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β-连环蛋白和核转录因子-κB在大肠癌中的表达及临床意义
β-连环蛋白(β-cat)和核转录因子-κKB(NF-κB)分别作为Wnt信号系统和以NF-κB为中心的Rel/NF-κB/IKK信号系统的关键调控点,在细胞黏附、增殖和凋亡中起重要作用,与肿瘤的形成发展有着十分密切的关系,成为近几年研究的一个热点.目前对其在大肠癌组织中的表达及大肠癌细胞分化、侵袭、转移等研究尚不多见.本研究探讨了β-Cat、NF-κB的表达与大肠癌细胞生物学行为的关系.
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Parthenolide对结肠癌细胞增殖、迁移、凋亡和 VEGF-C表达的影响
目的::小白菊内酯( Parthenolide)可通过不同的途径影响肿瘤的进展,但有关其对结肠癌细胞的生物学行为的影响报道较少。本研究的目的就是探讨Parthenolide干预在结肠癌细胞生长、迁移和凋亡中的生物学作用,以及其对结肠癌细胞分泌VEGF- C的影响。应用QRT-PCR、Wstern Blot、免疫组织化学、细胞增殖、迁移及凋亡实验检测Parthenolide干预后结肠癌细胞生物学行为的变化。结果:parthenolide干预后48 h开始抑制细胞活性( P<0.05);单独应用parthenolide不能影响结肠癌细胞的迁移和凋亡;parthenolide处理后可抑制结肠癌细胞分泌VEGF-C。尾静脉注射Parthenolide可抑制移植瘤生长、淋巴管生成。结论:这些研究表明parthenolide能有效抑制结肠癌细胞及移植瘤的生长,其可能成为潜在的抗癌药物。
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NHE1基因调控细胞内酸碱平衡对胃癌细胞生物学行为的影响
目的:通过基因转染技术,研究NHE1反义基因对SGC-7901胃癌细胞生物学行为的影响,探讨通过酸化细胞内环境诱导肿瘤细胞凋亡从而治疗胃癌的新方法.方法:利用亚克隆技术构建人NHE1反义结构基因哺乳动物真核表达质粒,通过DOTAP脂质体介导的转染技术将反义真核表达质粒和空载体分别转入SGC-7901胃癌细胞中,经聚合酶链反应(PCR)对转染基因的整合鉴定后,观察基因转染对细胞形态学、细胞内pH值、体外生长状况、细胞周期以及双层软琼脂克隆形成能力和裸鼠成瘤力的影响.结果:光镜及透射电镜下细胞形态恶性程度降低.Anti-7901细胞胞内pH值显著低于Zeo-7901细胞和空白对照组SGC-7901细胞内pH值(6.77±0.05 vs 7.24±0.03,7.26±0.03,P<0.01).Anti-7901细胞生长速度明显减慢,出现接触抑制,呈单层生长,细胞凋亡率显著高于Zeo-7901细胞和空白对照组SGC-7901凋亡率(26.1% vs 5.12%,4.48%,P<0.01).Anti-7901细胞在双层软琼脂中集落形成率显著低于Zeo-7901和空白对照组SGC-7901细胞(9±3.54‰ vs 40±4.53‰,38.6±4.63‰,P<0.01).接种Zeo-7901细胞和空白对照组SGC-7901细胞裸鼠皮下长出肿瘤,成瘤率为100%,而接种Anti-7901细胞裸鼠皮下未长出肿瘤,成瘤率为0%.结论:反义技术干预可使NHE1基因表达下调,导致细胞内酸化,诱导细胞凋亡,达到了有效治疗胃癌的目的,为胃癌基因治疗提供了新的思路.
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靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响
目的:探讨转入靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响.方法:设计、合成一对survivin编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体PSilencer2.1,构建siRNA真核表达载体,经稳定转染HepG2细胞后对转基因后肿瘤细胞的生物学行为进行观察.结果:测序证实siRNA真核表达载体构建成功.通过RTPCR及流式细胞术检测,siRNA在mRNA及蛋白质水平抑制survivin基因表达分别达73%和75%.转染细胞生长速度明显减慢,凋亡率增加15倍.裸鼠体内成瘤率下降75%,9-30 d肿瘤体积分别为0.10±0.01 cm3,0.30±0.03 cm3,0.39±0.11 cm3,0.45±0.13 cm3,0.49±0.07 cm3,0.58±0.01 cm3,0.60±0.10 cm3,0.65±0.07 cm3,与对照组相比差异显著(P<0.01).结论:靶向survivin的siRNA能有效降低目的基因的表达并能在体内体外抑制肝癌细胞株HepG2的生长.为进一步逆转肿瘤细胞的耐药性提供了理论指导.
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DPC4基因转染对结肠癌细胞生物学行为的影响
目的:研究DPC4基因转染对结肠癌细胞生物学行为的影响,探讨DPC4在结肠癌的发生和发展中的作用.方法:利用基因重组技术构建PcDNA3.1-DPC4质粒;利用脂质体介导转染技术和G418筛选得到稳定表达Smad4蛋白的DPC4+-SW620(PcDNA3.1-DPC4转染的SW620高转移性结肠癌细胞株)细胞模型;采用免疫组化S-P法和Western blot检测细胞中Smad4的表达;生长曲线和平板克隆形成实验检测其生物学行为的改变采用流式细胞术检测其s期细胞百分数(s%)和凋亡率.结果:成功构建了PcDNA3.1-DPC4质粒;DPC4+-SW620细胞的Smad4蛋白表达于细胞质及细胞核,以细胞质为主,且smad4蛋白表达水平明显高于SW620细胞及PcDNA3.1-SW620细胞(PcDNA3.1转染的SW620细胞);DPC4+-SW620细胞的倍增时间为116h,较SW620细胞(31h,P<0.01)及PcDNA3.i-SW620细胞(29h,P<0.01)明显延长;DPC4+-SW620细胞的克隆形成率为(12%),明显低于SW620细胞(69%,P<0.01)及PcDNA3.1-SW620细胞(67%,P<0.01)的克隆形成率;与SW620细胞及PcDNA3.1-SW620细胞相比较,DPC4+-SW620细胞Go-G1期细胞百分数增多,s期细胞百分数明显减少(P<0.05);与SW620细胞及PcDNA3.1-SW620细胞相比较,DPC4+-SW620细胞的凋亡率较高.结论:成功地构建了质粒PcDNA3.1-DPC4,并转染SW620细胞株,得到稳定且表达Smad4蛋白明显增强的细胞模型;DPc4对结肠癌细胞增生的调控可能是通过DPc4抑制细胞生长和诱导细胞凋亡两方面作用实现的.
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普伐他丁对血管平滑肌细胞生物学行为的影响
血管平滑肌细胞(VSMCs)与粥样斑块的发生及其稳定性以及再狭窄的发生密切相关.许多实验表明,亲脂性他丁类药物可以抑制包括VSMCs在内的许多细胞的增殖,促进细胞凋亡.但是,有关亲水性他丁类药物对细胞生物学行为影响的报道颇不一致.本研究观察亲水性他丁类药物普伐他丁对VSMCs迁移、增殖、凋亡及p27kip1表达的影响.
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腺病毒介导eNOS基因转染对血管平滑肌细胞生物学行为的影响
本研究利用基因重组技术构建携带人eNOS基因的复制缺陷腺病毒,转染培养的血管平滑肌细胞(VSMCs),探讨其对VSMCs增殖、迁移和凋亡的影响.
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血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞生物学行为的影响及其机制
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TIMP-1基因对大鼠血管平滑肌细胞生物学行为的影响
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烧伤前后大鼠血清对骨髓基质细胞生物学行为的影响
目的:观察烧伤前后大鼠血清对体外培养的大鼠骨髓基质细胞的生物学行为的影响,为骨髓基质细胞在创伤修复中的应用奠定实验基础.方法:取Wistar大鼠,处死分离骨髓,原代培养骨髓基质细胞,传代后分别用含有10%胎牛血清、正常大鼠血清、烧伤后3d大鼠血清和烧伤后14d大鼠血清的F-12培养基培养,用MTT法测定其生长曲线,PI染色,流式细胞仪分析细胞周期、DNA含量和细胞凋亡率.结果:用含有10%大鼠血清的F-12培养基传代培养的细胞生长曲线相似,但与含有FCS的F-12培养基传代培养的明显不同.前者倍增时间缩短,N组、B1组、B2组细胞群体倍增时间分别为23.7h、18.6h、20.2h.平台期所能达到的细胞总数明显增加.烧伤后大鼠血清处理过的细胞中G0/G1期细胞比例明显低于其它两组,而S期细胞的比例则相反.正常大鼠血清处理过的细胞中G2+M期细胞的比例则比其它组明显升高.大鼠血清处理过的细胞中DNA含量明显高于胎牛血清培养的细胞,而烧伤后的大鼠血清处理过的细胞中DNA含量则明显高于正常大鼠血清处理过的细胞.而烧伤后3d的大鼠血清处理过的细胞的凋亡率比其它组细胞明显升高.结论:大鼠血清比胎牛血清能更好地促进大鼠体外培养的骨髓基质细胞生长;烧伤大鼠血清内可能含有多种能影响骨髓基质细胞生长的物质,且其含量随烧伤的时间改变而变化,对骨髓基质细胞生长的影响是复杂的.
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介入化疗对直肠癌细胞增殖、凋亡和血管生成的影响
我们回顾性地研究了直肠癌组织微血管密度(MVD)值,血管内皮生长因子(VEGF)表达,直肠癌组织中的原位凋亡,并且用Ki67标记指数评定肿瘤增殖能力.探讨直肠癌血管生成与癌细胞生物学行为之间的关系,以及术前介入化疗对它们的影响.
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bFGF基因转染对成骨细胞生物学行为的影响
碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是调控成骨细胞增殖和分化的首选生长因子之一,而且还是一种强大的毛细血管增殖刺激剂。但外源性生长因子半衰期短,需反复给药,且价格昂贵[1,2]。我们将bFGF基因由体外转入兔骨膜源成骨细胞,观察了其对成骨细胞生物学的影响,报告如下。1.材料与方法:含有bFGF cDNA的克隆载体puc13-rbFGF由日本Inawashiro博士惠赠,用EcoR I酶切puc13-rbFGF及真核表达载体pcDNA3,用T4DNA连接酶连接后构建pcDNA3-bFGF重组表达质粒并鉴定。无菌条件下取2个月龄新西兰兔之双侧股骨和胫骨骨膜,37℃下用0.25%胰蛋白酶和0.1%I型胶原酶各消化30min及2 h,将分离细胞接种于50ml培养瓶,加入含15%胎牛血清、10-7 M地塞米松、50mg/L维生素C、100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养基,在37℃5%CO2培养箱培养,用钙钴法行碱性磷酸酶(ALP)染色对培养细胞进行鉴定。
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增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为及其影响因素
成纤维细胞( fibroblast,FB)是创面修复的主要细胞,它通过迁徙、增殖、分化、合成、分泌及凋亡等生物学行为的有序进行参与创面修复过程.创面正常愈合是FB、细胞因子及细胞外基质间相互作用达到平衡状态的结果.当细胞因子、细胞外基质及FB等的相互调节平衡失调,其一可致FB的生物学行为发生变化,致使增生性瘢痕形成;另外,可致创面愈合减慢,形成慢性难愈性创面.因此,FB的生物学行为与创面正常愈合及增生性瘢痕的形成密切相关.综合了解影响瘢痕FB生物学行为的因素,寻求一条综合调节瘢痕FB生物学行为及其因素的方法,在促进创面正常愈合及防治瘢痕形成均有重要意义.本文就增生性瘢痕FB生物学行为及其影响因素的研究作一综述.
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泛素水解酶22对子宫颈癌CaSki细胞生物学行为的影响
子宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,严重危害妇女健康,目前尚缺乏对其确切有效的基因治疗手段[1]。泛素水解酶22(ubiquitin-specific protease 22, USP22)是去泛素化酶的1种,广泛存在于肌肉、肝脏、肺等组织中。近年的研究表明,USP22基因在多种恶性肿瘤组织中异常高表达,沉默USP22基因表达对恶性肿瘤的发生、发展具有明显的抑制效果[2]。但目前尚缺乏USP22基因与子宫颈癌发生、发展之间关系的相关研究。本研究采用具有沉默USP22基因表达功能的小分子干扰RNA(siRNA),对子宫颈癌CaSki细胞进行基因治疗,观察USP22-siRNA对CaSki细胞中USP22基因表达的影响,以及对CaSki细胞增殖和侵袭转移能力的影响,并探讨USP22-siRNA作用的分子生物学机制。
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RNA干扰技术抑制TM4SF9基因的表达对绒毛膜癌细胞生物学行为的影响
绒毛膜癌(绒癌)是一种继发于正常或异常妊娠之后的滋养细胞肿瘤,恶性程度高,其危害主要在于转移发生早且广泛[1],如能早期提供有效、客观判断滋养细胞侵袭力的指标或标志物,则对临床工作有重大的指导意义.
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雌、孕激素对早孕蜕膜基质细胞中Mig和IP-10表达的影响
母胎平衡机制一直是生殖研究领域的热点和难点之一.有研究证实,母胎界面中表达的趋化因子-趋化因子受体系统在保持母胎平衡中起重要作用[1-2].CXC类趋化因子Mig和IP-10在早孕蜕膜上皮及基质细胞中高表达,其表达变化与蜕膜中免疫细胞聚集和滋养细胞生物学行为有关[3-4].
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二氧化锆对大鼠牙周膜细胞分子生物学行为的影响
目的:评价二氧化锆对大鼠牙周膜细胞分子生物学行为的影响.方法:培养大鼠牙周膜细胞.制作二氧化锆、钯银合金、镍铬合金试件及其浸提液.将各组浸提液作用于细胞,检测24h、48h、72h的各组浸提液对细胞活性的影响;检测细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率及各组细胞周期比例;检测不同浸提液组处理对大鼠牙周膜细胞Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9的mRNA相对表达量.结果:24h、48h、72h时,二氧化锆组、钯银合金组、DMEM组OD值间均无统计学差异(P>0.05),而镍铬合金组OD值明显高于其余各组(P<0.05).细胞凋亡结果发现,早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率,二氧化锆组、钯银合金组、镍铬合金组间均有统计学差异(P<0.05).细胞周期结果发现,Prl指数钯银合金组与二氧化锆组相比有统计学差异(P<0.05),钯银合金组与镍铬合金组之间的Prl指数无统计学差异(P>0.05).各组Caspase-3、Caspase-9的2-△△CT值,二氧化锆组、钯银合金组、DMEM组间差异无统计学意义(P>0.05),镍铬合金组高于DMEM组(P<0.05).Caspase-8的2-△△CT值,二氧化锆组、钯银合金组与DMEM组差异有统计学意义(P<0.05),二氧化锆组与钯银合金组之间差异无统计学差异(P>0.05),镍铬合金组高于二氧化锆组、钯银合金组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:二氧化锆在提高细胞增殖活力,抑制细胞凋亡方面优于钯银合金及镍铬合金材料,其良好的生物相容性不会影响牙周膜细胞的细胞活力、细胞周期、细胞凋亡以及相关基因的表达.
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肺癌转移机制研究进展
一、肺癌转移概述肺癌是起源于支气管上皮的人类发生率和病死率均较高的恶性疾病之一[1].其中,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占80%,其5年生存率为15%,而小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)占15% ~20%,其恶性程度较高,往往发现时已经恶化甚至转移[2].肺癌病人中仅有16%能在早期得到诊断,肺癌转移是治疗失败和病人死亡的主要原因.肺癌晚期可出现各个不同脏器的转移,可引起相应的症状,常给病人带来极大的痛苦甚至威胁到生命.临床常见的转移有肺癌脑转移、肺癌骨转移等.肺癌的复发和转移是具有多重步骤的复杂过程,它涉及肿瘤细胞间黏附作用降低、肿瘤细胞外基质的降解、肿瘤细胞侵袭能力的增强、肿瘤新生血管的生成等多种细胞生物学行为,这些不同的改变与相关基因调控,分子信号通路异常等有关.本文将从肺癌干细胞、肺癌转移相关基因、分子及信号通路和肺癌特异性转移等方面介绍近年肺癌转移的研究进展.
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PTPRO在肝脏疾病中的相关研究
自Virchow提出肿瘤有可能起源于慢性炎症这一假说后,开启了人们对炎症和肿瘤关系的探索之路[1]。目前研究发现TNF-α、IL-6、NF-κB等炎症因子均可促进肝癌的发生、发展[2,3]。在我国,病毒性肝炎以乙型(Hepatitis B Viral,HBV)和丙型(Hepatitis C Viral,HCV)为常见,而长期慢性炎症可推进肝纤维化及肝硬化的发展,进而诱发肝癌(Hepatocel-lular Carcinoma,HCC)[4,5]。PTPRO基因目前被认为是一种抑癌基因,共有6种变异体,它以全长形式(PT-PRO)存在于人肝脏、肾脏、脑、乳腺,以短截体形式(PTPROt)存在于B淋巴细胞及巨噬细胞中[6]。目前研究表明PTPRO基因在肺癌、乳腺癌、肝癌等肿瘤中因启动子CPG岛甲基化而沉默,并影响肿瘤的转移、增殖等细胞生物学行为[7]。而肝炎、肝硬化被认为是肝癌的癌前病变,目前针对PTPRO基因在肝炎、肝硬化中的作用机制亦受到广泛关注。
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陆树良:重视糖尿病皮肤组织的“隐形损害”
在近日召开的2013年中国糖尿病足及相关疾病论坛上,上海交通大学医学院附属瑞金医院上海市烧伤研究所陆树良教授发表了题为《糖尿病皮肤组织的“隐形损害”现象》的报告。
糖尿病皮肤组织损伤在未损伤、组织结构完整性未遭到破坏的情况下,已经存在着组织学和细胞生物学行为的改变,我们将这一糖尿病皮肤的异常改变称为“隐性损害”。这一“隐形损害”现象可能是糖尿病皮肤易损或创面形成后难以愈合的重要原因之一。