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水通道蛋白-8在羊水过少人胎盘、胎膜中的表达
目的 了解水通道蛋白-8(aquaporin-8,AQP-8)在羊水过少人胎盘、胎膜中的表达.方法 随机选择2008年12月至2009年1月在广东省深圳市福永医院妇产科行选择性剖宫产孕妇16例为研究对象,满足单胎、足月、无妊娠合并症、未临产、无胎儿窘迫及胎儿畸形条件.将产前超声监测羊水深度＜8 cm的孕妇纳入研究组(羊水过少组,n=6),其余孕妇纳入对照组(n=10)(本研究遵循的程序符合深圳市福永医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书).两组患者年龄、妊娠情况及妊娠结局等比较,差异无显著意义(P>0.05).采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物霉(streptavidin enzyme complex, SABC)法检测两组胎盘和胎膜组织标本中水通道蛋白-8表达水平.结果 水通道蛋白-8在人胎盘及胎膜的羊膜上皮细胞均有表达,对照组胎膜中水通道蛋白-8表达明显低于研究组,且差异有显著意义(P<0.05).结论 水通道蛋白-8在人羊水过少的胎盘、胎膜中表达显著减少,提示水通道蛋白-8在母、胎液体交换及羊水膜内吸收途径中,可能发挥重要作用.
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水通道蛋白-8对结肠癌细胞凋亡及凋亡抑制蛋白的影响
目的：通过表达水通道蛋白-8（AQP-8）真核表达载体，观察水通道蛋白AQP-8对HT-29细胞凋亡及凋亡抑制蛋白（ IAPs）表达的影响。方法取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验。构建AQP-8真核表达载体并转染HT-29细胞，通过Western blot检测GFP-AQP-8转染效率；采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率；流式细胞术检测细胞凋亡率；通过Real Time-PCR和Western blot检测转染GFP-AQP-8的HT-29细胞凋亡抑制蛋白（ IAPs）家族成员c-IAP1、c-IAP2、XIAP、NIAP、Survivin和Livin表达水平。结果 Western blot结果显示，GFP-AQP-8转染后结肠癌HT-29细胞AQP-8基因表达显著上调（ P ＜0{．05）。 MTT分析结果显示，转染了GFP-AQP-8的结肠癌HT-29细胞增殖抑制率显著增加（ P ＜0．05）；流式细胞分析发现，转染了GFP-AQP-8的HT-29细胞凋亡率显著增加（ P ＜0．05）。Real Time-PCR和Western blot结果显示，与转染GFP-N1的阴性对照组相比较，转染了GFP-AQP-8的HT-29细胞c-IAP1、c-IAP1、XIAP、Livin和Survivin的mRNA和蛋白表达水平下降（ P ＜0．05），NIAP表达变化不明显（ P ＜0．05）。结论过表达AQP-8可抑制HT-29细胞生长，并能通过下调c-IAP1、c-IAP1、XIAP、Livin和Survivin表达诱导HT-29细胞凋亡。
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妊娠期高血压疾病产妇胎盘和胎膜组织中水通道蛋白-8的表达及意义
目的：检测妊娠期高血压疾病产妇胎盘和胎膜组织中水通道蛋白-8（AQP-8）的表达变化，探讨AQP-8在妊娠期高血压疾病发病机制中的作用。方法选择足月剖宫分娩的产妇81例（包括妊娠期高血压组25例，子痫前期26例，正常妊娠组30例），采用免疫组化方法检测三组产妇胎盘和胎膜组织中AQP-8的表达。结果 AQP-8在正常妊娠组、妊娠期高血压组和子痫前期组产妇的胎膜、胎盘组织中均可见表达，主要分布于羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘合体滋养细胞的细胞膜和细胞质中。正常妊娠组、妊娠期高血压组和子痫前期组AQP-8在羊膜中的表达水平分别为（4．78±2．05）、（5．45±2．08）、（6．18±2．15）；在绒毛膜中的表达水平分别为（4．16±2．13）、（5．04±1．92）、（5．59±2．39）；在胎盘中的表达分别为（5．62±2．16）、（6.01±2．30）、（7．61±2．71）。 AQP-8蛋白表达水平呈逐渐升高趋势，且三组在不同位置的表达水平均有统计学意义（F＝3．121，3．148，5．785；P＝0．049，0．048，0．005），在羊膜中正常组和子痫前期组比较差异有统计学意义（ t＝2.01，P＝0．016）。结论 AQP-8在妊娠期高血压疾病产妇胎盘和胎膜组织中的表达升高，并与疾病的严重程度有关，可能参与妊娠期高血压疾病的发生、发展。
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水通道蛋白-8对结肠癌细胞株HT-29多药耐药因子的影响
目的 通过转染过表达水通道蛋白-8(AQP-8)的真核表达载体,观察AQP-8对结肠癌HT-29细胞株多药耐药因子表达的影响.方法 取对数生长期的人结肠癌HT-29细胞株用于实验.构建绿色荧光蛋白(GFP)-AQP-8真核表达载体并转染至HT-29细胞,通过Western blot检测GFP-AQP-8转染效率;采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率;通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测转染GFP-AQP-8的HT-29细胞多药耐药因子P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)及拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的mRNA和蛋白相对表达量.结果 Western blot结果显示,GFP-AQP-8转染后结肠癌HT-29细胞AQP-8mRNA相对表达水平(0.976 ±0.086)与对照质粒GFP-N1转染组(0.140 ±0.024)比较显著上调(P＜0.05).MTT分析结果显示,转染了GFP-AQP-8的结肠癌HT-29细胞增殖抑制率[(22.86±3.75)％]与GFP-N1组[(1.12±0.17)％]比较显著升高(P＜0.05);与转染GFP-N1的对照组[(4.95±0.58)％]比较,转染了GFP-AQP-8的HT-29的细胞凋亡率显著增加[(14.08±2.37)％,P＜0.05].FQ-PCR和Western blot结果显示,GFP-AQP-8组P-gp、GST-π和TopoⅡ的mRNA表达水平(分别为0.44±0.05、0.34±0.03、0.38±0.05)比转染GFP-N1的对照组各基因mRNA表达水平(分别为0.99±0.12、1.02±0.12、0.96±0.14)均明显降低(P＜0.05),GFP-AQP-8组P-gp和GST-π蛋白表达水平(分别为0.28±0.04、0.37±0.05)与转染GFP-N1对照组表达水平(分别为0.83±0.08、0.75±0.10)比较明显下降(P＜0.05),TopoⅡ的蛋白表达在GFP-AQP-8组(0.60±0.08)与GFP-N1组(0.62±0.07)比较变化不明显(P＞0.05).结论 过表达AQP-8可抑制HT-29细胞生长,该抑制作用可能与抑制耐药基因P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达有关.
