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HIV-P24核酸适配体的筛选
目的 利用SELEX技术筛选HIV-P24的核酸适配体,为艾滋病的诊断和治疗奠定基础.方法 以重组P24为筛选靶,用SELEX技术从随机寡核苷酸库中筛选与HIV-P24结合的寡核苷酸,利用凝胶阻滞实验鉴定第12轮筛选到的寡核苷酸与HIV-P24的结合,再用Dot-blot法筛选出与HIV-P24结合的核酸适配体,并检测核酸适配体识别HIV-P24的特异性.结果 Dot-blot筛选到5条与HIV-P24有较强结合能力的核酸适配体,且均为不同的序列.特异性检测显示,18和26号配体只与HIV-P24特异性结合,而与人血清白蛋白、牛血清白蛋白和脱脂奶粉均无明显结合.结论 成功筛选到2条特异结合HIV-P24的核酸适配体,为其应用于艾滋病诊断和治疗提供了实验基础.
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利用SELEX技术构建靶向光敏药物
肿瘤是目前威胁人类健康凶险的疾病之一.寻找选择性好、副作用小的防治恶性肿瘤的新方法仍然是当今医学研究的热点.光动力学疗法是近年来兴起的极具应用前景的肿瘤治疗新方法.开发新型靶向光敏剂和开展靶向光动力治疗是进一步发展光动力治疗肿瘤的重要方向.本文简述了目前光动力治疗及常用光敏剂的研究现状,并提出通过指数式富集法配体进化技术即SELEX技术构建靶向光敏药物的新设想.
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SELEX技术与临床应用
SELEX是一种新近发展起来的组合生物化学技术,即通过配基识别、结合目的靶分子从而筛选出特定靶分子的高特异性和高亲和力的配基.针对筛选获得的特异配基在临床上有多种应用,如应用于疾病的临床诊断,作为功能阻断物质开发新型的治疗药物,或直接参与阻断疾病的进程应用于临床治疗等.
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SELEX技术检测小分子化学物研究进展
Tuerk等[1-2]于1990年发明一种体外筛选新技术,即指数富集的配体系统进化技术(systematic evolution of ligandsby exponential enrichment,SELEX),分别筛选出针对噬菌体T4 DNA聚合酶和有机染料分子的特异性适体.适体(aptamer)指用SELEX技术从体外合成的随机寡核苷酸序列库中人工筛选出的与靶标有高亲和力和特异性结合的寡核苷酸序列.
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指数富集配体的系统进化技术在结核病研究中的进展
指数富集配体的系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术是20世纪90年代发展起来的一项新型组合化学技术~([1]).经过十余年的发展,SELEX技术已成为一种重要的研究手段和工具,并广泛应用于分子生物学、基因组学和临床医学等众多研究领域.近年来,SELEX技术也被应用于结核病的研究领域,为探究结核病的致病机制及诊断、治疗技术提供新的有效方法.
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结核分枝杆菌分泌蛋白64抗体适体的获得及血清学检测
指数级富集配体的系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELFEX)技术筛选的适体具有可体外合成、纯度高、稳定性强和易于保存等特点,并已用于检测多种靶物质.目前利用适体检测MTB分泌蛋白64(MFT64)及模拟胸腔积液中γ-干扰素含量已有报道~([1-2]),由于MPI64是结核病血清学诊断的重要抗原之一,本研究旨在利用SELEX技术筛选MPT64抗体高亲和性适体并用于血清学检测,对获得的适体进行初步功能学评价.
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核酸适配体分子信标探针在肿瘤研究中的应用进展
核酸适配体是从随机寡核苷酸文库中筛选出来,可以高特异性和高亲和力与靶点结合的寡核苷酸序列,具有靶点范围广、相对分子质量小、化学稳定性高、易于合成和修饰等优点.分子信标是一种具有特殊发夹结构的新型荧光探针,具有背景信号低、灵敏度高、特异性识别强、操作简单以及不必与未反应的探针分离即可实时检测等优点.将核酸适配体的分子识别特性和分子信标的光学检测性能相结合,在生命科学研究领域有着良好的应用前景.但核酸适配体的应用研究仍处于初级阶段,还有许多问题需要解决,为解决这些问题,进一步拓展核酸适配体分子信标在生命科学领域,特别是肿瘤领域的应用,需要科学工作者不断的努力和突破.同时随着核酸适配体的发展,越来越多与不同靶点特异性结合的核酸适配体将被筛选出来,并被应用于生命科学研究领域.本文主要对以核酸适配体为基础的分子信标探针在肿瘤研究中的应用进展进行综述.
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磁珠-流式细胞术SELEX技术的建立
目的:建立磁珠一流式细胞术SELEX技术方法.方法:不对称PCR扩增并制备ssDNA文库,选用商品化的、表面包被链霉亲合素的磁珠作为分离介质进行SELEX筛选,流式细胞术检测筛选得到的配基与链霉亲合素结合的特异性,及配基竞争生物素与链霉亲合素的结合情况.结果:筛选获得了特异识别链霉亲合素的ssDNA配基,流式细胞术检测确定:筛选得到的配基与链霉亲合索特异结合,并能竞争生物素与链霉亲合素的结合.结论:成功建立了磁珠一流式细胞术SELEX技术方法.
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核酸适配子在肿瘤诊断和治疗中的应用
核酸适配子是采用SELEX技术从随机寡核苷酸库中筛选出的、能与靶物质高特异性结合的单链寡核苷酸,可用于靶物质的测定或抑制靶物质的生物学功能.本文结合文献,综述核酸适配子在肿瘤诊断与治疗中的应用价值.
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人慢性粒细胞白血病融合蛋白BCR－ABL适配子筛选及结构分析
目的：筛选、鉴定人慢性粒细胞白血病融合蛋白BCR－ABL适配子。方法：利用SELEX（ Systematic evolution of ligands by exponential）技术，以高纯度融合蛋白BCR－ABL为靶分子，从体外化学合成的长度为90 bp的随机单链DNA文库中来筛选与融合蛋白BCR－ABL特异性结合的寡核苷酸适配子，并进行解离常数（ Kd）值测定和适配子序列测定，再分别用Clustal W软件包和DNA Folding Sever分析适配子一级结构及二级结构，以酶联仪测定OD450值，根据OD值高低判定适配子亲和力大小。结果：经过13轮筛选，随机ssDNA文库与融合蛋白的亲和率从0．3％上升到47．1％，所有的一级结构没有共同的同源序列，二级结构分析结果显示，茎和环等二级结构可能是适配子和融合蛋白BCR－ABL结合的基础，其中，寡核苷酸适配子A2与BCR－ABL亲和力高，kd值达72 nmol／L。结论：利用随机寡核苷酸文库筛选技术成功获得抗融合蛋白适配子，为临床上治疗和预防慢性粒细胞白血病提供一定的参考。
关键词： SELEX技术 慢性粒细胞白血病 融合蛋白BCR-ABL 适配子 筛选 -
SELEX技术的研究进展及在医学中的应用
SELEX技术是一类新型组合化学技术。其通过人工合成的随机寡核苷酸文库，历经筛选、分离、富集得到能与各种配体特异结合的寡核苷酸适配体，具有高选择性、高亲和力和稳定性良好的特点。本文综述了SELEX技术的原理、特点，介绍了目前的研究进展及在医学领域中的应用情况，并对其前景进行分析和展望。
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运用SELEX技术筛选特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白RNA适配子
目的获得特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白prepilS的RNA适配子(aptamers),为开发预防、治疗伤寒杆菌肠热症的新型药物试剂奠定基础.方法采用SELEX技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)筛选IVB型纤毛结构蛋白prepilS的特异性适配子,通过体外构建一个长度为88 nt含有30个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库,PCR扩增为双链DNA随机文库后,体外转录构建RNA随机文库,以Sepharose 4B为筛选介质,筛选具有特异性高亲和力prepilS蛋白的RNA适配子.结果经8轮筛选获得具有特异性高亲和prepilS蛋白的RNA适配子库.结论成功地筛选出具有特异性高亲和力的RNA适配子库,该RNA适配子库可显著抑制伤寒杆菌侵入THP-1细胞.
关键词： 伤寒杆菌 IVB型纤毛结构蛋白 SELEX技术 -
HER-2核酸适配子的筛选及其对胃癌抗肿瘤活性的研究
目的 应用SELEX技术筛选与HER2蛋白特异性结合的适配子(aptamer),探讨其对胃癌的抗肿瘤活性.方法 (1)建立DNA寡核酸文库,通过SELEX技术筛选出HER-2核酸适配子,并行核酸适配子的鉴定及结构修饰.(2)采用胃癌细胞株的细胞增殖试验(MTT)及流式细胞术的细胞凋亡与增殖体外研究HER-2核酸适配子对高表达HER-2胃癌细胞的抑瘤活性.(3)建立Balb/C裸鼠胃癌模型,研究HER-2核酸适配子对高表达HER-2胃癌细胞的抗瘤活性.结果 (1)筛选获得的胃癌细胞HER-2核酸适配子86个核苷酸序列,对NCI-N87蛋白裂解液中HER-2具有较好的亲和反应.(2)细胞增殖试验(MTS)显示HER-2适配子对NCI-N87细胞增殖活力具有显著的抑制作用,流式细胞术显示其能显著诱导NCI-N87细胞的凋亡.(3)体内胃癌模型实验显示HER-2核酸适配子能抑制肿瘤生长.结论 采用SELEX技术筛选出高特异性及高亲和力结合HER-2的核酸适配子,通过体内外实验均证实HER-2核酸适配子可以抑制胃癌细胞生长、促进胃癌细胞凋亡而呈现良好的抗瘤活性.
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基因工程技术在药物筛选中的应用
药物筛选是发现新药的重要途径.近年来,其技术与水平在不断进步,建立在基因水平上的药物筛选模型已经大量出现,在此基础上进行药物筛选,无疑可使药物的特异性更高.本文就近5 a来国内外基因工程技术在药物筛选中的应用作一综述.
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SELEX技术原理及应用进展
SELEX技术即指数富集配基的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponcntial enrichment),它应用大容量的随机寡核苷酸文库并结合体外PCR扩增技术.
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肝脏去唾液酸糖蛋白受体特异性RNA适配子的SELEX筛选与鉴定
目的 获得能够特异性高亲和力结合肝脏特异性去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor, ASGPR)的RNA适配子,为开发诊断和治疗肝脏疾病的靶向性试剂和药物奠定基础.方法 合成一个长度为115 nt含有25个随机序列的单链DNA随机文库,通过体外转录构建出单链RNA适配子随机文库,以肝脏ASGPR大亚基为靶蛋白,采用SELEX(systematic evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选具有高亲和力的ASGPR特异性RNA适配子;通过膜结合测定实验、凝胶阻滞实验鉴定筛选适配子对靶蛋白的特异性和亲和力.结果 经过12轮筛选获得了具有高亲和力的肝脏ASGPR特异性RNA适配子.结论 成功地筛选出了具有高亲和力的肝脏ASGPR特异性RNA适配子库.
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SELEX技术筛选特异性结合高转移性肺癌细胞Anip973的单链DNA适配子
目的:筛选获得一种高亲和力的能特异性结合高转移性肺癌细胞Anip973的单链DNA适配子.方法:体外合成全长88 nt的单链DNA文库,通过反复的SELEX筛选获得特异性结合Anip973细胞的单链DNA适配子,并通过生物素-辣根过氧化物酶-链霉亲和素系统初步测定筛选的适配子与细胞的亲和力,将结合力高的适配子库进一步克隆测序.结果:经过11轮的正向筛选,以及7轮低转移性肺癌细胞AGZY83-a的反筛后,筛选获得了与Anip973细胞具有极高亲和力的适配子,亲和力从第1轮的0.08±0.02上升至0.98±0.28;将亲和力高的第11轮适配子库进行克隆测序,将亲和力高的适配子标记荧光素通过流式细胞术进一步验证发现筛选的ssD-NA具有很强的特异性.结论:成功筛选获得了亲和力高的特异性结合高转移性肺癌细胞Anip973的单链DNA适配子.
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适配子及其临床诊断的应用进展
1990年,2名科学家采用体外筛选与PCR相结合的新技术从人工构建的寡核苷酸文库中分别筛选到了与有机染料和噬菌体DNA聚合酶特异性结合的寡核苷酸序列[1-2].这种新技术后来被命名为指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX),筛选到的寡核苷酸被命名为适配子(aptamer).适配子是人工合成的单链寡核苷酸(DNA或RNA),能够与靶物质进行高特异性与亲和性地结合,其功能类似抗体,但比抗体具有更多的优势,因此颇受学者们的青睐.
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配体指数级系统进化技术及其在实验诊断中的应用
SELEX技术是一种新的组合化学技术，利用该技术从随机寡核苷酸文库中筛选出与靶分子结合的寡核苷酸配基，具有极高的亲和力和特异性，在临床诊断中比蛋白类抗体有更明显的优越性，显示出广阔的应用前景。
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SELEX筛选骨肉瘤HER2适配体方法的建立
目的 应用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与HER2特异性结合的寡聚核酸适配体(aptamer).方法 体外合成了长度为78个碱基并含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库,通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法制备次级ssDNA文库,且经以微孔为介质的SELEX正反筛法获得了与HER2特异性结合的DNA适配体;同时利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力,将亲和力高的适配体群进行克隆、测序.后利用生物学软件DNAMAN对适配体群进行了一级结构和二级结构的分析,同时将亲和性高的适配体做了进一步的特异性的检验.结果 经过12轮的筛选,获得了与HER2蛋白具有极高亲和力的适配体9号,亲和力从初始的0.18上升至o.86,提高了约5倍.特异性结果显示,9号适配体只与HER2具有较高的特异性.结论 经过多轮的筛选,成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤的诊断和治疗奠定了基础.
