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黄芩素在人喉癌Hep-2增殖抑制中的作用及机制
目的:探讨不同浓度黄芩素对人喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用及其作用机制研究.方法:采用MTT法检测不同浓度黄芩素对Hep-2细胞的抑制作用,DAPI染色法观察细胞凋亡现象,流式细胞术法检测细胞凋亡率,western bloting检测NF-κB亚基p65蛋白表达水平.结果:不同浓度黄芩素与对照组(0.1％ DMSO)比较,对肿瘤细胞生长抑制率明显升高,差异有统计学意义,且该抑制作用与时间、剂量呈依赖性;黄芩素对Hep-2细胞具有诱导凋亡作用,黄芩素通过阻止p65的核移位从而抑制NF-κB活性来诱导Hep-2细胞凋亡,并通过抑制P53活性而诱导Hep-2细胞凋亡.结论:黄芩素对Hep-2细胞增殖具有明显的抑制作用,且具有诱导肿瘤细胞Hep-2凋亡的作用.
关键词： 黄芩素 人喉癌Hep-2细胞 增殖抑制作用 机制研究 -
三氧化二砷与肿瘤细胞凋亡的关系
中药砒霜(三氧化二砷,As2O3)及砷制剂对肿瘤的治疗是近年来的研究热点,特别是对白血病的治疗为人们所关注.砷作为抗肿瘤药物在我国已有百年历史,中医传统方剂青黄散、十味丸等治疗不同类型的白血病确有一定疗效,经鉴定其中有效成分为含砷中药.1992年,哈尔滨医科大学确定了三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocyte leukemia, APL)的疗效[1].20世纪90年代中期,上海第二医科大学附属瑞金医院陈国强等[2]从细胞和分子生物学角度阐明了其作用机理,确定As2O3对全反式维甲酸(ATRA)耐药的病例可获较高的完全缓解(CR)率,但并无严重的骨髓抑制等副作用.用砒霜制成的亚砷酸注射液1999年下半年被批准为我国二类新药.美国食品和药品管理局(FDA)也正式批准用砒霜治疗急性早幼粒细胞白血病的方案.体外研究发现As2O3能诱导APL细胞株NB4细胞凋亡,抑制白血病细胞生长[3].细胞凋亡是一种相对于细胞坏死的、主动的、程序化的细胞死亡形式.有人认为当细胞生长和细胞死亡的平等被破坏时,肿瘤就会发生.现已发现许多因素包括不少化疗药物均可引起肿瘤细胞凋亡.细胞凋亡为肿瘤治疗提供了新思路和靶点.近发现As2O3同样能诱导非APL急性髓系白血病(AML)细胞株HL60细胞产生凋亡[4],但有关As2O3诱导凋亡的机制,目前仍处于起步阶段.以往发现As2O3不仅能诱导APL细胞株NB4细胞产生凋亡,也通过诱导细胞凋亡进而对非APLAML细胞株HL60产生增殖抑制作用[5].
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干扰CDK4和CyclinD1的表达抑制MCF-7细胞的增殖
目前研究表明,CyclinD1、CDK4参与细胞周期G1/S期的转换,在多种恶性肿痛中存在CyclinD1、CDK4表达增加,并且 CyclinD1、CDK4的表达水平与肿瘤的恶性程度成正相关[1].鉴于RNA干扰技术可以明显地抑制靶基因的表达,同时CyclinD1和CDK4在细胞周期调控中的重要作用,本研究选择以CyclinD1、CDK4为靶点进行了RNA干扰,观察其对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用.
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黄连素抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导凋亡
黄连素(berberine)对多种肿瘤有抑制增殖和诱导凋亡的作用[1-2],但在卵巢癌中的作用尚未见报道.本研究以人卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,观察黄连素对SKOV3细胞增殖抑制作用及凋亡诱导效应.
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两种菌种来源的左旋门冬酰胺酶抗白血病作用与机制比较
比较大肠杆菌来源的左旋门冬酰胺酶(E coli-L-Asp)与欧文菌来源的左旋门冬酰胺酶(Erwinia-L-Asp)体外抗白血病作用,并探讨其作用机制.以两种来源的L-Asp分别处理急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞株(REH、Jurkat),采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖变化(IC50),Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,高压液相色谱(HPLC)检测用药后培养液中4种氨基酸[门冬酰胺(Asn)、门冬氨酸(Aspa)、谷氨酰胺(G1n)、谷氨酸(G1u)]浓度的变化.结果表明,REH、Jurkat细胞株对两种L-Asp的抑制作用均敏感,且在一定时间内存在明显剂量效应关系,即在较低的药物浓度下,细胞增殖抑制率处于较低水平,而药物浓度增加后,细胞的增殖抑制率明显升高,其中作用后24 h,Erwinia-L-Asp组细胞抑制率、细胞凋亡率均明显高于E coli-L-Asp组(P＜0.05),但至48 h两组比较差异无显著性(P＞0.05).两种药物在低浓度时均能耗竭培养液中的Asn,且作用相当(P＞0.05),高浓度时耗竭Gin作用才凸显,而Erwinia-L-Asp的作用明显强于E.coli-L-Asp(P＜0.05).结论:两种菌种来源的L-Asp抗白血病作用与剂量存在量效关系,除耗竭外环境中的Asn和Gin外,诱导细胞凋亡也是其抗白血病作用之一.Erwinia-L-Asp具有起效快、Gin耗竭作用较强的特点,可作为临床儿童ALL治疗的一线药物选择.
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金雀黄素抑制人卵巢癌细胞株增殖的体外研究
金雀黄素(genistein, GNS)是一种天然异黄酮化合物.本研究采用体外培养的卵巢癌细胞株3AO及其顺铂(cDDP)耐药的亚细胞株3AO/cDDP,观察GNS对两细胞株的增殖抑制作用,并应用流式细胞技术,初步探讨其增殖抑制作用的可能机制,为开发治疗卵巢癌的新化学药物治疗(化疗)药物提供理论依据.
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天南星提取液抗肺癌细胞活性研究
目的 研究中药天南星提取液对人肺癌A549细胞的体外增殖抑制作用.方法 采用MTT法测定天南星醇提液和天南星水提取液对人肺癌A549细胞的增殖抑制率,考察敏感低药物浓度,并计算半数抑制率IC50.结果 24、48、72 h的天南星醇提液和水提液对A549细胞均有不同程度的增殖抑制作用,且呈现出一定的时间-剂量依赖性.天南星醇提液敏感的低药物浓度为3.9 μg/mL,IC50为64.46 μg/mL,天南星水提液敏感的低药物浓度为15.6 μg/mL,IC50为133.5 μg/mL.结论 天南星醇提液和水提液对人肺癌A549细胞均有一定的增殖抑制作用,天南星醇提液抑制作用更为明显.
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复方大果木姜子软胶囊对小鼠骨髓癌细胞的增殖抑制实验研究
目的：：研究复方大果木姜子软胶囊对小鼠骨髓癌细胞(Sp2/0)增殖抑制作用。方法：取Sp2/0细胞,复苏后以含10%新生牛血清的RPMI1640培养液培养,在37℃、5%CO2的饱和湿环境的培养箱中培养,用细胞排染法测定药物作用,同时设药物组,阳性组,空白组,其中药物组加复方大果木姜子软胶囊,阳性组加喜树碱。生长曲线法测定这三组对sp2/0细胞的增殖抑制作用,MTT法测定三组成分对sp2/0细胞的杀伤作用。结果：实验证明复方大果木姜子软胶囊对Sp2/0细胞的ED50为11.36μg·ml-1,其IC50值为7.725μg·ml-1。结论：一定浓度的实验药物对小鼠骨髓癌细胞Sp2/0的增殖具有明显的抑制作用。但与喜树碱相比,效果还是有一定差距。如果进一步筛选复方中主要单味有效成分,再组合研究其药效,一定可以进一步提高其对Sp2/0细胞的增殖抑制作用,同时减少药物用量。
关键词： 复方大果木姜子软胶囊 Sp2/0 增殖抑制作用 -
环孢酶素A对小鼠精原细胞增殖率影响的体外研究
为研究环孢酶素A(cyclosporin A,Cs A)对精原细胞增殖作用的影响,将睾丸组织小块(0.5 mm×0.5 mm×0.5 mm)分别放人终浓度为0(DMEM,溶剂对照)、0.01、0.1、1、10 μg/ml的环孢酶素A溶液和卵泡雌激素(FSH,阳性对照)培养液的滤膜上面,于32℃、5%的CO2恒温箱中培养3 d.培养结束3 h之前添加溴脱氧尿苷(Bromodeoxyuridine,BrdU)进行免疫组化染色.阴性对照组直接将小断片在溴脱氧尿苷培养液中培养3 h后进行固定.测定BrdU阳性细胞数,并通过BrdU阳性细胞率考察增殖活性.结果 显示,与溶剂对照组比较,0.1、1、10 μm/ml环孢酶素A染毒组精原细胞的BrdU阳性细胞率均较低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);且随着环孢酶素A染毒浓度的升高,精原细胞的BrdU阳性细胞率呈下降趋势.表明环孢酶素A能抑制小鼠精原细胞的增殖活性.
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赛莱昔布对K562细胞的增殖抑制作用与细胞G1/S期受阻及细胞周期蛋白表达的相关性
赛莱昔布(Celecoxib)是一种环氧化酶-2(COX-2)特异性抑制剂.目前,国内外对于COX-2特异性抑制剂抗肿瘤作用的研究主要集中在实体肿瘤,而对造血系统恶性肿瘤的研究少有报道.为探讨赛莱昔布对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖的影响,我们以不同浓度的赛莱昔布干预CML急变细胞株K562细胞,观察药物对K562细胞增殖和细胞周期的影响,并分析赛莱昔布作用下的K562细胞周期调节蛋白Cy-clin D1、Cyclin E、P16INK4a和P21表达的变化,现将结果报道如下.
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钙调素拮抗剂小檗胺诱导K562细胞凋亡及其机制的研究
小檗胺(Berbamine,BBM)是一种双苄基异喹啉类生物碱,广泛用于白细胞减少症且无明显不良反应,近研究表明BBM及其衍生物均属钙调素拮抗剂(Calmodulin antagonist),对多种肿瘤细胞具有明显的增殖抑制作用,为明确BBM体外抗白血病的作用及其机制,我们以K562细胞为对象进行研究.
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透骨草提取物对卵巢癌SKOV-3细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响
在我国卵巢癌发病率一直在上升，其病死率居女性生殖系统恶性肿瘤首位。化疗是治疗卵巢癌的常用方法，但多数化疗药物不良反应较大。因此，探索新的治疗卵巢癌药物是亟待解决的问题。本课题组的前期实验研究发现，透骨草（Phryma leptostachya L.var.asiatica Hara）乙醇提取物对多种肿瘤增殖具有抑制作用［1-3］。本实验旨在揭示透骨草提取物对SKOV-3细胞增殖抑制作用的分子机制，为透骨草抗卵巢癌的研究和应用提供新的依据。
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AS2O3诱导人膀胱癌EJ细胞株凋亡作用的体外研究
目的 观察三氧化二砷(Arsenic trioxide,AS2O3)对人膀胱癌EJ细胞生长抑制作用,并探讨其作用机理.方法 四甲基偶氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyl tetrazolium bromid,MTT)法检测EJ细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡,并对半胱天冬酶(Caspase)-3活性进行检测.结果 AS2O3可有效地抑制EJ细胞生长,且呈时问、浓度依赖性特点;经药物作用后,膀胱癌细胞凋亡明显增加,凋亡率随作用时间的延长而增多.结论 AS2O3可显著抑制膀胱癌细胞生长,诱导细胞凋亡是其作用机制之一.
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紫苏醇对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用机制的研究
目的:探讨紫苏醇(Perillyl alcohol,PA)对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用机制,并阐明其对肿瘤血管生成信号的影响.方法:不同浓度PA和厄洛替尼加入到A549细胞中,利用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法测定药物组对A549细胞的抑制作用,Transwell法检测PA对A549细胞侵袭的抑制作用,采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平的变化;分光光度法检测PA对细胞凋亡蛋白Caspase-3活性的影响,Western blot法检测A549中VEGF、HIF-1α及COX-2的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验测定A549细胞中NF-κB活性.结果:与空白对照组比较,随着浓度的增加(10、50、i00μg/ml),PA和厄洛替尼对A549细胞生长的抑制率在不断地增加,差异均有统计学意义(P＜0.05),A549细胞侵袭能力呈现不断下降的趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05),A549细胞内活性氧水平随厄洛替尼浓度的增加变化不大,而ROS水平随着PA的浓度的增加而增加,在100 μg/ml浓度的PA下引起的ROS百分率达到了(80.43±6.92)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).细胞活力检测结果显示,随着PA和厄洛替尼浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞中凋亡蛋白Caspase-3活性明显增加(P＜0.05),随着紫苏醇浓度的增加,COX-2、VEGF和HIF-1α的表达呈不断降低的趋势,EMSA检测结果显示,随着PA浓度的增加,NF-κB的条带面积不断减少.结论:PA可能参与并促进了ROS的生成和Caspase-3活性增加,终诱导A549细胞的凋亡,PA可能通过降低NF-κB的表达,进而诱导COX-2、VEGF等的表达减少,使血管生成滞后,能够有效地使细胞的穿透能力下降和凋亡发生.
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五味子乙素抑制胃癌SNU-1细胞增殖和转移的作用机制研究
目的:观察五味子乙素对胃癌SNU-1细胞增殖和转移的影响,探讨其诱导胃癌SNU-1细胞凋亡的机制.方法:不同浓度五味子乙素组和顺铂组加入到SNU-1细胞中,作用24 h后,MTT法测定药物组对胃癌SNU-1细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测不同浓度的五味子乙素诱导胃癌SNU-1细胞凋亡率,Transwell法检测五味子乙素对SNU-1细胞侵袭的抑制作用,采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平的变化;Western blot法检测胃癌SNU-1细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、E-cadherin、N-cadherin和MMP-9的表达.结果:与空白对照组比较,10、50和100μg/ml的五味子乙素和顺铂对胃癌SNU-1细胞生长的抑制作用明显,10、50和100μg/ml的五味子乙素作用胃癌SNU-1细胞后,细胞转移能力显著下降,10、50和100μg/ml的五味子乙素作用胃癌SNU-1细胞48 h后均能诱导胃癌SNU-1细胞凋亡;ROS水平随着五味子乙素的浓度增加而增加明显;10、50和100μg/ml的五味子乙素上调Caspase-3、Bax、E-cadherin的表达,下调Bcl-2、N-cadherin和MMP-9的表达.结论:五味子乙素可能是通过Caspase-3级联凋亡途径、线粒体途径和ROS水平提高来诱导胃癌SNU-1细胞凋亡,也可能通过破坏细胞间和基底膜黏附性及增加肿瘤细胞间的稳定性,来抑制胃癌SNU-1细胞的转移能力.
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熊果酸诱导人白血病HL-60细胞凋亡作用
熊果酸(Ursolic acid,UA),又名乌索酸,乌苏酸,是存在多种天然植物中的五环三萜类化合物,如白花蛇香草、山楂、女子贞、夏枯草等,熊果酸具有保护肝脏、降血脂、调节机体免疫、抗氧化和抗肿瘤等多种生物学活性[1,2],研究表明熊果酸可通过诱导细胞凋亡抑制多种肿瘤细胞的生长,如人乳腺癌、胃癌、肺癌、淋巴瘤等[3-6].关于熊果酸对人白血病HL-60细胞的增殖抑制作用、诱导凋亡作用及相关机制尚未见报道,本研究以HL-60细胞为研究对象,观察熊果酸对HL-60细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用,并采用流式细胞术、Western blot 技术研究熊果酸诱导HL-60细胞凋亡的分子机制,为熊果酸的开发利用提供实验基础和理论依据.
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微波辐射对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用及其机制
目的:探讨不同强度微波辐射对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用及对氧化应激水平的影响,阐明微波辐射对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用机制.方法:分别以强度为2.5、5.0、10.0、15.0和20.0 mW·cm-2的微波处理HeLa细胞20 min作为不同剂量辐射组,同时设立假辐射组(0 mW·cm-2)作为对照组,采用倒置显微镜观察细胞形态改变；MTT法检测微波辐射对细胞增殖的抑制情况；试剂盒测定辐射后细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量；Western blotting法检测细胞内核转录因子-κB (NF-κB)和热休克蛋白70 (HSP 70)表达水平.结果:各剂量微波辐射组HeLa细胞数量明显减少,细胞皱缩变形,体积缩小,随着辐射强度的增加变化愈明显；2.5、5.0、10.0、15.0和20.0 mW·cm-2强度的微波作用细胞24 h,HeLa细胞的增殖抑制率均明显高于对照组(P＜0.05)；微波辐射后细胞内MDA含量随着辐射强度的增加,与对照组细胞比较呈上升趋势,各剂量辐射组HeLa细胞SOD活性较对照组显著下降(P＜0.05).Western blotting检测,微波辐射后细胞内HSP 70表达水平呈增加趋势,而NF-κB蛋白的表达水平呈明显的下降趋势.结论:微波辐射对人宫颈癌HeLa细胞增殖具有抑制作用,其可能机制是改变细胞内氧化及抗氧化平衡.
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二甲基亚砜对卵巢癌细胞增殖的抑制作用
卵巢恶性肿瘤的发病率在女性常见恶性肿瘤中所占百分率为2.4%～5.6%,在女性生殖道恶性肿瘤中占第三位,次于宫颈癌和宫体癌.60%～70%的卵巢恶性肿瘤患者确诊时已属晚期,预后极差.目前化学治疗仍然是中晚期卵巢癌手术后不可缺少的重要辅助治疗手段,因此寻找新的更为有效的化疗药物是当前急待解决的问题.文献报道DMSO对某些肿瘤细胞具有诱导分化的作用.本研究以卵巢癌细胞CAOV3为模型,观察低浓度DMSO对CA-OV3细胞是否具有增殖抑制作用,为二甲基亚砜用于卵巢癌治疗提供理论依据.
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阿妥伐他汀对结肠癌裸鼠肝转移模型cyr61蛋白表达的影响
大肠癌患者肝转移发生率为50%[1].他汀类药物具有减少心血管急症发生率及抗肿瘤双重作用,我们前期进行了阿妥伐他汀对结肠癌细胞增殖抑制作用的体外研究[2],本实验建立人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型,探讨阿妥伐他汀对结肠癌裸鼠肝转移癌生长的影响,为临床应用提供实验基础和理论依据.
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EGFR/IGFR-1β异二聚体形成对吉非替尼抑制结肠癌细胞增殖的影响
目的:观察EGFR(epidermal growth factor receptor)和IGFR-1β(insulin-like growth factor receptor-1β)的相互作用,探讨IGFR-1β对吉非替尼(gefitinib)抑制结肠癌细胞增殖的影响.方珐:以免疫共沉淀法和Western blotting检测EGFR和IGFR-1β之间以及受体与下游信号通路蛋白AKT、MAPK的结合.以IGFR-1酪氨酸激酶抑制剂AG1024和吉非替尼单独或联合作用于3种结肠癌细胞(LoVo,HT29,HCT116细胞),MTT法检测细胞增殖率.结果:LoVo细胞(吉非替尼敏感型)在有或无吉非替尼作用下均不出现与EGFR结合的IGFR-1β条带,HT29细胞(吉非替尼中度敏感型)在吉非替尼作用下可见该条带,而HCT116细胞(吉非替尼耐受型)在有或无吉非替尼作用下均可见条带.LoVo细胞的吉非替尼作用组、HT29细胞的联合用药组以及HCT116细胞的AG1024作用组EGFR结合的AKT、MAPK显著减少(P<0.05).LoVo细胞在吉非替尼组的细胞增殖率较对照组明显下降(P<0.05),AG1024单独组的增殖率无明显降低,联合用药组与吉非替尼单独组相比较并未进一步降低;HT29细胞在单独应用吉非替尼或AG1024时增殖率均无明显降低,联合用药组的增殖率显著下降(P<0.05);HCT116细胞在吉非替尼作用下增殖率无明显降低,但在AG1024作用下增殖率显著降低(P<0.05),联合用药组与AG1024单独作用组相比较并未进一步降低.结论:结肠癌细胞耐受吉非替尼作用可能或者部分可能与EGFR/IGFR-1β异二聚体形成激活IGFR-1β信号通路有关,抑制IGFR-1β活性在一定程度上可以提高结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性.
