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中西医结合治疗消化性溃疡52例的临床观察
消化性溃疡是由幽门螺杆菌(HP)所致,而HP内含有丰富的尿素酶、氧化酶、过氧化酶、DNA酶,核糖核酸酶、酸化磷酶,及谷氨酰胺酶肽等.消化性溃疡及慢性胃炎的发病机制与HP感染和胃酸排出的聚合作用有关:十二指肠黏膜在胃酸过多的刺激作用下,导致黏膜损伤损坏为HP感染提供可能条件,HP生长繁殖又进一步破坏细胞的紧密结合,细胞的损伤使胃酸得以侵入黏膜,致使黏膜进一步损伤,终形成溃疡.
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谷氨酰胺酶在肿瘤治疗中作用的研究进展(文献综述)
谷氨酞胺酶是谷氨酞胺分解的关键酶和限速酶,与肿瘤的生长、肿瘤血管的生成及肿瘤免疫都有重要的关系.人们对于如何降低肿瘤细胞内的谷氨酰胺水平及谷氨酰胺酶活性进行了很多的研究.本文对近年来有关谷氨酰胺酶在肿瘤治疗中的研究进展进行了综述.
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谷氨酰胺酶研究进展
新陈代谢是细胞生长、存活的必要过程.与正常细胞相比,肿瘤细胞的代谢方式发生了极大的改变,这些变化称之为沃伯格效应.谷氨酰胺在其代谢过程中起到举足轻重的作用.谷氨酰胺酶作为谷氨酰胺代谢过程的关键酶也因此成为近年的研究热点.本文就近年来谷氨酰胺酶的相关研究进展进行综述.
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结直肠癌患者组织中HIF-1α和GLS2表达水平与病理程度和预后的相关性
目的 探讨结直肠癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和2型谷氨酰胺酶(GLS2)表达水平与患者病理及预后的相关性.方法 选取2015年3月至2016年3月行手术切除的结直肠癌组织89例,癌旁组织67例(距肿瘤5 cm以上),用免疫组织化学方法检测HIF-1α和GLS2的表达.应用SPSS 19.0统计学软件分析,HIF-1α和GLS2表达水平及与结直肠癌病理因素的关系采用卡方检验,患者预后的影响因素采用COX回归模型,以P<0.05表示差异有统计学意义.结果 结直肠癌组织中HIF-1α的阳性率为64.0%(57例),GLS2的阳性率为67.4%(60例),明显高于癌旁组织(13.4%、19.4%),差异有统计学意义(P<0.05);结直肠癌组织中HIF-1α和GLS2的阳性率与肿瘤分期、分化程度和淋巴结转移有关;肿瘤分期为Ⅲ/Ⅳ期、分化程度差和淋巴结转移的结直肠癌组织中的HIF-1α和GLS2的阳性率显著高于肿瘤分期为Ⅰ/Ⅱ期、分化程度好和淋巴结未转移的结直肠癌组织(P<0.05);COX回归模型得出结直肠癌患者的HIF-1α、 GLS2、 肿瘤分期、分化程度和淋巴结转移均是患者预后的影响因素(P<0.05).结论 HIF-1α和GLS2在结直肠癌组织中高表达、提示预后不良,与结直肠癌的发生、发展存在相关性,有望成为结直肠癌评估诊断的新靶点.
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谷氨酰胺代谢对卵巢肿瘤细胞生物学行为的影响
谷氨酰胺是可以由细胞自身合成的非必需氨基酸,对体外培养的哺乳动物细胞生长和增殖具有非常重要的意义.在肿瘤细胞增殖过程中谷氨酰胺不仅满足了蛋白质合成的需要,也是嘌呤和嘧啶合成过程中氮元素的主要供体.研究显示谷氨酰胺成瘾的肿瘤细胞依赖谷氨酰胺生存,并通过三羧酸循环对谷氨酰胺利用进行重编程.阻断高侵袭性卵巢癌细胞中谷氨酰胺进入三羧酸循环,或抑制低侵袭性卵巢癌细胞谷氨酰胺合成,可能是卵巢癌潜在的治疗方法.谷氨酰胺代谢与卵巢癌不良预后有关;抑制谷氨酰胺代谢通路和以铂类为基础的联合使用,可能是卵巢癌治疗的新策略,特别是耐药性卵巢癌.综述谷氨酰胺代谢在卵巢癌细胞增殖、侵袭和药物抵抗等生物学行为方面的作用,探讨其作为潜在的卵巢癌诊断、治疗和预后的新靶点或生物标记.
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亚慢性砷暴露对小鼠脑谷氨酸—谷氨酰胺循环通路的影响
目的 探讨亚慢性饮水砷暴露对小鼠脑谷氨酸-谷氨酰胺循环通路的影响及其可能的机制.方法 将32只健康雌性昆明种小鼠随机分为4组,每组8只.3个染砷组以自由饮水方式分别暴露于水砷浓度为25、50和100 mg/L的亚砷酸钠水溶液,连续染砷6周.对照组饮蒸馏水.分别检测小鼠血和脑中无机砷(inorganic arsenic,iAs)、一甲基胂(monomethylarsonic acid,MMA)和二甲基胂(dimethylarsenic acid,DMA)的含量及脑中谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、谷氨酰胺酶(phosphate activated glutaminase,PAG)和超氧化物歧化酶(superoxide dimutase,SOD)的活力与谷氨酸(glutamate,Glu)和脂质过氧化物(lipidperoxide,LPO)的含量.结果 小鼠血和脑中iAs、MMA和DMA含量均随染砷剂量的增加而升高.各染砷组小鼠脑中GS和PAG活力及Glu含量与对照组比较均升高,50 mg/L染砷组GS活力、25和50mg/L染砷组PAG活力及100mg/L染砷组Glu含量与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),25mg/L染砷组PAG活力与100mg/L染砷组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).各染砷组小鼠脑中SOD活力与对照组比较也升高,且50mg/L染砷组的SOD活力与对照组和25 mg/L染砷组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).各染砷组的LPO含量与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 血中的各形态砷化物均可透过成年鼠的血脑屏障进入脑组织.血和脑中的砷形态构成均以有机砷为主,但与血中砷形态的构成不同,脑中砷形态构成以DMA为主,iAs次之,MMA极少.砷暴露可引起脑中谷氨酸-谷氨酰胺循环通路中两个关键代谢酶GS和PAG活力的异常,并导致Glu代谢的异常.另外,本研究结果提示,砷暴露可引起超氧阴离子的含量升高,并导致了SOD活力的代偿性升高.
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补充谷氨酰胺对运动小鼠谷氨酰胺代谢的影响
目的探讨大强度慢性运动情况下,补充谷氨酰胺(Gln)对血浆和骨骼肌Gln水平、组织Gln合成酶和谷氨酰胺酶活性变化的影响.方法 BAL/C小鼠负重(2%体重)游泳,每天2 h,持续8 w.结果与对照组比较,大强度游泳组动物血浆和肌肉中的Gln浓度分别降低74%(P＜0.01)和79%(P＜0.01),骨骼肌Gln合成酶活性降低33.5%(P＜0.01),淋巴细胞谷氨酰胺酶活性增加315%(P＜0.01).与游泳组比,游泳+Gln补充组血浆和骨骼肌Gln浓度分别提高了142%(P＜0.01)和44.7%(P＝0.056)、骨骼肌Gln合成酶增加18.0%(P＜0.01),淋巴细胞谷氨酰胺酶降低了25.4%(P＜0.05).结论大强度运动时,经口补充Gln提高血浆Gln浓度,可能与Gln被吸收入血有关;运动引起的Gln合成减少不仅归因于底物的减少,还有合成酶活性降低的影响.
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乙体氯氰菊酯对小鼠脑组织Glu、 GABA代谢酶活性的影响
为探讨乙体氯氰菊酯的神经毒性,将健康成年昆明种小鼠按体重随机分为4组,雌雄各半.染毒组小鼠以一次经口灌胃方式分别给予20、40、80 mg/kg剂量的乙体氯氰菊酯,灌胃量为0.2 ml/10 g体重.以食用色拉油稀释受试物质,对照组给予等量色拉油.灌胃后2h,采用分光光度法测定小鼠脑组织谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酰胺酶(PAG)、谷氨酸脱羧酶(GAD)及γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)活性.结果显示,GABA-T活性随着染毒剂量的增加而逐步降低,其中80 mg/kg、40 mg/kg剂量组小鼠脑组织GABA-T活性明显低于对照组(分别为P ＜0.01和P＜0.05,n=10).各染毒组小鼠脑组织GS、PAG、GAD活性与对照组相比,差异无统计学意义(P ＞0.05,n=10).提示GABA-T活性降低可能是拟除虫菊酯致Glu和GABA平衡紊乱的原因之一.
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乙体氯氰菊酯对小鼠脑组织谷氨酰胺酶活性及其mRNA表达的影响
健康成年小鼠按体重随机分成1个对照组及3个染毒组,每组10只,雌雄各半.染毒组小鼠以灌胃方式分别给予20、40、80 mg/kg荆量的乙体氯氰菊酯,以食用色拉油稀释受试物质,对照组给予等量色拉油.3 h后处死小鼠,采用分光光度法和RT-PCR法检测小鼠脑组织谷氨酰胺酶(phosphate-activated#utaminase,PAG)活性及其mRNA水平.结果80 mg/kg剂量组全部小鼠及40 mg/kg剂量组3只小鼠于染毒2 h后出现兴奋症状.小鼠脑组织PAG活性随染毒剂量的增加而递增,PAG mRNA水平则随染毒剂量的增加而逐渐降低,其中,80 mg/kg剂量组小鼠脑组织PAG活性及其mR-NA水平与对照组相比,差异有统计学意义.
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乙体氯氰菊酯致小鼠脑组织Glu-Gln环路紊乱的实验研究
将健康成年小鼠按体重随机分成1个对照组及3个染毒组,每组10只,雌雄各半.染毒组小鼠以灌胃方式分别给予20、40、80mg/kg剂量的乙体氯氰菊酯.以食用色拉油稀释受试物质,对照组给予等量色拉油.3 h后处死小鼠,采用分光光度法检测各组小鼠脑组织谷氨酰胺酶(PAG)和谷氨酰胺合成酶(GS)活性.结果 80 mg/kg剂量组小鼠于染毒后2 h陆续出现明显的兴奋症状,其中2只雌鼠出现濒死状态;40 mg/kg剂量组个别小鼠于染毒后2 h出现轻微兴奋症状;20 mg/kg剂量组小鼠在整个受试期间未见异常.各组小鼠脑组织PAG活性随染毒剂量的增加而递增,GS活性随染毒剂量的增加而逐渐降低,其中80 mg/kg剂量组小鼠脑组织PAG活性明显高于对照组(P＜0.01),80、40 mg/kg剂量组小鼠脑组织GS活性明显低于对照组(分别为P＜0.001、P＜O.01).提示乙体氯氰菊酯使小鼠脑组织谷氨酰胺合成酶活性降低、谷氨酰胺酶活性升高.
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磷酸三邻甲苯酯对鸡脑组织谷氨酸/谷氨酰胺循环及其关键酶表达的影响
背景：有机磷化合物诱导的迟发性神经毒性发生的确切机制不清楚而尚无有效的治疗方法。目的：观察磷酸三邻甲苯酯对鸡脑组织谷氨酸/谷氨酰胺循环及其关键酶表达的影响。
方法：成年罗曼母鸡24只随机分为3组，每组8只。①磷酸三邻甲苯酯染毒组剂量为1000 mg/kg，经灌胃一次性给予实验鸡。②苯甲基磺酰氟干预组先将苯甲基磺酰氟按40 mg/kg剂量给鸡皮下注射，24 h后，再经灌胃一次性给鸡1000 mg/kg的磷酸三邻甲苯酯。③对照组则给予等量安慰剂。每组于5 d和21 d时间点各处死4只鸡，迅速取脑于-80℃深冻冰箱保存。ELISA 法检测谷氨酰胺合成酶和谷氨酰胺酶含量及谷氨酰胺合成酶活性，应用相应的试剂盒对细胞外谷氨酸和谷氨酰胺浓度进行测定，利用Fluo3-AM检测细胞内钙离子浓度。
结果与结论：磷酸三邻甲苯酯在暴露早期(5 d)可诱导鸡脑组织谷氨酰胺合成酶和谷氨酰胺含量及谷氨酰胺合成酶活性显著下降；谷氨酸和细胞内钙离子浓度显著升高。提示谷氨酰胺合成酶活性抑制所导致的谷氨酸/谷氨酰胺循环障碍和钙离子浓度显著升高可能与磷酸三邻甲苯酯暴露鸡诱发的迟发性神经毒性机制密切相关。 -
过量人参皂苷对小鼠脑组织谷氨酸代谢的影响
目的:探讨过量人参皂苷对小鼠脑组织中谷氨酸代谢的影响.方法:常规饲养昆明小鼠,按照终浓度低(8 mg/kg)、中(40mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量连续灌胃人参皂苷24天,记录小鼠体重变化.第25天颈脱臼处死小鼠,取出全脑匀浆后测定谷氨酸水平,谷氨酰胺酶活力.结果:各实验组与对照组相比,体重明显下降;低、中、高实验组谷氨酸水平分别高与对照组13.66％、21.67％、39.83％,其中中剂量组和高剂量组显著高于空白组(P＜0.05);谷氨酰胺酶活力较对照组分别增高2.06％、2.91％、10.11％,高剂量与空白组差异显著,有统计学意义(P＜0.05).结论:高剂量人参皂苷能使神经系统兴奋,可能与增高谷氨酰胺酶活力、从而提高脑组织中谷氨酸含量有关.
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鱼藤酮对大鼠纹状体谷氨酸-谷氨酰胺环路的影响
[目的]观察鱼藤酮(rotenone)对大鼠纹状体谷氨酸一谷氨酰胺环路代谢的影响. [方法]将24只SD大鼠随机分为正常对照组、溶剂对照组、2.0mg/kg和4.0mg/kg鱼藤酮染毒组.采用高效液相色谱法(HPLC)检测鱼藤酮染毒大鼠纹状体谷氨酸(glutamate,Glu)和谷氨酰胺(ghtamine,Gln)含量;使用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)基因表达的变化;采用分光光度法检测谷氨酰胺酶(phosphate activatedglutaminase,PAG)与GS活性. [结果] 与正常对照组比较,4.0mg/kg染毒组大鼠纹状体Glu含量明显升高(P＜0.01),而Gln含量明显降低(P＜0.01);4.0mg/kg染毒组GSmRNA表达明显增强(P＜0.05);4.0mg/kg染毒组GS活性却明显降低,PAG活性明显升高(P＜0.01). [结论]鱼藤酮诱导大鼠纹状体Glu含量明显升高,可能是导致中脑神经元兴奋性损伤的的主要原因之一.
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大鼠谷氨酰胺酶反义真核表达载体的构建及鉴定
目的:构建大鼠谷氨酰胺酶(GA)反义真核表达载体. 方法:采用分子克隆技术将rGA cDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA 3.0中. 结果:Eco R Ⅰ和HinD Ⅲ双酶切后,反义重组基因为0.28 kb和5.4 kb两条带,与理论计算相符. 结论:成功构建了大鼠GA反义真核表达载体,为肿瘤细胞的GA反义基因治疗研究创造条件.
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pBabe-GLS1真核表达载体构建及其对结肠癌细胞增殖、谷氨酰胺摄取的影响
目的 构建pBabe-GLS1真核表达载体,观察谷氨酰胺酶1(GLS1)对结肠癌细胞增殖及谷氨酰胺摄取的影响.方法 运用反转录PCR扩增GLS1基因片段,通过BamHⅠ和SalⅠ双酶切目的片段并通过T4 DNA连接酶将GLSⅠ基因连接至pBabe真核表达载体中;经BamHⅠ和SalⅠ双酶切法、PCR法测序鉴定重组DNA分子;转染组将构建的pBabe-GLS1真核表达载体瞬时转染结直肠癌HT29细胞,阴性对照组转染空质粒pBabe,采用Western blotting法检测GLS1蛋白表达,通过谷氨酰胺含量检测试验和蛋白定量实验检测其对结肠癌细胞的生物学影响.结果 成功构建了pBabe-GLS1真核表达载体,且在HT29细胞中高表达GLS1蛋白;转染组HT29细胞增殖能力高于阴性对照组(P<0.05),对谷氨酰胺的摄取能力增加(P<0.05).结论 成功构建了pBabe-GLS1真核表达载体,构建的pBabe-GLS1真核表达载体能促进结肠癌细胞增殖及谷氨酰胺摄取.
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反义GAcDNA重组质粒的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响
谷氨酰胺(Gln)是肿瘤细胞的主要呼吸燃料和重要氮源[1].谷氨酰胺酶(GA)是肿瘤细胞酵解Gln的起始酶和关键酶,封闭GA基因则可能阻断肿瘤细胞内Gln的酵解,进而抑制其生长,我们将GAcDNA反向构建在PcDNA3.0真核表达载体上,转染人结肠癌细胞,观察它对结肠癌细胞生长曲线和增殖能力的影响.
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谷氨酰胺酶在肿瘤中的研究进展
谷氨酰胺(Gln)代谢在肿瘤生长过程中具有极其重要的作用,线粒体中的谷氨酰胺酶(GA)是其代谢过程中的关键酶,已成为近年的研究热点.GA有两种亚型,分别是肾型谷氨酰胺酶(GLS1)和肝型谷氨酰胺酶(GLS2).GLS1在多个系统的恶性肿瘤中高表达,被认为可能是一种致癌基因.GLS2的生物学功能与其截然相反,也逐渐引起许多学者的关注.本文就GA在肿瘤中的研究进展进行综述.
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谷氨酰胺酶反义基因对胃癌细胞恶性增殖的逆转作用
目的 利用反义核酸技术封闭胃癌细胞的谷氨酰胺酶(glutaminase,GA)基因,观察反义GAcDNA对胃癌细胞恶性增殖能力的影响.方法 构建含有GAcDNA片段的反义真核表达载体pcDNA3.0/GA,经脂质体介导转入胃癌细胞SGC-7901(命名为SGC-7901GA),并对胃癌细胞生长曲线、细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达、软琼脂克隆形成试验进行观察.结果 与对照组比较,SGC-7901GA在各时相点的细胞生长数目显著性降低(P<0.05),PCNA表达较对照组显著下降,在软琼脂上克隆形成数减少.提示SGC-7901GA生长速度减慢,增殖活性明显减弱.结论 通过特异性抑制GA基因的表达, 反义GAcDNA对胃癌细胞恶性增殖能力有显著抑制作用.
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牛磺酸对染锰大鼠学习记忆功能和谷氨酸相关代谢酶影响研究
目的 探讨牛磺酸对染锰所致大鼠学习记忆功能和谷氨酸相关代谢酶的影响.方法 无特定病原体级雄性健康SD大鼠随机分为空白对照组、染锰组、预防组、治疗组和治疗对照组共5组,每组6只.后4组大鼠腹腔注射给药剂量为20 mg/kg体质量的氧化锰,预防组大鼠同时腹腔注射给药剂量为200 mg/kg体质量的牛磺酸,空白对照组大鼠同时腹腔注射等体积无菌生理氯化钠溶液,每日1次,每周5d,共8周;其后,治疗组大鼠腹腔注射给药剂量为200 mg/kg体质量的牛磺酸,治疗对照组大鼠腹腔注射等体积无菌生理氯化钠溶液,每日1次,每周5d,共8周.5组大鼠均进行Morris水迷宫实验记录逃避潜伏时间(连续观察5d,每天训练4次)及平台搜索次数;采用酶联免疫吸附实验测定丘脑谷氨酰胺酶(PAG)、谷氨酸脱羧酶(GAD)和谷氨酰胺合成酶(CS)水平.结果 5组组间逃避潜伏期差异有统计学意义(P＜0.01);5个时间点间逃避潜伏期差异有统计学意义(P＜0.01);组别与时间无交互作用(P＞0.05);染锰组、治疗组和治疗对照组逃避潜伏期均高于空白对照组(P ＜0.01,P＜0.05,P＜0.01),预防组逃避潜伏期分别低于染锰组和治疗对照组(P＜0.01,P＜0.05),但预防组逃避潜伏期分别与空白对照组、治疗组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);5个时间点逃避潜伏期两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).5组组间的平台搜索次数比较,差异无统计学意义(P＜0.05).染锰组PAG和GAD水平均低于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05);预防组PAG、GAD和GS水平均低于空白对照组(P ＜0.01,P＜0.05,P＜0.05);预防组PAG、GAD和GS水平分别与染锰组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);治疗组GAD、GS水平均高于治疗对照组(P＜0.01,P＜0.05);治疗组GAD水平高于染锰组(P＜0.01).结论 锰可降低大鼠空间学习记忆能力,牛磺酸干预或治疗后可改善其学习记忆能力.牛磺酸干预对染锰大鼠谷氨酸相关代谢酶的调节作用机制有待进一步研究.
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谷氨酰胺在肿瘤细胞中的代谢及意义
谷氨酰胺(Glutamine,Gln)作为人体内丰富的一种氨基酸[1],在各种哺乳动物组织中被认为是重要的氮源和呼吸燃料.肿瘤细胞的不断生长需要能量和大量营养物质的不断供应.研究表明,Gln也是肿瘤细胞重要氮源和呼吸燃料[2].
