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葛根素对脑缺血诱导神经细胞凋亡的保护作用
目的 探讨葛根素(puerarin,Pur)对脑缺血诱导神经细胞凋亡和凋亡蛋白抑制剂XIAP表达的影响.方法 SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)的同时ip 50,100 mg·kg-1 Pur,MCAO 50 min后再灌注24h,用TTC染色法、Annexin-V和PI双荧光标记结合流式细胞检测法、半定量RT-PCR等技术分别检测大鼠脑水肿、梗死体积、细胞凋亡和坏死率、caspasc-3活性、XIAP mRNA表达.结果 Pur(100mg·kg-1)明显缓解缺血引起的脑水肿和神经行为障碍(P＜0.05);减少脑梗死体积,以皮层尤其显著(P＜0.01).Pur(100 mg·kg-1)还显著降低背外侧皮层的细胞凋亡和坏死率,抑制caspase-3活性,逆转缺血诱导的XIAPmRNA表达下调(P＜0.05,P＜0.01).结论 Pur通过调节神经细胞XIAP mRNA表达,抑制细胞凋亡而保护缺血性脑损伤.
关键词： 葛根素 脑缺血 细胞凋亡 caspase-3活性 XIAP基因 -
辛伐他汀联合顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用
目的 研究辛伐他汀联合顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 采用MTT法检测0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L顺铂和3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L辛伐他汀对A549细胞增殖抑制率的影响;考察2.5μmol/L顺铂与3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L辛伐他汀联用对A549细胞增殖抑制作用的协同效果;Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术检测5μmol/L顺铂与25μmol/L辛伐他汀联合应用对对A549细胞凋亡率的影响;分光光度法检测辛伐他汀(25μmol/L)联合顺铂(2.5μmol/L)对A549细胞caspase-3活性的影响.结果 辛伐他汀或顺铂对A549细胞的增殖有显著的抑制作用,随着浓度的增加、时间的延长,呈时间、剂量相关性,其抑制作用增强(P<0.01).顺铂(2.5μmol/L)与不同浓度(3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L)辛伐他汀联用对A549细胞的增殖有抑制作用,随着时间的延长,辛伐他汀剂量的增加,两者联用抑制作用呈增强的趋势(P<0.01),2.5μmol/L顺铂联用辛伐他汀25μmol/L的抑制作用具有协同效果.25μmol/L辛伐他汀和2.5μmol/L顺铂能有效地诱导A549细胞的凋亡,而且两者联合使用可以显著增加A549细胞的凋亡率.25μmol/L辛伐他汀联合2.5μmol/L顺铂应可以显著增加A549细胞的caspase-3酶活性.结论 辛伐他汀能够显著增强顺铂对A549细胞增殖抑制、诱导凋亡的作用,可能通过上调caspase-3活性诱导A549细胞凋亡.
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醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase-3活性的影响
目的探讨醋酸铅对PC12细胞凋亡和caspase-3活性的影响.方法采用四唑盐(MTT)法检测IC50值,用流式细胞仪、Hoechst 33258/PI 荧光染色分析细胞凋亡,比色法测定caspase-3活性.结果用不同浓度的醋酸铅处理细胞48 h,其IC50值为(0.445±0.080)mmol/L;用0.25、0.5mmol/L醋酸铅处理细胞48 h,可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改变,两铅处理组经流式细胞仪和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),caspase-3活性也明显高于对照组(P＜0.01).结论醋酸铅可诱导PC12细胞凋亡,其机制可能与caspase-3的活化有关.
关键词： 铅 PC12细胞 凋亡 caspase-3活性 -
大麻素2型受体激活对钛颗粒诱导成骨细胞凋亡的干预作用
背景:成骨细胞凋亡而导致的成骨减少是终假体松动的重要原因,大麻素2型受体的激活可促进成骨细胞的增殖,减少细胞凋亡率的发生.目的:探讨钛颗粒负荷下,大麻素2型受体激动剂HU-308对成骨细胞株MC3T3-E1凋亡的抑制作用及保护机制.方法:将体外培养的小鼠成骨细胞MC3T3-E1分5组培养,空白对照组以常规细胞培养基培养;钛颗粒组以含2.5 g/L钛颗粒的细胞培养基培养;低浓度药物组以含2.5 g/L钛颗粒+10-9 mol/L HU-308的细胞培养基培养;中浓度药物组以含2.5 g/L钛颗粒+10-8 mol/L HU-308的细胞培养基培养;高浓度药物组以含2.5 g/L钛颗粒+10-7mol/L HU-308的细胞培养基培养.培养48 h,检测各组细胞增殖活性、凋亡、细胞内活性氧水平、线粒体膜电位水平及Caspase-3活性.结果与结论:①与空白对照组比较,钛颗粒组细胞增殖活性、线粒体膜电位水平明显下降(P＜0.01或P＜ 0.05),凋亡率、细胞内活性氧水平、Caspase-3活性明显升高(P＜ 0.01或P＜0.05);②与钛颗粒组比较,高浓度药物组细胞增殖活性、线粒体膜电位水平升高(P＜0.05),中、高浓度药物组细胞凋亡率、细胞内活性氧水平、Caspase-3活性降低(P＜ 0.01或P＜0.05);③结果表明,HU-308能有效逆转钛颗粒对MC3T3-E1成骨细胞活性的抑制及促凋亡作用,而这些保护作用可能是HU-308通过调节细胞内活性氧水平、提升线粒体膜电位水平及Caspase-3活性来实现的.
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紫苏醇对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用机制的研究
目的:探讨紫苏醇(Perillyl alcohol,PA)对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用机制,并阐明其对肿瘤血管生成信号的影响.方法:不同浓度PA和厄洛替尼加入到A549细胞中,利用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法测定药物组对A549细胞的抑制作用,Transwell法检测PA对A549细胞侵袭的抑制作用,采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平的变化;分光光度法检测PA对细胞凋亡蛋白Caspase-3活性的影响,Western blot法检测A549中VEGF、HIF-1α及COX-2的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验测定A549细胞中NF-κB活性.结果:与空白对照组比较,随着浓度的增加(10、50、i00μg/ml),PA和厄洛替尼对A549细胞生长的抑制率在不断地增加,差异均有统计学意义(P＜0.05),A549细胞侵袭能力呈现不断下降的趋势,差异均有统计学意义(P＜0.05),A549细胞内活性氧水平随厄洛替尼浓度的增加变化不大,而ROS水平随着PA的浓度的增加而增加,在100 μg/ml浓度的PA下引起的ROS百分率达到了(80.43±6.92)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).细胞活力检测结果显示,随着PA和厄洛替尼浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞中凋亡蛋白Caspase-3活性明显增加(P＜0.05),随着紫苏醇浓度的增加,COX-2、VEGF和HIF-1α的表达呈不断降低的趋势,EMSA检测结果显示,随着PA浓度的增加,NF-κB的条带面积不断减少.结论:PA可能参与并促进了ROS的生成和Caspase-3活性增加,终诱导A549细胞的凋亡,PA可能通过降低NF-κB的表达,进而诱导COX-2、VEGF等的表达减少,使血管生成滞后,能够有效地使细胞的穿透能力下降和凋亡发生.
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低氧预适应对大鼠脑缺血再灌注神经细胞凋亡和Caspase-3活性的影响
目的探讨低氧预适应(8%O2,3 h)对大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注后12 h神经细胞凋亡及Caspase-3活性的影响.方法低氧预适应后12 h制作脑缺血再灌注模型,大鼠大脑中动脉阻塞2 h,灌注损伤12 h,用TUNEL法和荧光四肽底物法分别检测假手术组、缺血再灌注组和低氧预适应组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平.结果与缺血再灌注组比较,低氧预适应组和假手术组的凋亡细胞百分率和Caspase-3活性水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01);低氧预适应组与假手术组比较,细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),Caspase-3水平反而降低(P＜0.01).结论低氧预适应可减少大脑中动脉缺血2 h再灌注后Caspase-3活性,抑制神经细胞的凋亡.
关键词： 低氧预适应 脑缺血 细胞凋亡 caspase-3活性 -
半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3抑制剂对体外循环时兔心肌的保护作用
目的 观察半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3抑制剂对体外循环时心肌的保护作用.方法 清洁健康新西兰大白兔(体质量为2.0 ～2.5 kg,雌雄不拘)30只,随机分为对照组和Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO组(术前0.5h经股静脉给予Ac-DEVD-CHO 5 ml/kg,术中停止体外循环后再经股静脉给予5 ml/kg).分别在术前、体外循环转流中和转流后检测各组肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白(cTnⅠ)、Caspase-3活性和髓过氧化物酶(MPO)活性变化.结果 Caspase-3抑制剂组与对照组比较,血cTnⅠ水平(g/L) (0.03 ±0.02、0.03±0.06、0.08 ±0.04、0.09±0.02比0.03±0.01、0.06±0.03、0.12 ±0.05、0.17±0.07)和CK-MB浓度(U/L)均明显降低(111.39±0.03、134.26 ±3.45、342.49±5.35、501.25±8.31比100.41 ±0.02、435.21±6.38、987.32±25.17、1 264.53±22.08),Caspase-3活性(z/pmol/h/mg)受到明显抑制(0.03±0.01、0.09±0.02、0.18 ±0.03、0.39±0.02比0.02 ±0.01、0.16±0.05、0.72 ±0.04、0.87 ±0.06),MPO活性显著降低(μg/L) (0.33 ±0.02、0.53 ±0.03、0.67±0.03、0.88 ±0.05比0.33±0.01、0.96 ±0.04、1.12±0.03、2.17 ±0.02),差异有统计学意义(F=36.10 ～574.13,P＜0.05).结论 Caspase-3抑制剂对体外循环时心功能损伤起到一定的保护作用.
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青蒿素对大鼠肾小球系膜细胞增殖、凋亡及Caspase-3活性的影响
目的:观察青蒿素对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖、凋亡及Caspase-3活性的影响.方法:以体外培养大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,应用不同质量浓度青蒿素干预系膜细胞,分别采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法、荧光倒置显微镜及酶标分析仪检测系膜细胞的增殖、凋亡及Caspase-3活性.结果:与对照组比较,不同质量浓度青蒿素对肾小球系膜细胞的增殖及Caspase-3活性均有不同程度的影响(P<0.01);与地塞米松组比较,其他2组相同质量浓度药物对肾小球系膜细胞增殖及Caspase-3活性均有显著影响(P<0.01),尤以青蒿素联合地塞米松高剂量组的抑制作用强,且3组药物对肾小球系膜细胞的增殖、Caspase-3活性及其凋亡的影响均呈剂量依赖趋势,在中、高剂量药物联合治疗组中出现了系膜细胞大量死亡.结论:青蒿素能剂量依赖性抑制系膜细胞增殖、增强Caspase-3活性及促进肾小球系膜细胞凋亡.
关键词： 青蒿素 系膜细胞 细胞增殖 细胞凋亡 caspase-3活性 -
新康泰营养包对心肌线粒体钙和细胞色素C及Caspase-3活性的影响
目的 研究新康泰营养包对过度训练大鼠心肌线粒体钙浓度和细胞色素C及Caspase-3活性的影响,以探讨新康泰营养包抗过度训练大鼠心肌细胞凋亡影响的作用机理.方法 以过度训练大鼠为运动疲劳模型,用Daly方法、微电极法测定细胞色素C,用德国Boehringer Mannheim公司提供的试剂盒测定心肌细胞中Caspase-3的活性.结果 过度训练可造成心肌线粒体钙超载,而新康泰营养包具有抑制心肌钙超载的作用;过度训练可导致大鼠心肌细胞中Caspase-3活性显著升高,而新康泰营养包可抑制过度训练大鼠心肌细胞中Caspase-3活性显著升高.过度训练组和过度训练+蒸馏水组大鼠心肌组织中细胞色素C含量明显高于对照组和过度训练+新康泰营养包组大鼠(P＜0.01).结论 新康泰营养包具有防止过度训练造成的心肌细胞凋亡增加,防止过度训练造成的心肌组织中钙超载,从而有效地阻止心肌线粒体内钙超载,保护心肌线粒体膜的功能,使得心肌线粒体内细胞色素C不漏入胞浆,从而使心肌组织中Caspase级联反应不被启动,有效地阻止了心肌细胞凋亡发生.
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缺氧对大鼠海马神经元生物学功能的影响
为进一步探讨缺氧缺血如何诱导海马神经元损伤直至凋亡,明确缺氧对海马神经元生物学功能的影响及其相关机制,从而为缺血缺氧性脑病的防治提供实验依据,本研究以19 d的SD胎鼠脑作为取材对象,经过条件培养基纯化建立海马神经元原代培养体系,通过MTT法、TUNEL法、免疫荧光、化学发光等方法检测海马神经元生长增殖活力、凋亡、Caspase-3活件等指标.结果显示缺氧可抑制SD大鼠海马神经元的生长增殖活力,并伴随着神经元凋亡和Caspase-3活件增高,且随着缺氧时间的增长程度加重.以上结果说明,缺氧通过诱导细胞凋亡导致SD大鼠海马神经元的损害,Caspase-3活性的激活可能是其重要的通路之一.
关键词： 海马神经元 凋亡 caspase-3活性 缺氧
