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核酸技术在乳腺癌实验诊断中的进展
乳腺癌的实验室诊断传统策略主要是基于抗原-抗体反应的免疫学诊断,如CA-153、细胞角蛋白CK8/18/19等;以及基于核酸(DNA/mRNA)的分子诊断,如BRCA1/2、HER2等.本文阐述了循环DNA、循环miRNA、核酸适配子、循环肿瘤细胞等基于核酸策略的新兴技术在乳腺癌实验诊断中的进展.
关键词： 乳腺癌 循环DNA/miRNA 核酸适配子 循环肿瘤细胞 -
核酸适配子的研究进展与应用展望
核酸适配子是采用指数富集配体的系统进化(SELEX)技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体.核酸适配体由于具有精确识别、易体外合成与修饰等特点,它已在基础研究、临床诊断与治疗以及新药研发等诸多领域展示了广阔的应用前景.鉴于其特有的性质,它们将在环境毒理研究及相关领域,如环境毒素的快速检测、生物体内毒性评价、毒性阻断研究上有着广阔的应用前景.
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核酸适配子在肿瘤诊断和治疗中的应用
核酸适配子是采用SELEX技术从随机寡核苷酸库中筛选出的、能与靶物质高特异性结合的单链寡核苷酸,可用于靶物质的测定或抑制靶物质的生物学功能.本文结合文献,综述核酸适配子在肿瘤诊断与治疗中的应用价值.
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K562细胞ssDNA适配子检测方法对慢性粒细胞白血病诊断价值的研究
目的：评价K562细胞ssDNA适配子检测方法（简称适配子检测法）对慢性粒细胞白血病（CML）的临床诊断价值。方法采集18例CML患者、22例其他白血病患者、20名健康体检者（正常对照组）的血液标本各5 mL，分离粒细胞，用建立的适配子检测法检测荧光强度，绘制受试者工作特征（ROC）曲线。结果 CML组荧光强度为492．26±41．67，与其它白血病组（466．86±33．23）及正常对照组（469．33±37．13）比较，差异无统计学意义（P值分别为0．078、0．243）；其它白血病组和正常对照组比较，差异亦无统计学意义（P＝0．835）。适配子检测法诊断CML的ROC曲线下面积为0．702，佳阳性临界值为475．13，灵敏度为83．33％、特异性为54．76％、阳性预测值为44．11％、阴性预测值为88．46％。结论适配子检测法对CML的诊断具有较低的准确性，实际应用还有一定的局限性。
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核酸适配子在消化系统肿瘤诊治的应用研究进展
核酸适配子是一类寡核苷酸配基,由指数富集配体系统进化技术从寡核苷酸文库中筛选合成所得.核酸适配子的配体种类丰富,其亲和力及特异性较蛋白抗体高、性质稳定及合成简便,有望成为生物医药领域的花魁.核酸适配子在疾病尤其是肿瘤诊治的应用中已表现出很大潜力.此文就核酸适配子在消化系肿瘤诊治的应用研究进展作一综述.
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转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性
目的:分析转移性大肠癌LoVo细胞特异性核酸适配子W14的生物活性和血浆稳定性.方法:采用荧光显微镜流式细胞术分析W14在25℃和37℃下与靶细胞LoVo的特异结合活性;流式细胞术检测W14在血浆环境下对LoVo细胞的特异识别能力;37℃下W14分别在完全培养基和人血浆中孵育0.5、1、1.5、2、3、4、6h,琼脂糖凝胶电泳检测W14的生物稳定性;用2、4、8、10 μmol/L的W14处理LoVo细胞24、48、72 h,MTS实验测定W14的细胞毒性.结果:W14在不同温度和血浆环境中以及不同温度条件下都能特异性地识别和结合靶细胞LoVo,能稳定地存在于血浆中6h不发生降解,且对细胞没有明显的毒性作用.结论:转移性大肠癌特异性核酸适配子W14具有良好的适应能力和特异性结合能力,有较好的生物稳定性和低毒性,适应于人体内应用.
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HER-2核酸适配子的筛选及其对胃癌抗肿瘤活性的研究
目的 应用SELEX技术筛选与HER2蛋白特异性结合的适配子(aptamer),探讨其对胃癌的抗肿瘤活性.方法 (1)建立DNA寡核酸文库,通过SELEX技术筛选出HER-2核酸适配子,并行核酸适配子的鉴定及结构修饰.(2)采用胃癌细胞株的细胞增殖试验(MTT)及流式细胞术的细胞凋亡与增殖体外研究HER-2核酸适配子对高表达HER-2胃癌细胞的抑瘤活性.(3)建立Balb/C裸鼠胃癌模型,研究HER-2核酸适配子对高表达HER-2胃癌细胞的抗瘤活性.结果 (1)筛选获得的胃癌细胞HER-2核酸适配子86个核苷酸序列,对NCI-N87蛋白裂解液中HER-2具有较好的亲和反应.(2)细胞增殖试验(MTS)显示HER-2适配子对NCI-N87细胞增殖活力具有显著的抑制作用,流式细胞术显示其能显著诱导NCI-N87细胞的凋亡.(3)体内胃癌模型实验显示HER-2核酸适配子能抑制肿瘤生长.结论 采用SELEX技术筛选出高特异性及高亲和力结合HER-2的核酸适配子,通过体内外实验均证实HER-2核酸适配子可以抑制胃癌细胞生长、促进胃癌细胞凋亡而呈现良好的抗瘤活性.
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核酸适配子及其在肿瘤诊断与治疗中的应用
核酸适配子是采用指数富集配体的系统进化(SELEX)技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体,其特性在很多方面优于抗体,在分子识别研究中具有重要价值,可用于靶物质的测定、阻断靶物质的生物活性,在肿瘤的诊断和治疗中有着广阔的应用前景.
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壳聚糖纳米微粒对靶向转化生子因子-βⅡ型受体核酸适配子的缓释作用及其安全性研究
背景 本课题组前期已筛选得到了靶向转化生长因子-β(TGF-β)Ⅱ型受体(TβRⅡ)的核酸适配子S58,并证明S58可抑制TGF-β介导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)转分化作用.壳聚糖纳米微粒(CS-NP)已被证实可作为药物载体,但其包埋S58后抑制HTFs增生的有效性和安全性值得关注. 目的 制备CS(S58)-NP,研究其生物学特性,并观察CS-NP对S58的保护及缓释作用.方法 本研究所用细胞由本课题组前期原代培养的HTFs传代而来,取第4～10代对数生长期的细胞用于实验.以S58为实验对象,通过离子交联法制备出不同浓度CS-NP与S58表面电荷比(N/P比)的CS(S58)-NP.应用Zeta粒径分析仪检测CS(S58)-NP粒径及其Zeta电位;用扫描电子显微镜观察粒径的大小、形态及分布情况;采用琼脂糖凝胶电泳法检测CS-NP与S58的结合情况,并评估CS(S58)-NP对核酸酶的抵抗能力;用紫外分光光度计检测不同时间点缓释液PBS中S58的含量,以判断CS(S58)-NP缓释S58的情况;利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测CS(S58)-NP对HTFs的细胞毒性. 结果 制备的CS(S58)-NP粒径分布于130～ 270 nm之间,其Zeta电位分布范围为+16 ～ +28 mV;扫描电子显微镜下可观察到CS(S58)-NP呈球形,分布均匀,粒径在300 nm以内.当CS-NP与S58 N/P比例为10、20、30、40时,CS(S58)-NP平均包封率分别为88.9％、89.3％、91.7％、90.5％;加入DNase Ⅰ组与无DNase Ⅰ组比较,S58经CS-NP包裹后能够明显抵御DNase Ⅰ的酶解作用;体外缓释实验发现,CS-NP在PBS中持续缓慢释放S58,随着时间的延长,S58累计释放量增加,以24 ～ 36 h释放速率高,96 h S58累计释放量为100％.随着CS(S58)-NP浓度的增加,HTFs上清液中LDH相对释放率逐渐增加,差异有统计学意义(F=588.018,P=0.000).50 nmol/L CS(S58)-NP处理HTFs 48 h时LDH相对释放率大,为(12.853±0.375)％. 结论 CS-NP对S58具有保护及缓释作用,其浓度在50 nmol/L以下时对HTFs的毒性作用小,具有良好的生物相容性,可用于核酸适配子的载体研究.CS(S58)-NP可用于抑制TGF-β介导的HTFs转分化研究.
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核酸适配子及其治疗应用
核酸适配子(aptamer)是从大容量的组合化学库中筛选出的短的寡核苷酸.与抗体类似,它与靶分子结合具有高特异性和高亲和力.大多数核酸适配子与靶分子结合后对靶分子有抑制作用.适配子可广泛用于抗凝血、抗病毒、抗增殖、抗炎等方面.特异针对人VEGF165的核酸适配子已在美国被批准上市.
关键词： 核酸适配子 配体指数级富集系统进化技术 治疗应用 -
量子点-核酸适配子功能化分子探针用于胃癌细胞识别
目的 以前期筛选出的核酸适配子GC-1为靶向分子,量子点作为标志物,观察其对胃癌细胞的特异性识别.方法 分别以培养的低转移胃癌细胞SGC-7901、高侵袭转移性胃癌细胞OCUM-2MD3为研究对象,检测GC-1的识别能力,并采用流式和共聚焦方法初步分析适配子GC-1在细胞上的靶向结合位点.以临床确诊的30例胃癌组织切片为研究对象,采用间接荧光法分析适配子GC-1的鉴别诊断能力,并根据GC-1的阳性率进一步分析患者生存曲线.把不同数量(105、104、103、102个)的胃癌细胞OCUM-2MD3分别混匀到1 ml健康人外周血中,NH4Cl裂解法去除红细胞,然后与CY3标记的核酸适配子GC-1孵育,采用流式细胞仪分析.结果 核酸适配子GC-1耦联量子点的功能化分子探针可识别体外培养的胃癌细胞,也可识别临床胃癌患者组织切片中的癌细胞;在30例确诊的胃癌组织切片中,该功能化分子探针可识别出其中8例,该8例阳性患者与其余22例阴性患者的生存曲线分析差异有统计学意义(P＜0.01).流式分析法显示:即使102个胃癌细胞混到1 ml健康人的外周血中,CY3标记的适配子GC-1也可识别少量的外周血模拟环境中的胃癌细胞.结论 基于适配子-量子点的功能化生物分子探针可检测临床组织切片;适配子能特异识别外周血胃癌细胞,可作为捕获循环胃癌细胞的潜在分子.
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核酸适配子在肿瘤诊治中的新进展
0 引言1990年Tuerk[1]和Ellington[2]报道了一种在体外应用随机单链寡核苷酸文库筛选、扩增特定配体的技术,这种技术可得到与靶分子具有高亲和力、高特异性结合的寡核苷酸序列,此技术称为指数富集的配体系统进化(SELEX)技术.此后该技术不断得到改良和发展,筛选出多种靶标的特异性适配子,在基础研究、临床诊断、药物研发等方面得以广泛应用,尤其在肿瘤的诊断[3]、靶向药物输送和靶向治疗_]方面表现出巨大的潜力,本文就核酸适配子在肿瘤诊治中的近期进展综述如下.
关键词： 核酸适配子 指数富集配体系统进化 解离常数 靶向识别/输送/治疗 -
核酸适配子及其在阿尔茨海默病研究中的应用
核酸适配子是一类寡核苷酸分子,它可由指数级富集配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选寡核苷酸文库而获得.适配子通过与靶分子特异结合,可起到识别或抑制靶分子生物学活性的作用.近年来,越来越多的适配子不断被应用于阿尔茨海默病等中枢神经系统疾病的研究.本文将对近年来核酸适配子在阿尔茨海默病诊断和治疗的研究进展作一综述.
关键词： 阿尔茨海默病 核酸适配子 指数级富集配体系统进化 -
SELEX技术及核酸适配子在临床诊断中的应用前景
指数富集配体的系统进化技术是一种新的组合化学技术,它利用人工合成的随机寡核苷酸文库,通过体外多轮筛选与扩增,获得能与靶物质特异性结合的寡核苷酸适配子.适配子的靶分子广泛,与靶物质结合的亲和力高、特异性强,在制备及稳定性等方面优于抗体.基于适配子的生物芯片、生物传感器、分子信标等检测新技术已初步显示出良好的敏感性和特异性,在人类疾病诊断中具有良好的应用前景.
关键词： 指数富集配体的系统进化技术 核酸适配子 诊断 -
壳聚糖纳米微粒荧光探针的制备及特性研究
目的 制备出壳聚糖纳米微粒荧光探针,对其物理特性进行研究,并观察其靶向性及细胞毒性.方法 使用离子交联法制备出壳聚糖纳米微粒荧光探针(chitosan-nanoparticles-fluorescein isothiocyanate,CS-NP-FITC).Zeta粒径分析仪观察其粒径及表面电位情况；扫描电镜观察其形态特点；接着用靶向转化生子因子βⅡ型受体(TGF-β receptor Ⅱ,TβRⅡ)的核酸适配子S58标记CS-NP-FITC,作用于人Tenon's囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs),观察其靶向结合特异性受体的情况；用LDH释放实验检测其细胞毒性.结果 制备出的壳聚糖纳米微粒荧光探针CS-NP-FITC的平均粒径为274.6 nm,平均表面电位为+24.3 mV,扫描电镜下可观察到呈球形的微粒,分布均匀；激光共聚焦显微镜下观察到适配子S58标记的CS-NP-FITC能够与TβRⅡ特异性结合；LDH释放试验证实CS-NP-FITC的使用浓度在0.18～18 mg/mL时,细胞毒性很小,具有良好的生物相容性.结论 壳聚糖纳米微粒荧光探针CS-NP-FITC经适当的适配子或抗体标记后具有靶向结合特异性受体的能力,且细胞毒性小,具有应用于生物成像中的潜力.
关键词： 纳米技术 分子探针 壳聚糖 核酸适配子 转化生子因子βⅡ型受体 Tenon's囊成纤维细胞 -
核酸适配子在IgE检测中的应用
核酸适配子是一类经SELEX技术筛选出来的寡聚核苷酸,其功能与单克隆抗体类似但在诸多方面明显优于抗体,可用于测定靶物质含量等.免疫球蛋白E (immunoglobulin E,IgE)是介导过敏反应的关键因子,IgE定量检测是临床诊断过敏性疾病的重要指标.该文主要综述了核酸适配子在IgE检测中的应用.
关键词： 配体指数级富集系统进化 核酸适配子 IgE -
生物功能化磁性纳米粒子的制备及对内皮祖细胞定向引导的体外研究
采用化学共沉淀法制备由左旋多巴包裹的四氧化三铁磁性纳米粒子,合成磁性纳米粒子之后使用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)活化左旋多巴表面的羧基官能团,与特定的核酸适配子上的氨基发生脱水缩合反应,构建具有核酸适配子与左旋多巴修饰的磁性纳米粒子.通过X射线衍射(XRD)、红外检测(FT-IR)、粒径分析(SEM)、磁性能测定(VSM)等检测方法对磁性纳米粒子制备的各个阶段进行检测,并将改性磁性纳米粒子与内皮祖细胞(EPCs)共混培养,评价磁性纳米粒子的细胞相容性以及磁性纳米粒子与EPCs短时间的结合效果,并在外加磁场的作用下评价改性磁性纳米粒子对EPCs的定向引导效果.结果表明,制备的改性后磁性纳米粒子有良好的磁响应性,并且在一定的浓度范围内有较好的细胞相容性,短时间对EPCs具有较好的结合作用,初步实现了在体外动态环境下对EPCs的定向引导.
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核酸适配子在小分子检测中的应用
核酸适配子是利用配体指数级富集系统进化技术从单链寡核苷酸文库中筛选出的与靶物质有高亲和力和特异性的寡核苷酸,它已成为小分子化合物研究的有效工具,在分析化学领域逐渐成为人们研究的热点.当前已筛选了许多小分子物质特异性适配子,并基于适配子开发了一系列小分子物质检测系统.本文主要对SELEX筛选流程、小分子物质核酸适配子筛选特征与方法以及以核酸适配子为基础开发的电化学法、荧光法、胶体金比色法、酶联适配子免疫法等在小分子物质检测中的应用进行了综述.
关键词： 指数富集配基的系统进化 核酸适配子 小分子检测 筛选流程 适配子传感器
