养SUNE-1-5-8F、SUNE-1、CNE-2Z、CNE-1、SUNE-1-6-10B 5株不同转移习性的人鼻咽癌细胞株.用RT-PCR及Western blot 2种方法在mRNA和蛋白水平检测5种人鼻咽癌细胞株中Maspin基因表达情况.结果:Maspin基因在SUNE-1-5-8F、SUNE-1、CNE-1及SUNE-1-6-10B细胞株均有不同程度表达,差异无统计学意义(P>0.05),在CNE-2Z细胞株中不表达,且在mRNA和蛋白水平Maspin基因表达具有一致性;Maspin基因在不同转移习性人鼻咽癌细胞株中mRNA和蛋白表达量总体存在差异(P<0.05),但表达量不随鼻咽癌细胞株转移习性增高而降低(P>0.05).结论:Maspin基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中mRNA和蛋白表达量不同;Maspin基因可能与人鼻咽癌细胞株的转移潜能无相关性.
关键词： 鼻咽肿瘤 转移抑制基因 maspin基因 RT-PCR Westernblot -
大蒜辣素致肝癌细胞HepG2凋亡研究
目的 研究大蒜辣素(Allicin)导致肝癌细胞HepG2凋亡的现象及其影响规律.方法 运用CCK-8试剂盒研究Al-licin对HepG2细胞增殖的影响,运用流式细胞仪检测其对细胞凋亡、DNA代谢的影响,运用免疫印迹(Western blot)研究肝癌细胞凋亡基因表达的影响.结果 Allicin能抑制HepG2细胞的增殖,细胞倍增时间延长为4 d,同时Allicin也能导致细胞出现大量凋亡,实验结果表明其凋亡率高为4.13%,死亡率达到70.38%.细胞周期实验结果表明Allicin能使大部分细胞处于DNA合成期的S期及G0/G1期,延缓细胞增殖.Western blot实验结果表明Allicin能激活细胞凋亡基因提高药物的治疗效果.结论 Allicin能抑制肝癌细胞的增殖可导致细胞大量死亡并引起细胞凋亡,并能引起细胞DNA代谢发生紊乱,细胞大部分被阻滞在DNA合成的G0/G1期,细胞分裂被抑制,Western blot实验结果表明细胞凋亡基因大量表达,细胞发生凋亡.
