IFN-γ诱导的自噬抑制人胎盘胎儿侧来源间充质干细胞增殖

目的 探讨IFN-γ诱导无血清培养人胎盘胎儿侧来源MSCs自噬的发生,并分析自噬对细胞增殖的影响.方法 用酶消化法和无血清培养体系分离培养人胎盘胎儿侧来源MSCs,利用流式细胞仪和分化培养体系鉴定细胞属性;用质量浓度50 μg/L的IFN-γ处理入胎盘胎儿侧来源MSCs,以未处理细胞作为对照组,3-Ma处理为自噬抑制组;分别提取总蛋白,Western blot检测自噬标志基因LC3 Ⅰ/Ⅱ的表达;mRFP-GFP-LC3腺病毒感染细胞,观察细胞内点状聚集的情况;MTT法检测IFN-γ对细胞增殖的影响.结果 所分离细胞呈CD73、CD90和CD105阳性细胞,不表达CD14、CD34和CD45,具有向脂肪和成骨细胞分化的能力;IFN-γ可提高LC3Ⅱ的表达量(P＜0.05),荧光共聚焦显微境观察到IFN-γ处理细胞中的点状聚集显著增加;3-Ma可解除IFN-γ对MSCs增殖能力的抑制(P＜0.05).结论 IFN-γ诱导的自噬负调控人胎盘胎儿侧来源MSCs的增殖能力.

TNF-相关诱导凋亡因子及其受体在人胎盘组织中的免疫组织化学定位

目的探讨TNF相关诱导凋亡因子(TRAIL)及其DR4、DR5受体在人胎盘组织的表达及其意义. 方法免疫组织化学结合图像分析定量方法观察TRAIL及其DR4、DR5受体在人胎盘组织的表达及其含量的周龄变化. 结果人胎盘滋养层细胞、绒毛基质细胞及毛细血管的内皮细胞均呈TRAIL及DR4、DR5受体免疫反应阳性,阳性反应物分布于胞膜及胞质,胞核阴性.在人胎盘绒毛的不同发育阶段中,TRAIL的含量相对稳定,而其受体DR4、DR5的含量随着周龄的增加而升高. 结论结果显示胎盘不仅能产生TRAIL,而且也是TRAIL的靶器官,TRAIL及其DR4、DR5受体系统可能参与胎盘的特免调节.

应用搅拌式生物反应器大量扩增人胎盘间充质干细胞的实验研究

探讨应用搅拌式生物反应器培养技术体外扩增人胎盘间充质干细胞(hPDMCs)的方法.以 hPDMCs为种子细胞,利用微载体悬浮法在搅拌式生物反应器内进行体外培养,同时设置静态培养的培养瓶为对照组,观察细胞的扩增速率、细胞代谢(乳酸、葡萄糖、培养液的pH值)的变化,检测生物反应器培养前、后干细胞的表面标记物.hPDMCs 在搅拌式生物反应器内每代可以扩增 (10.55±1.62) 倍,明显高于对照组 (6.10±0.11) 倍的扩增值(P＜0.05),且细胞生长代谢指标优于对照组;流式细胞仪检测应用搅拌式生物反应器,培养后细胞表面标记物的表达率无明显改变(P>0.05). 搅拌式生物反应器能够提供良好的细胞生长环境,建立用于 hPDMCs 的大量扩增的体外三维培养体系.

人胎盘绒毛组织悬液支持脐血CD34+细胞体外扩增的作用

本研究旨在探讨不同时期的胎盘组织悬液对脐血造血干细胞体外扩增的作用,进一步了解随着胎龄的增长胎盘造血功能发生的变化.应用早期(B组)、中期(C组)和足月(D组)胎盘绒毛组织悬液,并设定空白对照(A组),以共培养的方式分4组进行体外扩增脐血造血干细胞并培养观察扩增后的集落形成能力.结果表明,以接种初浓度为对比,共培养7d后A组细胞呈逐渐衰减趋势,B组扩增效果不明显,仅为扩增前的1.40±0.20倍,C组和D组造血干细胞均能有效扩增,扩增倍数分别为2.93±0.50和4.80±0.40.集落培养14 d后的结果显示,C、D组集落形成总数明显高于A、B组,C组CFU-GM、CFU -GEMM、BFU-E集落数均略高于D组.结论:在没有外源性细胞因子存在的情况下,不同时期的胎盘绒毛组织悬液均可以支持造血干细胞的体外扩增,且随着胎盘发育其支持造血的功能呈不断增强的趋势.扩增后的造血干细胞的集落形成能力却呈先增强后减弱的现象,中期胎盘培养扩增后的干细胞集落形成能力强,略强于足月期胎盘扩增后的造血干细胞.

中间滋养细胞肿瘤及瘤样病变

在人胎盘中与绒毛相关的滋养细胞称为绒毛滋养细胞,而在其他部位的滋养细胞称为绒毛外滋养细胞.绒毛滋养细胞主要由细胞滋养细胞和合体滋养细胞组成,并有少量中间滋养细胞(IT).而绒毛外的滋养细胞几乎全部由IT组成,它浸润在蜕膜,子宫肌壁间和胎盘部位的螺旋动脉.根据IT所在部位的不同又将其分为绒毛 IT、种植部位细胞以及绒毛膜型IT.来自IT的肿瘤与病变是近年才被认识的,它包括胎盘部位滋养细胞肿瘤(PSTT),上皮样滋养细胞肿瘤(ETT),胎盘部位过度反应(EPS),胎盘部位结节或斑块(PSNP)[1,2].

食管、贲门癌染色体异常分析及意义

目的:研究食管、贲门癌细胞染色体异常及意义.方法:16例食管癌,3例贲门癌采用比较基因组杂交技术,以不同荧光染料分别标记正常人胎盘DNA和癌细胞DNA,与人中期染色体杂交,用荧光显微镜观察摄取图像,通过专用分析软件,确定染色体DNA的扩增和缺失.结果:食管、贲门癌同一患者可出现多条染色体扩增和缺失,可出现整条染色体或长臂或短臂或某一染色体上DNA位点的扩增或缺失,常见扩增有3q,17q,20q,8q,9q,11q,5p,17p;缺失为4q,4p,9q,18q;6例有8q扩增者,病变均侵犯食管壁全层、邻近组织且伴淋巴结转移.染色体DNA扩增数目多的见于Ⅱ期患者,Ⅰ期少.结论:食管、贲门癌细胞染色体DNA扩增和缺失与病变的发生、发展、转移和分期有关.

胎盘促肾上腺皮质激素释放激素与分娩发动及早产的关系

人类分娩发动与早产发生的机理一直不清楚.近年来,胎盘促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone, CRH)在妊娠期的作用已成为国外学者研究的热点,有关研究表明,胎盘CRH可能参与了分娩发动及早产发生的过程.下面就这一内容阐述如下.一、胎盘CRH的产生CRH是由41个氨基酸组成的神经多肽.在1981年首先由Vale等从羊的下丘脑中分离出,因其能刺激垂体释放促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone, ACTH)而得名.不久,从人胎盘中也分离出CRH多肽,并检测出CRH基因表达.

水通道蛋白-8在羊水过少人胎盘、胎膜中的表达

目的 了解水通道蛋白-8(aquaporin-8,AQP-8)在羊水过少人胎盘、胎膜中的表达.方法 随机选择2008年12月至2009年1月在广东省深圳市福永医院妇产科行选择性剖宫产孕妇16例为研究对象,满足单胎、足月、无妊娠合并症、未临产、无胎儿窘迫及胎儿畸形条件.将产前超声监测羊水深度＜8 cm的孕妇纳入研究组(羊水过少组,n=6),其余孕妇纳入对照组(n=10)(本研究遵循的程序符合深圳市福永医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书).两组患者年龄、妊娠情况及妊娠结局等比较,差异无显著意义(P>0.05).采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物霉(streptavidin enzyme complex, SABC)法检测两组胎盘和胎膜组织标本中水通道蛋白-8表达水平.结果 水通道蛋白-8在人胎盘及胎膜的羊膜上皮细胞均有表达,对照组胎膜中水通道蛋白-8表达明显低于研究组,且差异有显著意义(P<0.05).结论 水通道蛋白-8在人羊水过少的胎盘、胎膜中表达显著减少,提示水通道蛋白-8在母、胎液体交换及羊水膜内吸收途径中,可能发挥重要作用.

HPLC法测定人胎盘片原料中腺苷含量

目的:建立人胎盘(紫河车)中腺苷的反相高效液相色谱检测法.方法:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;以0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(A液),0.06mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-四氢呋喃(89:10:1)(B液)为流动相,梯度洗脱;检测波长:260nm.结果:线性范围:0.1～1.0μg,r=0.9999,回收率为99.3%,RSD为1.02%(n=9).结论:该方法结果准确,重现性好,可用于人胎盘片原料(紫河车)的质量控制.

人胎盘羊膜覆盖深二度烧伤创面疗效观察

我们自1989年以来采用新鲜双层人胎盘羊膜覆盖于腐皮脱落的深二度烧伤创面上,对深层羊膜的变化进行了观察.结果显示,绝及时清创后覆盖胎盘羊膜的变化进行了观察.

人胎盘和脐带血巨核系集落形成细胞的辐射敏感性

前置胎盘并植入胎盘10例分析

我院2000～2004年共收治前置胎盘并植入胎盘患者10例,现分析报道如下.1临床资料1.1发生率我院2000～2004年内住院分娩总数3500例,其中前置胎盘40例,前置胎盘并植人胎盘10例,占同期住院分娩总数的0.286%,占前置胎盘总数的25%.

放射免疫法测定羊胎盘粉中的雌二醇的含量

胎盘是中国传统养生学中一种保健品,它具有医疗和养生作用,而羊胎盘与人胎盘的营养结构相似,是人胎盘的佳替代物,且可以大量生产[1].

人胎盘组织来源造血干/祖细胞及其特性

背景:近年来的研究表明,除已知的人骨髓、外周血和脐带血中存在造血干/祖细胞外,人胎盘组织中也有造血干/祖细胞存在.目前为止,还缺乏对人胎盘组织造血干/祖细胞的增殖分化特性及人胎盘组织淋巴细胞亚群组成和免疫原性等的深入研究.目的:探究人胎盘组织是否含有比脐带血更丰富的造血干/祖细胞,并对其造血祖细胞系增殖分化能力进行检测,同时对人胎盘组织淋巴细胞亚群组成及表型特征进行分析.设计、时间及地点:开放性实验,于2004-01/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成.材料:经产妇知情同意,无菌采集遵义医学院附属医院产科健康足月分娩新生儿胎盘和脐带血共12份.淋巴细胞亚群检测试剂盒,CD34绝对计数试剂盒(Becton Dickinson公司):CD34磁珠分选试剂盒,FITC标记的CD38单克隆抗体,抗FITC磁珠和MS/LS免疫磁式细胞分选柱(Miltenyi Biotec).方法:脐带血与RPMI-1640培养基(含体积分数为0.1的胎牛血清)按1:1的比例混合,采用Ficoll-Histopaque分离液离心30min,吸取界面层细胞,PBS洗涤一次,获得脐带血单个核细胞.采用机械法加0.25g/L胶原酶消化制备胎盘组织单个细胞悬液,之后同脐带血单个核细胞分离步骤分离胎盘单个核细胞.流式细胞仪检测胎盘单个核细胞中CD34+CD38-, CD34+CD38+造血干/祖细胞(HSPCs)和淋巴细胞亚群的组成比例.免疫磁珠分选法分选人胎盘CD34+CD38-,CD34+D38+造血干/祖细胞,并分别进行粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位系集落形成培养,以评价其造血祖细胞系增殖分化能力.实验全程用脐带血作平行比较分析.主要观察指标:胎盘和脐带血CD34+造血干/祖细胞组成百分率、祖细胞系集落形成能力、淋巴细胞亚群表型及组成特点.结果:[1]胎盘CD34+造血干/祖细胞百分率是脐带血的8.8倍,差异有显著性意义(P<0.01).[2]胎盘中的淋巴细胞总数、T细胞(CD3+CD2+)、B细胞(CD19+)、Th(CD3+CD4+)细胞及Th/Ts比值均明显低于脐带血,而CD8+CD28-T抑制细胞则明显高于脐带血,差异有显著性意义(P<0.01).[3]胎盘CD34+CD38+造血干/祖细胞亚群培养形成的粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位集落数明显高于CD34+CD38-造血干/祖细胞亚群(P<0.01);胎盘与脐带血造血干/祖细胞中相同表型细胞亚群形成的各系集落数比较,差异无显著性意义(P0.05).结论:人胎盘组织富含CD34+造血干/祖细胞,其CD34+CD38+、CD34+CD38-两个造血干/祖细胞亚群均具有增殖分化为粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位的能力,并且人胎盘组织具有淋巴细胞亚群低比例和抑制性T细胞高比例的特点,使其有望成为造血干/祖细胞移植的新来源.

人胎盘来源干/祖细胞的研究进展

胎盘组织含有一些具有干/祖细胞潜能和免疫调节功能的细胞,并且胎盘组织容易得到,不需要侵入性操作,对其研究不会涉及伦理道德问题,目前已成为寻找人类干/祖细胞新来源的研究热点.日前研究丰要集中在胎盘不同部位分离的间充质基质细胞和从羊膜分离的上皮细胞.由于胎盘结构的复杂性,迫切需要尽可能明晰地确定这些细胞的来源区域和分离方法.

妊娠特异性β1糖蛋白SRID试剂盒的制备和应用

妊娠特异性β1 糖蛋白(Pregnancy Specific β1 Glycoprotein,SP1或PS β1 G),是胎盘合体滋养层细胞分泌的一种特异性蛋白质,在早孕6～8周的妇女中97.4%和孕晚期妇女中100%可检测出SP1,而不存在于正常非孕妇女和男性血中[1].1971年德国Bohn首次从人胎盘中分离出SP1,引起各国学者的重视,现认为检测孕妇血清中SP1的存在及其水平,可作为诊断早孕,检查胎盘功能,判定胎儿预后的一项可信指标.由于SP1在妊娠晚期含量较高,应用单向免疫扩散法(Single Radial Immune Diffusion,SRID),能够定量的测定SP1含量.其操作简单,适合各实验室开展,现将试剂盒的制备及应用报道如下.

妊娠特异性β1糖蛋白的研究及其临床应用

妊娠特异性β1糖蛋白(Pregnancy Specific β1 Glycoprotein)是由胎盘合体滋养层细胞合成并分泌入血的一种特异性糖蛋白.自1971年西德科学家Bohn首先从人胎盘中分离提纯以来,便引起各国学者的重视对其进行了深入广泛的研究.已经证明其有很重要的作用,尤其与早孕诊断、早孕并发症及宫内胎儿生长状况关系密切.现将妊娠特异性β1糖蛋白的研究进展、理化特性、产生部位和临床应用等方面的研究进行一个简单的综述.

表达K1-5蛋白的人胎盘间充质干细胞抑制大鼠主动脉环血管生成的实验研究

目的:观察表达外源性Kringle1-5(K1-5)蛋白的人胎盘组织的间充质干细胞(HPMSCs)在体外对大鼠主动脉环血管生成的影响.方法:用胶原酶和贴壁法从人胎盘组织中提取间充质干细胞.选取感染复数MOI:50,将重组腺病毒载体rAd-K1-5感染HPMSCs至48 h;应用荧光显微镜观察转染效率.取8周雌性SD大鼠的腹主动脉,建立主动脉环血管生成体外模型,6天后观察基质胶内微血管形成的情况.结果:从人胎盘组织提取的成纤维样细胞具有贴壁生长特性,可向成骨细胞、脂肪细胞分化,证明从胎盘提取的细胞是间充质干细胞.采用rAd-K1-5腺病毒载体感染的HPMSCs可分泌Kringle 1-5蛋白,表达K1-5蛋白的转基因HPMSCs处理的基质胶栓中管样结构的形成明显减少.结论:表达外源性Kringle 1-5蛋白的HPMSCs能够体外抑制大鼠主动脉环新生血管生成.

人胎盘埋植疗法对去卵巢大鼠雌二醇水平和脑胆碱酯酶活性的影响

目的探讨人胎盘埋植疗法对去卵巢大鼠雌二醇及脑内乙酰胆碱酯酶的影响.方法测定和比较以下四组3个月龄SD雌性大鼠的雌二醇、脑胆碱酯酶含量;(1)实验组摘除双侧卵巢,不同剂量胎盘皮下包埋;(2)阴性对照组去除卵巢,无治疗;(3)阳性对照组去除卵巢,用雌激素治疗;(4)假手术组不摘除卵巢.结果高、中剂量人胎盘组的雌二醇水平高于阴性对照组(P＜0.01);脑胆碱酯酶活性低于阴性对照组(P＜0.01).低剂量组与阴性对照组比较无差异(P＞0.05).结论高、中剂量人胎盘能提高去卵巢大鼠的雌激素水平,并能抑制其脑内胆碱酯酶的活性.

齐多夫定在人胎盘中转运机制的研究进展

齐多夫定是阻断艾滋病母婴传播的一线用药,临床上疗效显著.该药虽暂无相关致畸报道,但其妊娠期用药的安全性仍存在争议.有研究表明齐多夫定可以透过胎盘,对胎儿潜在的毒性与胎儿曝露量呈正相关.目前已有文献报道胎盘中乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、有机阴离子转运体4(OAT4)及核苷转运体2(ENT2)转运蛋白可能参与齐多夫定的转运,但具体转运机制尚未完全明确.本文将对齐多夫定在人类胎盘中的转运机制的研究进展进行综述,以期为评价齐多夫定在妊娠期的安全应用提供参考.