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一种荧光细胞标准计数样片的制备与应用
目的 制备一种用于自动荧光显微分析系统质量控制的荧光细胞标准计数样片.方法 利用定制的带有黑色方框的载玻片做载体,载玻片表面使用多聚赖氨酸进行防脱处理后,将一定数量荧光标记的人上皮细胞固定在黑色方框内,然后滴加甘油,后在四周添加中性树胶封片剂后盖上盖玻片封存.以此方法制得不同细胞浓度的标准样片,用于自动荧光显微分析系统的准确性、精密度和复现性测试.结果 制备了空白对照、阳性样片A、阳性样片B三种规格的荧光细胞标准计数样片.该系列标准样片经过计量机构检测确认后的结果为真值,用该系列标准样片上机检测,计算得出自动荧光显微分析系统对阳性样片A和阳性样片B的分析准确性分别为98.96％和97.96％;分析精密度分别为1.92％和2.00％;分析复现性误差分别为0.34％和1.33％.结论 设计的荧光细胞标准计数样片性能可靠,可作为自动荧光显微分析系统的成品质控测试工具.
关键词： 荧光细胞标准计数样片 自动荧光显微分析系统 循环肿瘤细胞 荧光标记 质量控制 -
结直肠癌循环肿瘤细胞的研究进展
结直肠癌已成为世界排名第3的常见肿瘤,为引起死亡原因的第4位.结直肠癌早期症状不明显,常被肠道炎症等良性疾病所掩盖,当出现便血等症状就诊时,部分患者已为晚期,并常伴有一个甚至多个器官的远处转移,而远处转移后,器官功能衰竭是导致大多数结直肠癌患者死亡的重要原因.当前,影像学检测及肿瘤标志物都难以早期发现肿瘤生长,因此,建立一种精准、便捷、早期的诊断方法,成为结直肠癌研究领域的热点.本文结合对结直肠癌循环肿瘤细胞(CTC)的新研究进展,对当前CTC的检测方法及在结直肠癌中应用的现状作一综述.
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循环肿瘤细胞检测技术的现状和挑战
肿瘤细胞血道扩散是癌症发展过程中的关键步骤.在上皮源性肿瘤(如乳腺癌、前列腺癌、肺癌和结直肠癌)患者的外周血中检测循环肿瘤细胞拥有很大替力,在过去几年中已经发展起来许多检测技术.然而,循环肿瘤细胞的检测仍然面临技术上的挑战.循环肿瘤细胞的识别需要极其灵敏且特定的分析方法,通常是复杂的富集和检测过程的结合.由于循环肿瘤细胞上皮间质可塑性的存在,阻碍了目前基于上皮标记检测方法的发展.
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肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTC)与D-二聚体、纤维蛋白原及血小板水平的关系研究
目的 研究肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTC)与D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)及血小板水平(PLT)的关系.方法 随机抽取该院于2013年1月—2018年1月收治的100例肺癌患者病例资料进行整理分析,采集患者清晨空腹静脉血,观察并检测外周血中D-D、FIB及PLT水平,并采用免疫磁珠阴性分离及免疫细胞化学染色方法检测CTC的表达,进一步分析CTC与D-D、FIB及PLT水平与肺癌患者临床病理特征的关系.结果 ①100例肺癌患者D-D、FIB及PLT水平平均分别为(1.74±2.06)mg/L、(3.53±1.42)g/L、(311.25±135.69)×109/L,D-D、FIB水平、PLT水平均与肺癌患者远处转移情况有关,差异有统计学意义(t=2.017、3.366、13.044,P=0.023、0.001、0.000).②100例肺癌患者中,CTC阳性55例、CTC阴性45例,CTC阳性患者D-D、FIB及PLT水平分别为(2.32±2.42)mg/L、(3.75±1.45)g/L、(337.69±130.15)×109/L,CTC阴性患者D-D、FIB及PLT水平则分别为(0.94±1.03)mg/L、(3.12±1.24)g/L、(229.35±128.66)×109/L,差异有统计学意义(t=3.568、2.305、4.163,P=0.000、0.012、0.000).③有远处转移患者CTC阳性率(92.86％),无远处转移患者CTC阳性率(53.85％),差异有统计学意义(χ2=7.099,P=0.008).结论 通过观察肺癌患者外周血中CTC指标可准确预测肺癌的远处转移,而机体血液处于高凝状态下易促使肺癌远处转移发生.
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外周血循环肿瘤细胞的研究进展
目的:外周血循环肿瘤细胞(CTCs)在肿瘤预后评估、疗效评价、肿瘤分期、复发转移检测方面具有重要临床价值.CTCs临床应用的研究主要集中于肿瘤早筛、治疗方案及预后评估、基因分析、体外培养.本文针对CTCs检测方法及临床应用进行综述.
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精准医学背景下CTC检测的应用
精准医学是随着科学技术不断发展,人们对健康需求的不断提高,而逐渐兴起的新的医疗理念和模式,主要基于分子病理医学和先进的医学检测技术,通过对患者进行基因组、转录组、蛋白组、表观遗传学、分子影像学和分子病理学检测,结合患者病例病理信息,为患者制定针对个体疾病特征的优化治疗方案,以追求大的治疗效果和低毒副作用.肿瘤精准医学的发展方向之一就是无创诊疗,其中液体活检愈来愈受医疗诊断业界关注,液体活检通过无创方式检测体液(主要为外周血、唾液、尿液、胸腹腔积液等)中的循环肿瘤细胞(CTC)、循环肿瘤DNA(ctDNA)、外泌体(Exsome)等肿瘤来源的生物标志物,动态反应肿瘤的疾病进展,为肿瘤的早期诊断、预后评估、疗效监测、复发转移检测、实时动态监测和个体化诊疗等,为肿瘤诊疗提供了一种简便快捷的手段.
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乳腺癌循环肿瘤细胞检测方法及临床应用
肿瘤早期转移及术后复发成为乳腺癌患者的大威胁,而患者血中检测到循环肿瘤细胞是肿瘤发生微转移的重要依据.目前检测方法基于抗体技术、核酸技术及联合检测等,不同方法有其优点及局限性.
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循环肿瘤细胞在乳腺癌中的检测及其应用价值
循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)被认为与肿瘤复发和远处转移有着密不可分的联系.近年来,CTC在乳腺癌的疗效检测、预后分析、转移复发预测等方面的应用价值已被越来越多的临床数据所证实,其己成为当前乳腺癌预后预测和治疗方面的研究热点.本文对CTC的检测及其在乳腺癌诊断、治疗、预后以及个体化治疗方面的应用和进展综述如下.
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循环肿瘤细胞检测及临床应用价值
循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)作为“液体活检”标志用于肿瘤患者实时动态监测.随着分离、富集和检测技术的发展,已经能够在外周血中检测到单个CTC.近几年来,关于循环肿瘤细胞的研究受到多方关注.已有大量证据提示CTC与预后的关系,此外,对肿瘤微转移早期诊断和分期、疗效监测及个体化医疗更具临床价值.许多针对早期和转移性肿瘤的临床试验将CTC作为监测指标,并联合其他平行试验研究CTC分子特征的临床价值.CTC作为实时监测肿瘤治疗反应的指标广泛应用于临床,为确定肿瘤患者治疗策略提供依据.
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循环肿瘤细胞与肿瘤恶性行为间的关系
转移和复发是恶性肿瘤主要的死因.近年研究发现,外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)可成为判断肿瘤预后的重要指标.在提倡个体化治疗的当下,CTC检测可帮助指导临床设计更有效的治疗方案,从而延长患者寿命,提高患者生存率.本文综述CTCs与肿瘤复发转移的关系和CTCs分离富集检测技术研究进展.
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结直肠癌肝脏转移标志物研究进展
结直肠癌是人类常见消化系统肿瘤,据统计全球每年新增结直肠癌患者一百三十多万例,同时约五十二万患者死于此肿瘤疾病[1].近年来,随着生活水平的提升及饮食结构的改变,我国结直肠癌的发病率逐年升高,新统计报道结直肠癌2008年的发病率位居所有肿瘤的第三位,而死亡率居肿瘤死亡的第五位.城市地区人口中结直肠癌的发病率居于第二位,死亡率位居第四位.
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肝癌患者循环肿瘤细胞的检测及其临床应用研究进展
原发性肝癌发病率和死亡率均较高,其术后转移与复发已经成为影响患者预后的重要因素,临床上迫切需要能够有效预测和防治肝癌转移的检测手段.循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC),作为近些年来新出现的肿瘤检测指标,因其能够实时、无创地监测肿瘤患者的病情状态,在早期诊断、早期治疗,判断预后和制定个体化治疗方案等方面具有重要意义而备受关注.CTC在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、肺癌等疾病的应用已初步得到临床认可.新的研究表明,肝癌患者病情状态与血液中CTC的数量也显示出极强的相关性.目前各种CTC检测体系主要包括富集纯化和鉴定两方面;但由于检测方法繁多,不同方法的敏感性、特异性不同限制了其临床应用.近年来,新的CTC检测方法层见叠出,涌现出了很多新技术用于肝癌CTC的临床研究.本文就其相关研究进展做一综述.
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基于Web of Science的循环肿瘤细胞研究态势的文献计量分析
目的 对循环肿瘤细胞(CTC)研究文献进行计量分析,为准确掌握国际上CTC领域研究态势和选择前沿技术课题提供参考.方法 基于Web of Science数据库,借助CiteSpace等分析工具,采用可视化分析、共现分析、引文分析、突发检测等分析方法,对CTC领域文献的分布特征、核心引文、热点领域、研究前沿等进行分析.结果 在Web of Science共检索出861条循环肿瘤细胞研究文献题录和28 132条引文.分析显示,近年来CTC领域的研究发展迅速,并已成为肿瘤领域的研究热点之一;美国在CTC研究领域占有绝对优势;中国虽然排名第4,但与美国、德国和日本还存在较大差距;挖掘出了CTC领域的20篇核心引文,掌握了目前CTC的主要研究热点和研究前沿.结论 我国亟需进一步加强对CTC的研究,尤其应关注CTC由基础研究向临床研究转化的关键问题,为实现肿瘤的个体化治疗奠定基础.
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胃癌中循环肿瘤细胞及其核型特征与临床分期的相关性
目的 分析循环肿瘤细胞(CTC)在胃癌辅助诊断中的作用及其与胃癌临床病理特征的相关性,探讨其临床意义.方法 纳入98例胃癌患者和38例胃部良性疾病患者,采用阴性富集联合免疫荧光原位杂交(imFISH)检测平台检测患者CTC,分析CTC及其核型特征与临床病理特征的关系.结果 胃癌患者中CTC检出率(CTC≥1)为94.9％,而胃部良性疾病患者中CTC检出率为28.9％,两者差异显著(P＜0.001).ROC曲线显示,当cut-off值定为2个细胞/3.2 ml血时,CT℃在胃癌诊断中的灵敏度为89.8％,特异性为89.5％(AUC=0.945,95％ CI,0.908-0.982,P＜0.001).CTC在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者中的检出率(CTC≥1)分别为84.6％和98％,在T1 ～T2和T3～T4期患者中CTC检出率分别为81.3％和96.7％,在N0、N1～N3患者中CTC检出率分别为81.3％和96.5％,在上述分组中检出率有显著差异(p＜0.05).在性别、年龄、肿瘤分化程度、Her2表达、Ki-67表达及M分期等分组中,CTC阳性率差异不显著.8号染色体多体CTC在Ⅲ～Ⅳ期患者中的阳性率为69.6％,显著高于Ⅰ～Ⅱ期患者(44％,P＜0.05).结论 阴性富集联合imFISH技术在胃癌CTC检测中具有较高的灵敏度和特异性,对于胃癌的辅助诊断和早期检测具有重要意义.同时,CTC总数及8号染色体多体CTC与胃癌TNM分期密切相关,或可用于胃癌分期的辅助判断和预后评估.
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循环肿瘤细胞在肺癌诊断及预后中的应用
肺癌的传统诊断主要依赖于常规病理组织学检查和影像学手段,难以实时监测肿瘤的转移和复发.循环肿瘤细胞(CTCs)作为一种代表原发性肿瘤的“液态活检标本”,有助于实时、无创性地进行组织学鉴定.CTCs的数目与肿瘤发展状况呈正相关.因此,CTCs检测可能成为肺癌早期诊断、监测肿瘤复发与转移的一种重要手段.同时,CTCs也可用于评估肺癌的疗效和预后.CTCs在血液中含量极少,为了使检测的灵敏性达到临床可接受的水平,需先富集再检测,几种检测方法各有利弊,在临床上可以将其联合使用,以期计数结果更为准确.
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不同孔径微孔滤膜富集肿瘤细胞的方法
对不同孔径微孔滤膜富集肿瘤细胞进行研究.分别测定活性K562细胞、固定的K562细胞及血液样本通过孔径为1、3、5、8、10 μm滤膜的滤过率.将固定染色后的K562细胞作为目标细胞,测定不同浓度目标细胞通过1μm及3 μm的时间;选取1～10个目标细胞,分别在未混入细胞、混入5×105个活性K562细胞、混入1×106个活性K562细胞、混入1 mL血液后,通过3μm滤膜过滤测得回收率及阳性率.结果显示:固定的K562细胞不可通过1和3 μm滤膜,1 mL血液样本不可通过1μm滤膜;目标细胞在未混入细胞时回收率为60％ ～70％,混入5×105个活性K562细胞、混入1×106个活性K562细胞及混入1 mL血液后回收率在40％ ～65％之间,当目标细胞数为6个及以上时阳性率为100％.研究表明,对直径大于或与固定K562细胞相差不大的肿瘤细胞的富集,可采用孔径为3μm的聚碳酸酯滤膜.
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联合CK19、hMAM、SBEM检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞及其与分子分型和临床病理特征的相关性分析
目的 分析联合细胞角蛋白19(CK19)、乳珠蛋白(hMAN)、小黏蛋白(SBEM)检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床意义及其与分子分型和临床病理特征的相关性.方法 利用实时定量逆转录聚合酶链反应法对258例乳腺癌患者(研究组)及104例健康体检者(对照组)外周血中CK19、hMAN、SBEM的表达水平进行检测,并分析其与乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞及其与分子分型和临床病理特征的相关性.结果 对照组中CK19、hMAN及SBEM的阳性表达率分别是1.92%、2.88%、2.88%,三个标志物进行联合检测的阳性率为6.73%,研究组中CK19、hMAN及SBEM的阳性表达率分别是33.72%、18.22%、19.38%,三个标志物进行联合检测的阳性率为49.22%,研究组外周血CK19、hMAN及SBEM单独、联合检测的阳性表达率均明显高于对照组(P <0.05).外周血循环肿瘤细胞与乳腺癌患者年龄、月经状态、肿瘤分期均存在显著相关性(P <0.05),而与乳腺癌分子分型并不存在显著相关性(P >0.05).结论 实时定量逆转录聚合酶链反应法CK19、hMAN及SBEM联合检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞有着较高的表达阳性率,并且乳腺癌外周血循环肿瘤细胞与患者年龄、月经状态、肿瘤分期均存在显著相关性,而与其分子分型未见显著相关性.
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胃癌患者外周血Cyttel循环肿瘤细胞检测及临床意义
目的 观察莱尔(Cyttel)检测法检测胃癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTCs)的结果,同时评价检测结果与临床病理特征的关系.方法 前瞻性选择65例胃癌患者(观察组)、50例胃良性疾病患者(对照组)作为研究对象,均于治疗前抽取两组患者的外周静脉血4 ml检测CTCs,检测方法为Cyttel循环肿瘤细胞检测法,对比两组患者CTCs阳性率以及检测结果与胃癌患者临床病理特征的关系.结果 观察组CTCs阳性率(72.31％,47/65)明显高于对照组(8.0％,4/50),差异具有统计学意义(P＜0.05);观察组患者的CTCs与性别、年龄、肿瘤分期、分化程度、淋巴转移与否无关(P＞0.05),但与肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、CA72-4、脉管侵犯有关(P＜0.05).结论 Cyttel循环肿瘤细胞检测法对CTCs的检出率较高;与肿瘤标志物CEA、糖类抗原19-9、CA72-4、脉管内查见癌栓有较高的相关性.
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循环肿瘤细胞研究新进展
恶性肿瘤释放癌细胞进入血液、形成远处转移灶，导致治疗效果差、预后不良。如果在转移灶形成之前能够在血液中发现循环肿瘤细胞（CTCs），则可早期发现转移灶，在治疗期间通过外周 CTCs 检测来观察治疗效果和判断预后。通过检测外周 CTCs 的凋亡和上皮间质转变，以及对循环肿瘤干细胞（CSCs）特性的研究，可以为临床治疗提供有效数据，因此，能否有效地检测出外周血 CTCs 以及研究其特性直接关系到恶性肿瘤的治疗和预后。本文就外周 CTCs 在恶性肿瘤中的研究进展做一综述。
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卵巢癌肿瘤标志物的临床应用及研究进展
卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,其病死率位居妇科恶性肿瘤之首.肿瘤标志物对卵巢癌的早期诊断、疗效监测及预后评估具有重要意义.CA125、HE4是临床上应用广泛的卵巢癌血清肿瘤标志物,但其存在一些不足之处,寻找更加敏感的肿瘤标志物具有重要的意义.近年来,随着二代测序技术的快速发展,循环肿瘤DNA、循环肿瘤细胞及miRNA为卵巢癌肿瘤标志物的临床研究提供了新的思路.
