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RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用
目的探讨RAD51抑制剂RI-1对MSH2缺陷结直肠癌细胞系的杀伤作用及可能的作用机制.方法Western blot法筛选MSH2差异表达的结直肠癌细胞系,MTT法检测不同结直肠癌细胞系对RI-1(10、20、30、40 或50 μmol/L)的敏感性;构建针对MSH2基因的重组shRNA慢病毒表达载体并感染HT29细胞.RI-1(40 μmol/L)处理细胞,流式细胞术检测细胞凋亡的变化;单细胞凝胶电泳实验分析细胞内DNA损伤情况;细胞免疫荧光法检测γ-H2AX foci的形成.结果与对照组相比MSH2缺陷的HCT8细胞有明显细胞凋亡现象(P<0.01);HCT8细胞和HT29 Shmsh2细胞尾部DNA含量、尾长和尾距均较对照组明显增加(P<0.05);HCT8细胞和HT29 Shmsh2细胞内γ-H2AX foci的形成数量较对照组明显增加(P<0.01).结论RAD51抑制剂RI-1可能通过增加细胞内DNA损伤参与RI-1对MSH2缺陷肿瘤的杀伤作用.
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散发性大肠腺瘤癌变过程中Rad51和Chk1的表达及意义
目的 探讨Rad51和Chk1在散发性大肠腺瘤癌变中的表达及意义.方法 采用免疫组化法检测71例大肠黏膜、66例散发性大肠腺瘤伴上皮不典型增生和98例大肠腺瘤癌变中,Rad51和Chk1的表达,并分析其与大肠癌临床病理特征的关系.结果 ①在大肠黏膜组、腺瘤组和癌变组中,Rad51和Chk1的表达水平逐渐升高.②在腺瘤癌变组中,Rad51的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关(p＜0.05),Chk1的表达与肿瘤的分化程度有关.③在腺瘤组中,中重度不典型增生者Rad51和Chk1的阳性表达高于轻度不典型增生者.结论 Chk1和Rad51在大肠腺瘤癌变的发生、发展过程中起重要作用.
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RNA干扰抑制RAD51基因表达对放射敏感性影响的实验研究
目的:构建针对DNA双链断裂修复基因RAD51的siRNA表达质粒,观察对肝癌细胞株HepG-2放射敏感性的影响.方法:采用基因重组技术,构建针对RAD51基因的干扰质粒pSilencer-1、pSilencer-2、pSilencer-3及对照质粒pSilencer-C,经脂质体转染HepG-2细胞,200 μg/mL潮霉素筛选稳定表达的细胞,用Western blot测定RAD51蛋白表达量的改变,用细胞克隆形成实验测定细胞放射敏感性.结果:筛选出稳定转染各组质粒的细胞;转染pSilencer-1、pSilencer-2和pSilencer-3质粒细胞克隆的RAD51蛋白表达量分别为转染pSilencer-C细胞克隆的0.60±0.29、0.36±0.16和0.15±0.09,t值分别为4.101、6.561和8.714,P值分别为0.049、0.003和0.001.pSilencer-C组、pSilencer-2组和pSilencer-3组三组剂量存活曲线的D0值分别为1.55、1.46和1.44,Dq值分别为3.31、3.16和2.82,SF2分别为0.82、0.73和0.67 Gy;与pSilencer-C组相比,pSilencer-2组和pSilencer-3组在2 Gy剂量时的放射增敏比SERSF2分别为1.12和1.23.结论:RNAi抑制RAD51基因的表达,能提高HepG-2细胞的放射敏感性,提示RAD51基因可作为放射增敏治疗的一个潜在靶点.
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非小细胞肺癌组织Rad51高表达及其临床意义的研究
ad51低表达患者为68个月(P<0.000 1).多因素分析发现,Rad51表达水平(P<0.000 1)、肿瘤细胞分化程度(P<0.009)、分期(P=0.004)和淋巴结转移状态(P=0.000 1) 是NSCLC患者完全手术切除后独立的预后因子.分层分析发现,Rad51表达对肺腺癌和鳞癌的预后差异无统计学意义.结论:Rad51表达是NSCLC患者完全手术切除后独立的预后因子.Rad51高表达患者生存时间短可能与肿瘤生物活性高,容易产生放化疗耐受有关.
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RNA干扰技术失活Rad51基因增加肿瘤细胞放射敏感性的研究
目的 研究RNA干扰技术(RNAi)能否失活Rad51基因,从而使肿瘤细胞的放射敏感性增加.方法 应用Psilencer U6-1.0质粒为载体在人纤维肉瘤HT1080细胞内表达短链干扰RNA(siRNA).RNAi效应在蛋白水平用Western blot方法评价;在细胞水平用成克隆分析及放射诱导的凋亡来评价.结果 所选3个靶序列均起到失活Rad51的作用,放射诱导的Rad51高表达也能被RNAi抑制.成克隆分析表明实验组存活分数在照射2、4、6、8 Gy后,分别是对照组的80.5%、78.6%、69.0%、57.7%(P=0.020);实验组放射诱导的凋亡在放射后0、6、18、24、48 h分别是对照组的1.03、1.43、1.19、1.29、1.33倍(P=0.017).结论 RNAi技术能够使内源性Rad51基因及放射诱导的Rad51高表达失活,从而使人纤维肉瘤HT1080细胞放射敏感性增加;RNAi技术是一种新的研究基因功能和放射增敏的方法.
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FOXO3a介导PTEN对DNA修复基因RAD51表达的调节作用
目的 探讨转录因子FOXO3a在PTEN调节RAD51表达中的作用.方法 利用Western印迹技术分析PTEN缺陷与否时,总FOXO3a以及细胞核内FOXO3a磷酸化的情况;转染外源AKT到PTEN野生型细胞或外源PTEN和失去激酶活性的AKT(AKT-DN)到PTEN缺陷型细胞,Western印迹检测核内FOXO3a的磷酸化情况.结果 PTEN缺失导致细胞核内FOXO3a磷酸化水平增高;外源PTEN可以降低PTEN缺陷型细胞核内FOXO3a的磷酸化水平,外源AKT可以增加PTEN野生型细胞核内FOXO3a的磷酸化水平;沉默FOXO3a在一定程度上导致RAD51表达水平下降.结论 FOXO3a可以结合到RAD51基因的启动子区,PI3K/AKT/FOXO3a信号通路是PTEN调节RAD51表达的重要方式之一.
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ATM基因在电离辐射诱导下对BRCA1、RAD51表达的影响
目的 探讨60Co γ射线照射前、后,BRCA1、RAD51蛋白在GM、ATM+AT、AT细胞中的 表达.方法 应用免疫荧光染色和激光扫描共聚焦显微镜,观察GM、ATM+-AT、AT细胞在0和10Gy60Co γ射线照射后,BRCA1、RAD51蛋白在上述细胞中的定位及表达并进行定量分析.结果 60Coγ射线照射前,BRCA1、RAD51蛋白在GM、ATM+-AT、AT细胞中仅有少量表达并且无共定位表达,其中在AT细胞中表达量低;10 Gy 60Co γ射线照射后,BRCA1、RAD51在GM、ATM+-AT、AT细胞中表达量增高,其中GM、ATM+-AT细胞呈现共定位表达,AT细胞无共定位表达;GM、ATM+-AT细胞中BRCA1、RAD51蛋白表达量与AT细胞比较差异有统计学意义(P＜0.01);GM细胞中BRCA1、RAD51蛋白表达量与ATM+-AT细胞比较差异也有统计学意义(P＜0.01).结论 GM细胞和ATM+-AT细胞中存在ATM基因,ATM在射线等因素诱导下可以激活其下游基因BRCA1、RAD51,并且使这两种蛋白表达或表达量增加并且相互作用,共同完成辐射损伤后的细胞修复;外源性ATM转入正常GM细胞后,由于外源性的ATM基因不能完全弥补内源性的ATM突变基因的功能,对其下游基因Brca1"部分"磷酸化,表现为BRCA1、RAD51蛋白表达量均较GM细胞低.
关键词： atm基因 BRCA1 RAD51 电离辐射 激光扫描共聚焦显微镜 -
氨甲蝶呤辐射增敏作用与RAD51的相关性研究
目的 探讨同源重组修复蛋白RAD51与氨甲蝶呤辐射增敏作用的相关性.方法 分别采用Western blot和RT-PCR法,观察γ射线、氨甲蝶呤及二者联合应用对人骨肉瘤细胞RAD51表达的影响,克隆形成实验观察氨甲蝶呤对RAD51高表达前后骨肉瘤细胞辐射增敏作用的影响.结果 氨甲蝶呤在蛋白质和RNA水平抑制RAD51的表达,氨甲蝶呤和射线联合应用可明显降低RAD51的表达水平；HOS细胞和RAD51高表达的HOS-RAD51细胞加药前后的辐射增敏比分别为1.51和0.99,表明氨甲蝶呤对HOS细胞具有较好的放射增敏性.结论 RAD51可能参与了氨甲蝶呤的辐射增敏作用.
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联合检测蛋白ERCC1、Rad51和P53的表达与预测晚期非小细胞肺癌铂类药物化疗的疗效
目的 观察晚期非小细胞肺癌石蜡标本中ERCC1、Rad51和P53的表达,分析其与铂类药物化疗疗效的关系,为肺癌的个体化治疗提供依据.方法 收集开封市第一人民医院2006年7月-2008年6月经病理组织学诊断的53例晚期非小细胞肺癌患者的病理学标本,用免疫组织化学的方法检测ERCC1、Rad51和P53的表达,所有的患者接受至少2周期顺铂或卡铂为主的化疗后,分析ERCC1、Rad51和P53蛋白的表达与化疗疗效关系.结果 ①53例患者中ERCC1、Rad51和P53阳性表达率分别是56.6%、43.4%和39.6%,其表达与患者的性别、年龄、体力状态、组织学类型及分期无关(P>0.05).②ERCC1阳性组化疗有效率为41.6%,ERCC1阴性组化疗有效率为72.2%;Rad51阳性组化疗有效率为32.5%,Rad51阴性组化疗有效率为的表达为59.8%;P53阳性组化疗有效率为29.2%,P53阴性组化疗有效率为43.4%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 ERCC1、Rad51和P53对化疗疗效的预测为负相关.
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CHK1、RAD51在结肠癌中的表达及意义
目的 研究CHK1、RAD51在结肠癌中的表达及其临床病理参数的关系.方法 选取45例外科手术切除结肠癌标本及15例距病灶3～ 5cm的癌旁正常肠粘膜组织,10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,每个标本行连续切片,厚4μm,应用SABC三步法,用CHK1、RAD51单克隆抗体对结肠癌组织切片进行染色,采用χ2检验或Fisher精确检验对CHK1、RAD51在结肠癌中的表达及其临床病理参数的关系进行研究.结果 CHK1、RAD51在结肠癌组织及癌旁正常肠粘膜组织中的表达水平增高,在结肠腺瘤恶变及结肠癌的发生发展过程中起重要作用,结肠癌组织中的CHK1、RAD51表达无相关性.结论 RAD51的表达与结肠癌的发生发展、浸润转移及预后有密切关系.
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联合检测蛋白ERCC1、Rad51和P53的表达与预测晚期非小细胞肺癌铂类药物化疗疗效的相关性研究
目的：检测ERCC1、Rad51和P53在晚期非小细胞肺癌中的表达，探讨其临床意义和与铂类药物化疗疗效的相关性。方法选取我院2012年6月～2013年6月诊断为晚期非小细胞肺癌的68例患者病理学标本，采用免疫荧光组织化学染色法检测晚期非小细胞肺癌患者标本和外周淋巴血细胞中ERCC1、Rad51和P53的表达，观察ERCC1、Rad51和P53在晚期非小细胞肺癌患者标本和外周淋巴血细胞中表达的相关性；给予患者2～4个疗程铂类为基础的标准化疗方案，评价ERCC1、Rad51和P53蛋白的表达与化疗疗效相关性。结果晚期非小细胞肺癌患者标本和外周淋巴血细胞中ERCC1、Rad51和P53阳性率（分别为42.6%、35.3%和45.6%）和阴性表达率（分别为33.8%、27.9%和38.2%）相同，呈显著正相关（均P＜0.05）；ERCC1、Rad51和P53蛋白表达在患者年龄、性别、TNM分期、病理类型间无统计学意义（P＜0.05）；ERCC1阳性表达患者铂类药物化疗后总有效率为41.2%，显著低于阴性患者化疗后总有效率73.9%（P＜0.05）；Rad51阳性表达患者化疗后总有效率33.3%显著低于阴性表达患者化疗后总有效率63.2%（P＜0.05）；P53阳性表达患者铂类药物化疗后总有效率为29.0%，显著低于阴性患者化疗后总有效率53.8%（P＜0.05）。结论检测晚期非小细胞肺癌患者外周淋巴血细胞中ERCC1、Rad51和P53表达可很好反映其在癌组织中的表达情况；ERCC1、Rad51和P53表达较低的患者铂类药物治疗有效率更好，ERCC1、Rad51和P53对化疗疗效的预测为负相关。
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RAD51在散发性结肠腺瘤癌变过程中的表达和意义
目的 研究散发性结肠腺瘤癌变中RAD51的表达和意义.方法 采用免疫组织化学法检测71例结肠黏膜、66例散发性结肠腺瘤伴上皮内瘤变和98例结肠腺瘤癌变中RAD51蛋白表达情况,并分析RAD51与结肠癌临床病理特征的关系.结果 ①在结肠黏膜组、腺瘤组和癌变组中,RAD51的表达水平逐渐升高(P＜0.05).②在腺瘤癌变组中,RAD51的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关(P＜0.05).③在腺瘤组中,伴高级别上皮内瘤变RAD51的阳性表达高于低级别上皮内瘤变(P＜0.05).结论 在结肠腺瘤癌变的发生发展过程中,RAD51起重要作用.
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DNA修复相关蛋白RAD51在宫颈癌细胞增殖中的作用
目的 研究DNA修复相关蛋白RAD51对人宫颈癌细胞HeLa和SiHa增殖能力的影响及其可能的机制. 方法 应用免疫组化检测RAD51蛋白在43例人正常宫颈,64例宫颈鳞状细胞癌组织中的表达情况;采用细胞计数法、MTT实验分析RAD51抑制剂RI-1处理(实验组1)和DMSO处理(对照组1)的人宫颈癌细胞HeLa和SiHa细胞体外增殖的变化;用RI-1(实验组2)和等体积生理盐水(对照组2)腹腔灌注于成功移植HeLa或SiHa细胞的裸鼠,分析裸鼠移植瘤瘤体生长、体积及质量的变化.采用流式细胞术检测各组细胞周期分布.Western blot检测抑制RAD51蛋白对细胞周期蛋白cyclin D1与P21水平的影响. 结果 RAD51蛋白在宫颈癌组织中的表达水平[73.44％ (47/64)]明显高于正常宫颈组织[13.95％ (6/43)].与对照组1相比,实验组1 HeLa及SiHa细胞中RAD51表达明显抑制,其细胞生长速度及活性也明显降低(均P＜0.01),且具有时间依赖效应;实验组2裸鼠移植瘤的生长明显减慢,且所成瘤体的平均质量均显著减小(P＜0.01).流式细胞术提示RAD51抑制剂处理后阻断细胞周期的转换.Western blot检测证实RI-1处理后降低了细胞周期蛋白cyclinD1和增加了P21的表达,进而阻断细胞周期的转换. 结论 RAD51通过调节cyclin D1与P21蛋白表达水平引起细胞周期进展停滞,改变宫颈癌细胞及移植瘤体的生长.
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Rad51 BRCA2在卵巢癌中的研究进展
卵巢癌的发生率逐年上升且呈年轻化趋势,成为目前人们关注的热点.DNA损伤修复机制在肿瘤的发生发展中起到了重要作用,同源重组(homologous recombination,HR)是体内参与DNA损伤修复的重要机制,而DNA修复蛋白Rad51和乳腺癌易感蛋白(breast cancer susceptibility gene 2,BRCA2)是体内参与同源重组性DNA修复的重要因子,并且与肿瘤对放疗和化疗药物的耐受性有关,因此,本文就这俩因子的研究进展作一综述.
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RAD51 135G＞C位点多态性与乳腺癌发病风险Meta分析
目的 分析RAD51 135G＞C位点多态性与乳腺癌的发病风险关系.方法 检索中外数据库,获得有关RAD51 135G ＞C位点多态性与乳腺癌发病风险的病例对照研究资料进行Meta分析.结果 共纳入文献15篇,累计乳腺癌病例12 717例,对照12 088例,与野生基因型GG相比,CC、GC和(GC +CC)合并的OR值(95％CI)分别为1.45(1.13 ～1.86)、0.95(0.75～ 1.20)、1.08(0.91 ～1.27).结论 RAD51 135G＞C位点纯合突变基因型CC是乳腺癌发病的危险因素,未发现RAD51 135G＞C位点GC和(GC +CC)基因型与乳腺癌的发病风险有关.
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Rad51同系物与DNA重组修复
真核细胞Rad51蛋白质与原核细胞RecA蛋白质具有结构及功能同源性,是促使细胞有丝分裂及减数分裂过程中DNA同源重组的关键性蛋白质.已在酵母细胞中鉴定出Rad55和Rad57两种Rad51同系物,从脊椎动物细胞中鉴定出5种Rad51同系物,即Rad51B、Rad51C、Rad51D、Xrcc2和Xrcc3.这些Rad51同系物与Rad51之间及各同系物之间共享20%～30%的序列同一性,这些Rad51同系物与Rad51蛋白质共同作用而在受损DNA的同源重组修复过程中发挥重要作用.
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同源重组修复相关Rad51在肿瘤中的研究进展
Rad51基因的突变在很多方面发挥着很关键的作用,比如抑制多种肿瘤的发生与发展,以及肿瘤对放疗和化疗药物的耐药性等方面.另外,由于Rad51基因是DNA修复基因,其在维持基因的稳定性方面有着极其重要的作用.而且,Rad51基因可能也会在肿瘤的发生、发展中与其他基因相互作用对其产生影响.本文主要对同源重组修复相关Rad51在肿瘤中的研究进展作一综述.
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PTEN基因表达对辐射诱发小鼠胸腺瘤细胞生物学行为的影响
目的:检测辐射诱发的胸腺瘤组织中第10染色体PTEN的表达,观察外源PTEN基因导入辐射诱发小鼠胸腺瘤细胞体外增殖能力及体内成瘤作用的影响,探讨PTEN与辐射诱发肿瘤的可能作用机制.方法:采用SP免疫组织化学法和Western印迹比较辐射诱发的小鼠胸腺瘤组织和正常小鼠胸腺组织中PTEN、γ-H2AX和Rad51蛋白的表达.RT-PCR技术检测胸腺瘤组织和正常胸腺组织中PTEN基因的缺失情况.利用基因转染技术将外源性PTEN转入小鼠胸腺瘤细胞中,观察其对小鼠胸腺瘤组织细胞体外增殖能力和体内成瘤作用的影响.结果:辐射诱发的小鼠胸腺瘤组织中PTEN蛋白表达阳性率为22.73%(5/22),显著低于正常胸腺瘤组织的阳性率(P＜0.01);Western印迹结果显示胸腺瘤组织中PTEN表达水平明显低于正常组织(P＜0.01);RT-PCR检测发现在肿瘤组织中存在高频率PTEN缺失.外源性PTEN表达后胸腺瘤细胞生长速度显著降低,而且细胞致瘤能力明显下降(P＜0.01).辐射诱发的胸腺瘤细胞γ-H2AX水平明显高于正常组织,而Rad51蛋白水平明显低于正常组织(P＜0.01).结论:PTEN表达缺失可能通过影响Rad51途径的DNA断裂修复通路,导致辐射诱发胸腺瘤的发生;外源PTEN的导入可以抑制胸腺瘤细胞的体外增殖能力及体内成瘤作用,有望成为辐射诱发肿瘤防治的新靶点.
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DNA损伤修复基因RAD51基因单核苷酸多态性与食管鳞状细胞癌的相关性研究
目的：探讨DNA损伤修复基因RAD51基因多态性与食管鳞状细胞癌(以下简称鳞癌)遗传易感性、临床病理特征的关系，及其在食管癌预后中的临床价值。方法：采用病例对照研究设计，选择98例食管鳞癌患者为观察组和80例正常人为对照组。选取RAD51135 G/C基因多态性为研究位点，以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法进行多态性检测，应用Logistic回归计算比值比(odds ratio，OR)及95%CI，比较不同基因型与食管鳞癌发病风险的关系、与食管鳞癌临床病理学特征的相关性、在食管鳞癌预后中的临床价值。结果：携带RAD51135 G/C多态患者中，基因型CC、GC 与野生基因型GG 相比，患食管鳞癌的危险度OR 和95%CI 分别是1.86(0.54～6.46)和0.93(0.50～1.72)。RAD51135基因纯合及杂合型基因型与淋巴结转移状态、远处转移及复发相关。结论：RAD51135基因单核苷酸多态与当地居民食管鳞癌遗传易感性无关；与食管鳞癌患者的淋巴结及远处转移可能相关；与食管鳞癌患者预后可能相关，对食管癌患者的预后可能有一定的临床价值。
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FoxM1抑制剂下调Rad51增敏顺铂对骨肉瘤耐药细胞的化疗抑制作用
目的 探讨FoxM1是否调控DNA修复基因Rad51参与顺铂(CDP)对骨肉瘤耐药细胞化疗抑制作用.方法 采用逐步增加剂量间歇作用的方法诱导骨肉瘤耐药细胞系并分别命名为MG-63/R和HOS-MNNG/R.qRT-PCR、Western blot法检测耐药细胞与亲本细胞FoxM1和Rad51的mRNA及蛋白表达;耐药细胞中4μmol/L Thiostrepton处理后qRT-PCR、Western blot法检测FoxM1和Rad51的mRNA及蛋白表达.细胞计数法检测单独或联合运用4μmol/L Thiostrepton和2-μg/mL CDP对骨肉瘤耐药细胞增殖率的影响.结果 建立在2 μg/mL CDP浓度中稳定生长的耐药细胞系MG-63/R和HOS-MNNG/R,耐药指数分别为30.52和37.87(均重度耐药).FoxM1和Rad51的mRNA及蛋白水平在耐药细胞中表达较亲本细胞明显增高;在耐药细胞中联合运用4 μmol/L Thiostrepton和2μg/mL CDP组较单独应用4μmol/L Thiostrepton组或2μg/mL CDP组细胞增殖率明显降低;耐药细胞4 μmol/L Thiostrepton处理后FoxMl及Rad51的mRNA和蛋白表达均明显降低.结论 FoxM1及Rad51高表达可能参与骨肉瘤细胞对CDP耐药,FoxM1抑制剂Thiostrepton可能通过下调Rad51增强CDP对骨肉瘤耐药细胞的抑制作用.
