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乙型肝炎的实验室检测及临床意义
乙肝是目前已确认的病毒性肝炎中对人类健康危害为严重的一种肝炎,1965年Bhumberg等首次发现乙型肝炎病毒(HBV)的表面抗原(HBsAg),HBV属于嗜肝DNA病毒科,完整的HBV病毒称为Dane颗粒,直径42nm,球形,有包膜(即HBsAg).患者血中除Dane颗粒外,还有16~25nm的球状和杆状体,是病毒组装过剩的HBsAg,HBV基因组由部分双链的环状DNA组成,长约3.2Kb,有4个开放读码框架,即S(包括前S1和前S2)、C(包括前C)、P和X4区HBV抗原.
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RNA干扰号慢性疼痛的基因治疗
RNA干扰(RNA interference,BNAi)是1998年Fire等[1]首次发现并命名的,是由双链RNA(dsRNA)分子在细胞内特异性诱导与之同源mRNA降解或翻译抑制,导致基因沉默的现象,是一种典型的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS).RNAi主要的功能特点是其可以调节和关闭基因的表达,进而调控细胞的各种高级生命活动.RNAi技术已经成为模式生物、基因功能、基因治疗等研究领域中有力的工具,本文仅就RNAi在慢性疼痛研究中的进展作-介绍.
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二代人乳头瘤病毒预防性疫苗的研究进展
人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一种嗜黏膜和皮肤上皮的双链DNA病毒,与多种疾病的发生相关.根据致病性将其分为高危型和低危型2种,高危型感染与宫颈癌及癌前病变的发生密切相关,有:HPV-16、-18、-45、-31、-33、-52、-58等;其中70%的宫颈癌与HPV-16/18型有关.低危型感染与生殖器疣和宫颈低级鳞状上皮增生病变的发生密切相关,有:HPV-6、-11、-40、-42等,其中6和11型的感染与90%以上的生殖器疣和宫颈低级鳞状上皮增生病变的发生密切相关.
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细胞因子基因多态性与EB病毒相关疾病关系的研究进展
Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr vires,EBV)是1964年 Ep-stein、Achong、Barr在研究非洲儿童恶性淋巴瘤时发现的一种亲人类B淋巴细胞的病毒.EBV属疱疹病毒科,双链DNA病毒,基因组长约184 kb.EBV主要通过唾液、飞沫传播,也可经输血传染.
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microRNA在肾脏病中的研究进展
真核生物的基因表达通常通过DNA转录成mRNA,由rRNA和tRNA辅助,翻译合成蛋白质实现.Fire和Mello博士首次提出的双链RNA介导RNA干扰基因沉默(RNA interference-gene silencing)的机制证明,体内存在一类小RNA,在DNA转录后水平对基因表达进行调控.这类小RNA即非编码RNA,包括内源性产生的miRNA(microRNA)和外源性介入的siRNA(short interfering RNA)两类.本文就microRNA的特性、作用和检测技术及其在肾脏病中的研究进展作一综述.
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脱氧核糖核酸酶Ⅰ在急性冠状动脉综合征诊断中的应用
目前有大量的研究表明急性冠状动脉综合征(acute cor-onary syndrome,ACS)与炎症反应及粥样斑块的不稳定破裂有密切关系,而细胞凋亡在其中亦起着重要作用,脱氧核糖核酸酶I(deoxyribonuclease Ⅰ,DNase Ⅰ)是细胞凋亡中双链DNA降解过程中起着重要作用的核酸酶,可能直接参与了ACS的发生和发展过程.
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北京地区2008-2010年水痘病原学监测
水痘是由水痘-带状疱疹病毒初次感染所引起的一种急性传染病,以皮肤、黏膜分批出现斑、丘、疱疹及结痂为主要临床特征,冬春季节好发于婴幼儿.该病为自限性疾病,病后可获得终身免疫,也可在多年后感染复发而出现带状疱疹.水痘-带状疱疹病毒属于疱疹病毒科水痘病毒属,遗传物质为双链DNA,基因全长约为125 000 bp,是目前小的疱疹病毒.
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肺腺癌SPC-A-1细胞表皮生长因子受体表达水平对其增殖的影响
目的探讨采用体外化学合成的针对表皮生长因子受体(EGFR)设计的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),是否能诱导肺非小细胞肺癌(NSCLC)细胞出现序列特异性基因沉默,及抑制EGFR基因表达后NSCLC细胞的生物学特征.方法体外合成EGFR序列特异性dsRNA(dsRNA-EGFR),结合脂质体2000转染肺腺癌SPC-A-1细胞,用荧光显微镜及流式细胞仪测定转染细胞的EGFR受体数量;适时定量聚合酶链反应检测其EGFR基因表达水平.采用集落形成试验检测SPC-A-1细胞的增殖和集落形成能力.建立裸鼠肿瘤模型,计算肿瘤抑制率.结果 dsRNA-EGFR可使EGFR在蛋白水平表达下降71.3%、基因水平表达下降50.0%,SPC-A-1细胞集落形成下降66.8%,并显著抑制在体肿瘤生长,肿瘤抑制率为75.0%.结论 dsRNA-EGFR可序列特异性下调NSCLC细胞EGFR在基因及蛋白水平的表达,有效抑制肿瘤生长.
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双链蛋白聚糖在胃癌组织中的表达及其意义
本研究应用实时定量聚合酶链反应(PCR)技术检测胃癌中双链蛋白聚糖(BGN)mRNA的表达,应用组织芯片和免疫组织化学技术检测胃癌中BGN蛋白的表达,探讨其与胃癌临床病理参数的关系及对预后的影响.资料与方法1.一般资料:样本来源于2004-2009年上海交通大学附属第一人民医院普外科264例胃癌根治手术病例,其中男157例,女107例;中位年龄66岁(27~89岁);Ⅰ期95例,Ⅱ期48例,Ⅲ期89例,Ⅳ期42例;术前均未行放、化疗.样本及资料采集均经患者知情同意,并获上海交通大学附属第一人民医院伦理委员会批准.
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Toll样受体与慢性病毒性肝炎
Toll样受体(toll-like receptor,TLRs)是近年来发现的在天然免疫和获得性免疫中起重要作用的一类模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)家族,通过识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP)主要指一类或一群特定的微生物病原体(及其产物)共有的某些非特异性、高度保守的分子结构,其可被非特异性免疫细胞所识别,如脂多糖(LPS)细菌内毒素、磷酸壁酸(LTA)、肽聚糖(PGN)、甘露糖、细菌DNA和病毒单链和双链RNA等.
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单倍体相合造血干细胞移植
目前,异基因造血干细胞移植(allo-HSCT),已成为治疗多种血液及非血液系统疾病主要手段之一.对于那些没有HLA完全相合供者的患者单倍体相合造血干细胞移植(haploidentical hematopoietic stem cell transplantation)不失为一种好方法.什么是单倍体相合?人体细胞都是二倍体细胞(为双链DNA),只有生殖细胞为单倍体(为单链DNA).
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干涉FNA抑制人骨肉瘤细胞PCNA表达的实验研究
目的:构建增殖细胞核抗原(proliferation cellnuclear antigen,PCNA)短发夹状RNA表达载体,检测其对骨肉瘤细胞PCNA mRNA及蛋白表达的影响.方法:体外构建PCNA shRNA表达载体pSilence2.1-neo-PCNA,转染骨肉瘤细胞系MG-63,RT-PCR和免疫组化方法检测转染后PCNA mRNA及蛋白的表达,MTT比色法和集落形成实验检测细胞增殖活性.结果:pSilence2.1-neo-PCNA载体转染能显著抑制PCNA mRNA和蛋白的表达,转染后24、48和72 h mRNA表达抑制率分别为68.62%、80.62%和73.12%,PI值分别为空白组的47.72%、23.37%和35.90%.转染后48 h细胞增殖的抑制率为68.89%.结论:pSilence2.1-neo-PCNA可显著抑制MG-63细胞PCNA mRNA和蛋白的表达及细胞的增殖活性.
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RNA干扰抑制RAD51基因表达对放射敏感性影响的实验研究
目的:构建针对DNA双链断裂修复基因RAD51的siRNA表达质粒,观察对肝癌细胞株HepG-2放射敏感性的影响.方法:采用基因重组技术,构建针对RAD51基因的干扰质粒pSilencer-1、pSilencer-2、pSilencer-3及对照质粒pSilencer-C,经脂质体转染HepG-2细胞,200 μg/mL潮霉素筛选稳定表达的细胞,用Western blot测定RAD51蛋白表达量的改变,用细胞克隆形成实验测定细胞放射敏感性.结果:筛选出稳定转染各组质粒的细胞;转染pSilencer-1、pSilencer-2和pSilencer-3质粒细胞克隆的RAD51蛋白表达量分别为转染pSilencer-C细胞克隆的0.60±0.29、0.36±0.16和0.15±0.09,t值分别为4.101、6.561和8.714,P值分别为0.049、0.003和0.001.pSilencer-C组、pSilencer-2组和pSilencer-3组三组剂量存活曲线的D0值分别为1.55、1.46和1.44,Dq值分别为3.31、3.16和2.82,SF2分别为0.82、0.73和0.67 Gy;与pSilencer-C组相比,pSilencer-2组和pSilencer-3组在2 Gy剂量时的放射增敏比SERSF2分别为1.12和1.23.结论:RNAi抑制RAD51基因的表达,能提高HepG-2细胞的放射敏感性,提示RAD51基因可作为放射增敏治疗的一个潜在靶点.
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表皮生长因子受体表达与非小细胞肺癌放疗敏感性的关系
目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)表达与非小细胞肺癌(NSCLC)放疗敏感性的关系.方法 体外化学合成EGFR基因序列特异性双链RNA(dsRNA)结合脂质体Lipofectamine 2000转染肺腺癌细胞株SPC-A1,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot法测定转染细胞中EGFRmRNA和蛋白的表达,采用集落抑制实验观察EGFR序列特异性dsRNA(dsRNA-EGFR)的体外放疗增敏作用.建立裸鼠肿瘤模型,通过测定肿瘤体积和肿瘤重量,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤抑制率.结果 对照组、dsRNA-unrelated组和dsRNA-EGFR组的EGFRmRNA相对表达量分别为1.51±0.22、1.38±0.15和0.45±0.11(F=482.7,P<0.01),EGFR蛋白表达水平分别为2340.87±10.99、2231.85 ±35.66和832.03±39.13(F =263.3,P<0.05).dsRNA-EGFR可将对照组EGFR mRNA和蛋白水平分别下调70.2%和64.5%.放疗对照组、dsRNA-unrelated联合放疗组和dsRNA-EGFR联合放疗组的集落抑制率分别为9.3%、12.5%和65.5%,肿瘤抑制率分别为21.3%、24.4%和64.2%,dsRNA-EGFR联合放疗可显著抑制体外、体内的肿瘤生长.结论 dsRNA-EGFR可显著抑制NSCLC中EGFR mRNA和蛋白的表达,有效抑制肿瘤生长,增强NSCLC的放疗敏感性.
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FOXO3a介导PTEN对DNA修复基因RAD51表达的调节作用
目的 探讨转录因子FOXO3a在PTEN调节RAD51表达中的作用.方法 利用Western印迹技术分析PTEN缺陷与否时,总FOXO3a以及细胞核内FOXO3a磷酸化的情况;转染外源AKT到PTEN野生型细胞或外源PTEN和失去激酶活性的AKT(AKT-DN)到PTEN缺陷型细胞,Western印迹检测核内FOXO3a的磷酸化情况.结果 PTEN缺失导致细胞核内FOXO3a磷酸化水平增高;外源PTEN可以降低PTEN缺陷型细胞核内FOXO3a的磷酸化水平,外源AKT可以增加PTEN野生型细胞核内FOXO3a的磷酸化水平;沉默FOXO3a在一定程度上导致RAD51表达水平下降.结论 FOXO3a可以结合到RAD51基因的启动子区,PI3K/AKT/FOXO3a信号通路是PTEN调节RAD51表达的重要方式之一.
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H2AX磷酸化与去磷酸化的分子机制及其对DNA损伤修复反应的调节作用
γH2AX即第139位丝氨酸(set)磷酸化的组蛋白H2AX已经被普遍认为是DNA双链断裂的分子标志,是目前国内外研究DNA损伤反应机制的焦点之一.γH2AX作为DNA双链断裂损伤感应的起始信号分子,将一系列DNA损伤反应蛋白募集到DNA损伤位点,形成DNA损伤反应功能复合物,启动激活DNA修复、细胞周期检查点等细胞DNA损伤反应.在DNA损伤修复结束后,γH2AX的及时去磷酸化,对于修复蛋白复合物从所结合的DNA上解离和细胞周期检查点的释放,都是至关重要的.这些发现促使研究人员不断地探索γH2AX的动力学变化机制及其与DNA损伤修复的深刻关系.本文将对PI3K家族催化H2AX的磷酸化及PP2A,PP4,PP6,Wip1等蛋白磷酸酶对其去磷酸化的分子机制,及其在DNA损伤修复中发挥作用的新研究进展,作综述讨论.
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RNA阻抑和基因沉默
真核生物中,双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱导产生特异性基因沉默(gene silencing)的机制,被称为dsRNA介导的基因阻抑(dsRNA-mediated interference,RNAi), 简称RNA阻抑.RNAi现在被认为是真核生物对病毒、转基因和转座因子(transposable elements)的防御机制.本文回顾了RNAi的研究历程,并介绍了RNAi的机制假说及其在技术应用方面的进展.
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乳腺癌易感基因1在 DNA 损伤修复中作用的研究进展
乳腺癌易感基因1( BRCA1)基因突变与乳腺癌的发生密切相关。目前研究表明,BRCA1作为调节者参与了 DNA 损伤修复过程。DNA 损伤的严重的形式是双链断裂,BRCA1通过调控同源重组(HR)在修复双链断裂中发挥关键作用。本文从 BRCA1主要功能区与 HR 的关系、主要功能区基因突变对修复双链断裂的影响、BRCA1与 BRCA2,Rad51和 CtIP 复合物等蛋白之间的相互作用和蛋白的磷酸化等方面,对 BRCA1调控 HR 的分子机制、BRCA1介导的修复机制缺失在合成致死性中的作用、及 BRCA1缺失后细胞对不同 DNA 损伤制剂敏感性发生的变化等内容进行了系统的综述。
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动物组织线粒体DNA研究进展
线粒体基因组也叫线粒体DNA(mtDNA,Mitochondrial DNA),结构与细菌DNA相似,呈双链环状,可独立编码一些蛋白质,是核外遗传物质,人们在线粒体中已发现RNA、DNA聚合酶、RNA聚合酶、tRNA、核糖体等全套装备,说明线粒体具有独立的遗传体系.
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人类乳头状瘤病毒和子宫颈癌疫苗
一、HPV的有关研究1.HPV分子生物学和生命周期:HPV国际病毒分类协会把其归为乳头病毒属的一员.现已鉴定出120种基因型,至少有85种基因序列已完全测定.它是一类显示高度的宿主特异和亲和力的无包膜小型双链环状DNA病毒.由核心和蛋白衣壳组成,衣壳由主要衣壳蛋白(L1)和次要衣壳蛋白(L2)组成.重要区域包括:早期区域(E),晚期区域(L)和长控制区域(LCR)也叫上游调节区(URR)或非编码区[1].早期区域的E6和E7是转录病毒的癌基因,所编码的E6、E7蛋白对于病毒的复制起关键性的作用.