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本草九代口服液对小鼠的免疫调节作用
目的受试物对小鼠的免疫调节作用方法 160只雌性小鼠,按体重随机分为4组,每组40只.设1个对照组和3个剂量组(1 670、16 700、50 000μl/kg).依薛彬等方法检测免疫指标.结果本实验在小鼠经口给予本草九代口服液后,各实验组及对照组体重增长良好.在本草九代口服液给予剂量为1 670和16 700μl/kg时,淋巴细胞增殖能力增加,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);剂量为16 700μl/kg时,小鼠的吞噬率、吞噬指数及抗体积数均增加,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);剂量为50000μl/kg时,抗体生成细胞数和足跖增加厚度均显著高于对照组(P<0.01).结论不同剂量的本草九代口服液对小鼠体液免疫、细胞免疫、巨噬细胞吞噬功能均有不同程度的提高作用,除PFC数和足跖厚度两项指标的高剂量组效果明显外,其他如巨噬细胞吞噬功能、淋巴细胞转化能力、抗体积数均以中剂量组效果为佳.而近年来对多糖的免疫调节与剂量关系的实验研究认为,多糖的免疫调节量效关系呈钟罩形,存在着作用的适剂量范围.因此,并非推荐食用量越大,功效成分浓度越高,免疫调节作用就越强.此次的研究结果也证实了如上观点.本研究说明,本草九代口服液对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫均有一定的促进作用.
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白血病抑制因子在病理妊娠领域的研究进展
白血病抑制因子(LIF)属于白细胞介素6(IL-6)家族中的一员,因其具有促进小鼠MI型白血病细胞分化并抑制其增殖而得名[1].随着研究的深入,LIF作为一种多功能细胞因子逐步为人们所熟知,在体外它具有促进骨髓白血病细胞分化,诱导细胞向正常分化,抑制胚胎干细胞分化等重要作用,在体内它参与机体应激反应和代谢调节.在生殖领域自1988年国外学者相继证实LIF能抑制内细胞群来源的有多向分化潜能的胚胎干细胞的分化,并保持其增殖能力以来,越来越多的研究发现LIF影响生殖活动的各个环节[2],在女性生殖系统中发挥着重要作用[3].
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中药二仙汤对骨髓干细胞增值和迁移能力的影响
目的:观察二仙汤对骨髓间充质干细胞增殖能力和迁移能力的影响,为二仙汤协同骨髓间充质干细胞治疗卵巢早衰提供基础实验依据.方法:分别将20只SD雌性大鼠制备含二仙汤的药物血清(含药组)和无药物血清(对照组),取10只大鼠体外分离骨髓间充质干细胞进行培养,通过对照法对细胞形态学观察、MTT法测定、细胞周期及细胞迁移能力进行检测并分析.结果:与对照组相比,含药组细胞增殖能力和迁移能力均明显增强.结论:二仙汤协同骨髓干细胞自体移植治疗卵巢早衰疾病具有可行性.
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神经干细胞微环境的研究进展
传统观念认为,成年哺乳动物中枢神经系统是不可能再生的.近年来的一些研究表明,成年啮齿类和灵长类动物CNS仍然可产生新的神经元,并证实在成人脑组织中也有神经干细胞(neural stem cells,NSCs)存在.神经干细胞在体外可被生长因子诱导而增殖,并保持分化成神经元或胶质细胞的潜能,移植后能在宿主的神经组织中生存、整合及分化,并且通过基因转染后可表达外源性基因产物.因此,人们对神经系统损伤的修复机制以及神经系统退行性疾病的治疗又有了新的认识,目前迫切需要解决的就是体外培养神经干细胞保持其强大的增殖能力和诱导神经干细胞定向分化的问题.目前已证实,局部微环境在神经干细胞的增殖和分化中起着重要作用,成体脑内神经干细胞微环境因素包括细胞间的相互作用、体细胞信号、血管微环境、细胞外基质和基板等,以及在胚胎水平通过染色体修饰和重建的调控亦参与了干细胞生物学的增殖和分化过程.
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扣带素--调节血管内皮细胞屏障功能的新靶点
血管内皮细胞间连接顶端的紧密连接是构成旁细胞屏障的重要结构。紧密连接由跨膜蛋白和胞浆蛋白组成,其中胞浆蛋白作为桥梁连接跨膜蛋白和细胞骨架蛋白,因此在决定紧密连接结构的完整性中发挥了重要的作用。然而目前,关于血管内皮中特异性表达的重要胞浆蛋白的研究仍十分有限。扣带素(cingulin)是1988年发现的一种紧密连接胞浆蛋白,已有研究表明 cingulin 在上皮细胞中参与调控紧密连接跨膜蛋白的表达以及细胞的增殖能力。然而,cingulin 在血管内皮中的作用尚不清楚。作者首先使用免疫组化和免疫荧光技术检测到人皮肤、脑和肺组织的血管内皮上存在 cingulin 特异性的表达,其与经典的紧密连接粘连蛋白(zonula occludens-1,ZO-1)存在共定位。在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中过表达 cingulin 可增加紧密连接链的长度,增加跨内皮细胞电阻值,并降低分子量为376 Da 和70000 Da 荧光示踪分子的通透性;而在敲低 cingulin的小鼠内皮细胞中,低分子量荧光示踪分子的通透性显著增加,这提示 cingulin 可经促进紧密连接的形成进而增强内皮细胞的旁细胞屏障功能。进一步,作者在 cingulin 敲除小鼠中通过尾静脉注射生物素(作为旁细胞途径示踪分子)后发现,菱形窝下缘后区的神经元以及浦肯野细胞均呈现生物素阳性染色,提示在这些部位的血脑屏障受到了破坏。以上结果表明,cin-gulin 可调控血管内皮细胞的屏障功能,其机制与调节紧密连接结构的形成和稳定性有关,这为将来治疗脑和外周器官的血管渗透综合症提供了新思路。
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微小RNA-214在食管鳞癌中的表达及其生物学功能研究
目的 探讨微小RNA-214(miR-214)在人食管鳞癌中的表达及其与人食管鳞癌细胞(TE-2)增殖侵袭的关系.方法 采用实时荧光定量PCR法检测25例食管鳞状细胞癌患者癌组织和远癌正常食管上皮组织中miR-214的相对表达量.通过脂质体转染将miR-214模拟物(miR-214_mimic)、miR-214抑制剂及随机序列导入TE-2细胞,以正常培养的TE-2细胞为阴性对照组,应用CCK-8实验和Transwell实验检测各组TE-2细胞的增殖与侵袭能力.结果 25例食管鳞癌患者癌组织和远癌正常组织中miR-214相对表达量的分别为0.72±0.50和1.58±0.96,差异有统计学意义(P<0.05).TE-2细胞转染miR-214模拟物96 h后,转染miR-214组A490值较阴性对照组明显降低(P<0.05),转染miR-214抑制剂组A490值较阴性对照组明显升高(P<0.05);转染miR-214组细胞侵袭能力较转染随机序列组和阴性对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-214在人食管鳞癌中存在差异表达,并可能与食管鳞癌的增殖能力有关.
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免疫缺陷小鼠体内人源化骨髓微环境的重建
目的:通过在免疫缺陷小鼠体内重建人源的骨髓微环境,为进一步研究人异常的骨髓微环境在人白血病发生发展中的作用提供模型.方法:通过反复冻融浓缩后血小板获得人血小板裂解液(HPL),以α-MEM作为基础培养液分别添加10% HPL和10%胎牛血清(FBS)培养骨髓来源的间充质干细胞.比较两种添加成分对MSC形态、免疫表型、多向分化能力以及增殖能力的影响;将HPL培养的MSC接种于β-TCP支架材料并移植到免疫缺陷小鼠背部皮下,8-12周后取出移植体做HE染色,观察MSC在体内形成骨以及骨髓结构的能力.结果:用HPL和FBS培养的MSC均呈现长梭形纤维样细胞结构,均具有多向分化能力;两种体系培养的MSC免疫表型无明显区别,但用人血小板裂解液培养的MSC具有更强的增殖能力和向成骨分化能力;用人血小板裂解液培养的MSC具有在体内形成骨组织样结构的能力.结论:HPL培养的MSC具有更强的增殖能力以及成骨分化潜能,它能在NOD/SCID鼠上重建人源化骨髓微环境.
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低氧对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
近年来,大量研究表明骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)是一群具有多向分化潜能、低免疫原性的多能干细胞,在一定的诱导条件下能终分化成心肌、骨、软骨、神经等多种组织,易于在体外分离培养,并易于为外源基因转染和表达。这些特性使 BMMSCs成为在细胞治疗、基因治疗中有效发挥疗效的理想工程细胞,展示了其作为一种新的理想干细胞来源在治疗多种缺血缺氧性疾病中的良好应用前景[1-3]。但骨髓中 BMMSCs含量极其稀少,研究显示,BMMSCs在新生儿骨髓单个核细胞中占0.01%,随着年龄增大,数量逐渐降低,到80岁仅占0.00005%[4]。而应用于临床治疗的干细胞每次需要5千万~2亿个,这不可能从一个捐献者体内分离获得[5-7],而是需要进行体外扩增。但是,BMMSCs 体外增殖亦较慢,因此,如何实现少量取样,批量获取是 BMMSCs满足临床试验研究的当务之急。BMMSCs 的自我更新受多种复杂微环境的调控,如细胞间的接触、各种蛋白及生长因子等,而微环境中的氧张力是调控 BMMSCs功能的重要因素[8]。早在1958年,Cooper等[9]发现在低氧条件下培养细胞时,细胞的增殖能力增强。骨髓中氧张力仅为1%~6%[10-13],因此,推测低氧可能更适合骨髓间充质干细胞的培养。另外,当缺血性心脏病、缺血性脑病等发生时,局部损伤器官多处于低氧微环境中,局部氧浓度可低于0.2%[14-15],BMMSCs移植后疗效的发挥与损伤部位的低氧环境密切相关。因此,开展低氧条件对间充质干细胞生物学特性的研究对于 BMMSCs的应用具有非常重要的意义。
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临床用间充质干细胞的质量控制研究
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞.间充质干细胞(MSCs)是属于中胚层的一类多潜能干细胞,主要存在于结缔组织和器官间质中,如骨髓、脂肪、脐带、羊膜组织,间充质干细胞具有强大的增殖能力和免疫调节功能,在适宜的体内或体外环境下具有分化为肌细胞、肝细胞、成骨细胞、软骨细胞、基质细胞等多种细胞的能力.间充质干细胞由于具备多向分化和免疫调节功能,因此在治疗一些退行性和自身免疫性疾病等方面具有广阔的临床应用前景.
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肿瘤增殖标记分子Ki-67和增殖细胞核抗原及其在病理诊断中的应用
活跃的增殖能力是恶性肿瘤的重要标志之一,在日常病理诊断工作中,判断肿瘤的增殖能力是鉴别肿瘤良恶性、提示肿瘤预后的重要指标.在高倍视野下进行核分裂象计数是简单易行的方法,然而由于视野选择和不同阅片者之间判断差异所带来的误差,使这种计数容易带有一定的主观性.
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类风湿性关节炎造血干/祖细胞Wnt5a、β-catenin基因表达的研究
类风湿性关节炎( rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性破坏性关节炎为主要特征的系统性自身免疫病,其发病机制尚不清楚。近年来发现,RA患者造血干细胞/祖细胞( hematopoietic stem/progenitor cell,HSC/HPC)增殖能力受损,Wnt信号途径是调控HSC/HPC增殖的重要信号途径,可能参与其调节。本研究旨在对RA患者中外周血CD34+ HSC/HPC中Wnt5a、β-catenin mRNA的表达进行研究,了解Wnt信号途径分子基因表达的异常,为认识RA发病机制在HSC/HPC中的异常提供依据。
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组织原位记忆T细胞的研究进展
黏膜部位是诸多病原体入侵的门户,近些年来新发的传染病大部分都是通过黏膜部位传播,如人类免疫缺陷病毒Ⅰ型( human immunodeficiency virus,HIV-1)、流感等。面对各种外来病原体的不断入侵,免疫系统在黏膜部位也采取了多样的抵御措施[1],如分泌防御素、黏蛋白以及趋化抗原特异性免疫记忆细胞的归巢[2]。在黏膜部位诱导抗原特异性的免疫记忆是近些年来黏膜免疫的重要目标。记忆T细胞是免疫记忆的主要载体之一,其形成经历了抗原特异性克隆的增殖、收缩和记忆3个时相,只有少数细胞终成为长效记忆性T细胞。与初始T细胞相比,记忆T细胞活化阈值很低,不需要专职抗原提呈细胞的协助;其维持与效应T细胞不同,不需要抗原的持续存在[3]。根据能否产生速发性效应功能以及归巢受体的表达,可将记忆性CD8+T 细胞分为两群:中心记忆 T 细胞( central memory T cell, TCM )和效应记忆 T 细胞( effector memory T cell, TEM )。 TCM(表达CCR7和 CD62L分子),主要分布于淋巴结和脾,介导反应性记忆,再次接触抗原时迅速增殖,不直接行使效应功能;而TEM不表达归巢到淋巴结的分子CCR7和CD62L,主要存在于脾和淋巴组织以外的器官和组织[4],不断参与周身循环[5],可迁移至外周炎症组织显示速发性效应功能,增殖能力较低,介导保护性记忆。目前大部分对于记忆T细胞的理解主要是来源于对位于血液循环以及淋巴组织中的T细胞的研究。近年研究发现一种分化更为完全的记忆T细胞,因其长期存在于病原体感染过的组织部位而被命名为组织原位记忆T细胞( tissue-resident memory T cells , TRM )。 TRM不参与血液循环以及淋巴循环[4],在感染早期建立,其维持不需要外周循环中的TEM以及TCM的补充,并且为局部组织提供免疫保护。与TEM相比其在表型、功能特征以及组织分布上具有较大的异质性。实验表明这群定居在外周组织中的记忆T细胞在对抗局部感染的过程中起着重要作用,本文将就TRM的发现、定位、功能以及诱导与维持机制等方面的研究进展进行综述。
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慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA复制对其表达IFN-γ和IL-10的影响
慢性乙型肝炎患者中往往存在针对HBV的免疫功能低下和免疫功能的紊乱.其体内的免疫功能低下和紊乱是否与乙型肝炎病毒HBV直接感染免疫细胞有关,目前尚无肯定的结论.为了阐明HBV感染免疫细胞对慢性乙型肝炎免疫功能的影响,本实验比较了外周血单个核细胞(PBMC)中HBV cccDNA阳性和阴性慢性乙肝患者PBMC的增殖能力和细胞因子IFN-γ、IL-10的产生能力.
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PKC信号传导对ITP患儿T淋巴细胞增殖与凋亡的调控研究
经确诊的35例特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿为观测对象,男15例,女20例,年龄1岁~14岁,中位年龄5.3岁.正常对照30例为健康儿童,排除ITP及其它自身免疫性疾病,其中男13例,女17例,年龄1.5岁~12岁,中位年龄4.5岁.收集ITP患儿及健康儿童外周抗凝静脉血,分离纯化T细胞.以20%小牛血清RPMI 1640培养液调整T细胞浓度至106/ml,接种于24孔培养板中,每份标本接种6孔,编为3组,每组2孔.第1组为空白对照组、第2组加入蛋白激酶C(PKC)激动剂PMA、第3组同时加入激动剂PMA和抑制剂H-7,于37℃,5%Co2培养24、72h,采用CCK-8法检测T细胞的增殖能力,运用AnnexinFITC及PI荧光染液作双色流式细胞术检测T细胞的凋亡率.计算各组均数与标准差,用x±s表示,全部数据均经SAS8.22统计软件分析,组间差异的显著性用方差分析的q检验,P<0.05为差异有统计学意义.
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siRNA靶向抑制Tspan-1对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探究siRNA靶向抑制Tspan-1对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 实验组针对Ts-pan-1基因2个不同位点进行siRNA沉默,分别命名为Tspan-1-siRNA-1、Tspan-1-siRNA-2.采取完全剔除Ts-pan-1基因的作为阴性对照组,同时选取空白对照组.Wester blot方法检测各组的Tspan-1mRNA和蛋白的表达情况,选取基因沉默效果强的一组进行结肠癌细胞HCT116细胞的转染,分别对转染前后细胞的增殖能力和侵袭能力进行检测,对siRNA靶向抑制Tspan-1能力进行评价和分析.结果 相比于空白对照组,实验组各组细胞mRNA均出现了不同程度的下降,其中Tspan-1-siRNA-1、Tspan-1-siRNA-2,两组分别相比对照组下降61.2%,57.2%.随着转染时间的增加,实验组细胞增殖的速度明显放缓,其中第2、3、4、5天吸光度值要明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有显著性(P<0.05);同时两个对照组之间的吸光度值无显著差异(P>0.05);经过转染24 h后,实验组转移到膜上的细胞数要显著少于对照组,而其余两组无显著差异(P>0.05).结论 Tspan-1基因经过siRNA沉默之后,能够有效降低结肠癌HCT116细胞的增殖和侵袭能力,siRNA靶向抑制Tspan-1基因可以作为治疗结直肠癌重要的的分子手段之一.
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骨髓干细胞动员在治疗缺血性心肌疾病中的进展
心肌梗死是人类常见疾病之一,病情凶险,病死率较高.传统观念认为心肌细胞属于不可再生细胞,当心肌细胞受到损伤导致细胞死亡后,心肌细胞的总数下降,梗死区坏死的心肌细胞则被纤维瘢痕组织等所代替,发生心室重构,终导致心脏功能衰竭[1].1998年Kajstura等[2]利用共聚焦显微镜观察发现正常的成熟心肌细胞具有分裂和增殖能力, 2001年Beltrami等[3]在共聚焦显微镜下观察到梗死的心肌组织中有丝分裂过程中的纺锤小体、收缩环、核分裂和胞质分裂,心肌梗死后有少量心肌细胞发生分裂增生,使心肌是"永久性细胞"的观念受到挑战.
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Merlin:细胞-细胞受体信号的协调者
科学家们在研究2型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type-2,NF2)时发现了肿瘤抑制因子Merlin(即神经膜蛋白).细胞之间的相互接触,可以抑制细胞无限增殖.Merlin正是通过"接触-依赖"机制抑制细胞增殖,从而减低肿瘤细胞的增殖能力,降低肿瘤转移能力.
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干细胞移植治疗与重要脏器功能的修复与重建
干细胞(stem cells, SCs)是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞,通过分裂维持自身细胞群的大小,同时又可分化成为各种不同的组织细胞,从而构成机体各种复杂的组织器官[1]。根据干细胞所处的发育阶段分为:胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs);成体干细胞(somatic stem cells,SSCs)。人体几乎所有组织都存在经历相当程度的分化SSCs,但在特定条件下,一种组织的SSCs可以“横向分化”成其他组织的功能细胞,如间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)可以分化成神经、肌肉、软骨和骨等多种细胞[2]。MSCs属于中胚层的一类多能干细胞,主要存在于结缔组织和器官间质中,以骨髓组织中含量为丰富,且主要来源于骨髓,又称为骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)。Friedenstein等[3]于1976年首先分离BMSCs,研究证实BMSCs具有强大的增殖能力和多向分化潜能、免疫调节及免疫重建功能,并且来源方便,易于分离、培养、扩增和纯化,经多次传代扩增后仍具有干细胞特性,不存在免疫排斥。因此,BMSCs可能成为细胞移植和基因治疗的理想材料,目前国内外正在探索用于神经系统疾病及多领域多学科难治性疾病的治疗,并已取得了重大突破性进展[4-6]。我国MSCs的研究发展极为迅速,某些核心技术已占国际领先地位,2001年国家批准建立“国家干细胞工程产品产业化基地”,2002年4月在天津建立“国家干细胞工程技术研究中心”。
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骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化及其在神经修复中的应用
近几年来,干细胞已成为生物学和医学领域的研究热点.间充质干细胞来源于中胚层,具有很强的自我更新、增殖能力以及多向分化的潜能.而骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenclaymal stem ceIls,BMSCs)因具有易于分离、培养、扩增、长期培养的过程中始终保持多向分化的潜能、免疫原性低、遗传背景稳定等特性,使之成为干细胞研究领域的焦点.近的研究表明BMSCs在体外能被诱导成神经元样细胞,且植入体内能改善神经损伤症状.因此,本文结合新研究进展就体外诱导BMSCs向神经元样细胞的分化及其在神经修复中的应用作一综述.
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针刺对在体神经干细胞的作用及其机制
神经干细胞( neural stem cell,NSC)是来源于神经组织及神经组织发源地、具有干细胞特征,终生保持自我更新能力并能分化为各种神经组织细胞(包括神经元、神经胶质细胞、少突胶质细胞等)的一类细胞。神经干细胞具有以下特征:①有增殖能力;②在整个生命过程中能自我维持或自我更新;③能通过扩增祖细胞而产生大量的后代;④具有向神经组织多细胞系分化的能力;⑤损伤或疾病能刺激神经干细胞的分化。近十年的研究表明,神经干细胞不仅存在于成年哺乳动物的脑组织内,而且还被证实这些神经干细胞在细胞因子、激素或环境因素的调控下能在体外分裂,并可进一步分化神经元或胶质细胞。当成年脑组织或脊髓中的神经元或胶质细胞受损后,这些神经干细胞增殖、迁移、分化为新的神经元能够替代受损组织,参与修复脊髓和脑的功能。