部分ESIEC菌株存在耶尔森氏菌HPI毒力岛

本文应用小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力岛HPI上的irp2、fyuA基因和大肠杆菌染色体上asnT-tRNA位点检测的引物,对43株肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠杆菌(ESIEC)进行了PCR检测.发现约34.9%的菌株irp2、fyuA引物扩增阳性,而这部分菌株asnT-tRNA位点引物扩增为阴性,证实ESIEC中确有耶尔森氏菌毒力岛的irp2、fyuA基因,并且也在染色体上asnT-tRNA位点插入.

促进乳头状瘤病毒L1蛋白表达和DNA疫苗免疫效应的研究

目的探讨促进乳头状瘤病毒(PV)晚期基因L1的蛋白表达和DNA疫苗免疫效应的途径及可能的机制.方法分别将含人源化优化密码BPVL1-GFP融合基因(HL1-GFP)和野生型BPVL1-GFP融合基因(WL1-GFP)的真核表达质粒体外单独转染或与tRNAser真核表达质粒共转染人角质形成细胞HaCAT,荧光显微镜及Western blot方法观察L1-GFP融合蛋白的瞬时表达情况.半定量RT-PCR分析不同PV L1基因mRNA的表达.BALB/c小鼠股四头肌内分别接种野生型、优化密码L1DNA疫苗,同时将L1 DNA疫苗与tRNAser真核表达质粒混合后接种小鼠,观察诱导产生的体液免疫反应.结果野生型WL1-GFP融合基因在HaCAT细胞中未能有效表达,优化密码HL1-GFP基因在HaCAT细胞中的蛋白表达水平明显增强;但两者在mRNA水平差异无统计学意义.WL1-GFP与tR-NAser真核表达质粒共转染细胞中L1蛋白的表达较单独转染WL1-GFP基因时增强.动物DNA免疫结果表明,优化密码HL1 DNA疫苗接种可使小鼠特异性L1中和抗体水平明显升高;而野生型WL1DNA疫苗接种组小鼠仅产生低滴度的L1抗体,WL1 DNA疫苗与tRNAser真核表达质粒混合接种使小鼠的L1抗体水平增加.结论优化密码能显著促进乳头状瘤病毒晚期基因L1在哺乳动物细胞中的表达和DNA疫苗的免疫反应;补充外源tRNAser基因能够提高野生型L1基因的蛋白表达和DNA疫苗诱导的体液免疫应答.

线粒体基因变异与2型糖尿病易感性的关联研究

武汉大学人民医院的汤冬玲博士等对湖北地区2型糖尿病患者和糖耐量正常的健康人群mtDNA的12S rRNA、tRNA Leu、tRNA Glu、ND1和D-loop区的基因突变情况进行筛查,发现了3394(T→C)、14693(A→G)突变与T2DM的易感性有一定关联,16189(T→C)变异与湖北地区汉族人T2DM胰岛素抵抗相关.2型糖尿病是一组多因素导致的代谢紊乱综合征,患病率逐年上升.

线粒体tRNA突变与高血压关系的研究进展

线粒体基因突变与多种疾病的发生有关，虽然转移RNA（tRNA）基因只占整个线粒体基因组的10%，但它们却是研究线粒体基因突变与疾病发生关系的热点。既往高血压遗传学的研究主要集中在核基因方面，近年来研究发现线粒体DNA突变可能参与原发性高血压（EH）的发生与发展，且越来越多的线粒体tRNA也被报道与EH的发生和发展密切相关。本文对线粒体tRNA突变与高血压发病的关系及其机制进行了综述。

转运RNA及其相关片段与肿瘤关系的研究进展

转运RNA(tRNA)是一类广泛存在于生物体内,在肽链合成过程中负责氨基酸转运的小分子非编码RNA,近些年研究表明,tRNA及其相关片段具有许多生物学功能,与人类疾病密切相关,特别是在肿瘤发生发展中发挥着重要的调控作用.其主要作用机制可能与tRNA的表达谱紊乱以及tRNA相关片段对基因的调控作用有关.这一新型的小分子非编码RNA为肿瘤的诊断和治疗提供了新思路,本文就tRNA及其相关片段的产生及其与肿瘤的关系展开论述.

动物组织线粒体DNA研究进展

线粒体基因组也叫线粒体DNA(mtDNA,Mitochondrial DNA),结构与细菌DNA相似,呈双链环状,可独立编码一些蛋白质,是核外遗传物质,人们在线粒体中已发现RNA、DNA聚合酶、RNA聚合酶、tRNA、核糖体等全套装备,说明线粒体具有独立的遗传体系.

基因体外转录的应用研究

大量研究表明,基因表达的调控发生在基因复制、转录、转录后、翻译和翻译后等环节上.而基因转录的调控是逐级调控中关键的环节.由于参与调控的因素有很多,调控的过程非常复杂,因此在体内自然条件下,对基因的转录情况进行研究比较困难.

查美尼克在分子生物学方面的贡献

查美尼克是分子生物学的奠基人之一,第一个开发了无细胞蛋白质合成体系,发现了蛋白质合成中氨基酸ATP活化机制,发现了tRNA及其在基因表达中的作用,特别是发明的反义技术创造了一个新的生物技术原理.通过查美尼克的成就我们可以对分子生物学历史面貌有一个了解从而对生命科学的发展有一个新的视点.

精子非编码小RNA介导获得性状跨代遗传的研究进展

人类精子RNA的存在已被证实,其在改变早期胚胎事件中发挥着重要作用.近年来的研究表明,父代饮食结构、应激状态等环境暴露因素可以改变非编码小RNA表达水平,从而作为父代遗传信息传递的携带者及表观遗传的标记物,改变早期胚胎发育和子代生长状况,介导获得性状的跨代遗传,这从非编码小RNA的角度,为精子表观遗传学研究提供了新的靶点.在众多研究中,精子piRNA、microRNA、tRNA的研究成果尤为显著,其广泛存在于雄性生殖细胞中,可通过相应的调控机制,介导获得性状的跨代遗传.本文将着重阐述上述3种非编码小RNA在精子表观遗传学研究中所取得的进展,为男性生殖医学研究提供新的视野.

致泻性大肠杆菌和福氏2a志贺氏菌染色体上毒力岛和基因组岛插入相关的tRNA位点的研究

目的 探讨毒力岛及外源DNA片段的插入与异常tRNA位点的相关性.方法 采用PCR和杂交的方法,从异常tRNA位点寻找致泻性大肠杆菌和志贺氏菌的福氏2a菌基因组中可能的毒力岛或基因组岛.以Escherichia coli K12 MG1655序列中的86个tRNA位点的45个区域设计引物,对与K12亲缘较近的几类菌株的相关tRNA及其临近序列的完整性进行了初筛,对发现异常者进一步从其内部补充引物扩增证实,并联合杂交方法进行验证,以已知的E.coli O157∶H7 EDL933和S.flexneri 2a 301的序列来对比PCR结果.结果 菌株EDL933,S.flexneri 2a 301,EPEC 2348/69,ETEC 10407,EIEC 8401,E.coli O157∶H7 8823/64,EAEC O42,E.coli O25 F171中异常tRNA位点的个数分别是14,18,15,14,15,11,21,19.通过序列比对EDL933中8个tRNA位点有O岛插入,S.flexneri 2a 301中有6个插入了毒力岛,其余的位点均有外源片段插入或原有片段缺失.结论 毒力岛及外源DNA片段的插入与异常tRNA位点密切相关.

真核细胞tRNA的降解

tRNA在蛋白质合成过程中起着关键性的作用,不但为三联密码子翻译成氨基酸提供了接合体,而且为将氨基酸运送到核糖体提供了运送载体.在真核细胞中,tRNA前体必须经过广泛的加工修饰,成为成熟的tRNA分子才能充分发挥生物学功能.以往对tRNA的研究主要集中于tRNA的结构、功能、加工和成熟上,却很少关注tRNA分子的降解.近研究发现tRNA的降解在tRNA的生成、加工和功能发挥上同样起着重要作用.

线粒体DNA突变、氨基糖苷类抗生素与耳聋

线粒体tRNAThr T15943C突变可能是影响耳聋相关12s rRNA A1555G突变表型表达的新突变位点

目的 通过对一个中国汉族耳聋家系进行分析研究,探索与耳聋相关的新的继发突变位点.方法 对一个中国汉族耳聋家系进行临床和分子遗传学特征分析,然后建立永生化淋巴母细胞系,从细胞倍增时间和活性氧等部分功能实验方面进行验证.结果 家系内听力下降的母系成员在听力损失程度和听力曲线方面存在差异.该家系耳聋外显率较高,包括药物致聋的耳聋外显率为66.7％,而非药物致聋的外显率为44.4％.对先证者及母系成员进行线粒体DNA全序列分析,发现除了12s rRNA A1555G和tRNAThrT15943C突变位点外,其余33个均为已报道的多态性位点.进一步的单体型进化树分析发现,该家系属于东亚线粒体单体型F.15943位点位于tRNAThr T茎结构上,该位点发生T-C碱基变化时会破坏tRNAThr二级结构上十分保守的T-A碱基对.细胞功能实验表明,与相同F单体型的正常对照组和仅携带12s rRNA A1555G单突变家系相比,该双突变耳聋家系永生细胞系的细胞倍增时间均较其他两个对照组延长,活性氧水平则增高.结论 线粒体tRNAThr T15943C突变可能作为潜在的修饰因子与12s rRNAA1555G突变相互作用,从而增强耳聋外显率和表现度.

线粒体DNA4329C＞G突变相关高血压家系分析

目的 探讨线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变与高血压发病之间的关系.方法 收集2个具有母系遗传特征的高血压家系的临床资料,分析其临床特征,并进行了全mtDNA序列分析.结果 两个家系母系成员表现出不同程度的高血压,其发病年龄在44～55岁之间.家系成员的mtDNA序列分析结果显示,所有的母系成员在tRNAIle和tRNAGln基因3'末端存在4329C＞G突变,而在366名正常对照者中未发现此突变.mtDNA 4329C位点在各物种中是高度保守的,其与tRNAs氨基酸臂高保真性、功能tRNAs的结构形成和稳定有关.结论 tRNAIle和tRNAGln 4329C＞G突变与两家系的高血压发病有关,也许还有其他修饰因子的参与.

抗体新时代--核酸多功能配基

抗体在人类疾病诊断和治疗等方面做出了巨大的贡献,但筛选周期长,成本高,分子量较大,在应用中受到一定的局限.tRNA为研制一种多功能核酸配基分子提供了重要的启发和佐证.SELEX技术筛选的核酸配基具有筛选周期短、特异性强、分子量小等优点;利用核酸配基研制的核酸多功能配基,与传统的抗体相比,具有不同功能配基组装方便、搭配灵活、功能多样、实用性强等优势,预计在生物医学领域具有广泛的应用前景.