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KLF2和KLF15基因在hBMSCs定向分化中的动态表达
目的 研究KLF2和KLF15在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成脂、成骨和成肌分化过程中的表达水平及变化趋势,探讨KLF2和KLF15在hBMSCs定向分化过程中可能的作用方式.方法 密度梯度离心法分离hBMSCs,流式细胞仪检测细胞表面标志物,取第4代细胞分别进行成脂、成骨和成肌诱导并以油红O、茜素红及免疫荧光染色进行鉴定.通过实时定量PCR和免疫荧光分别从mRNA水平和蛋白水平检测相关标志物、KLF2、KLF15和GLUT4的表达.结果 体外培养的hBMSCs表达间充质干细胞表面标志CD29、CD90,并在特定诱导剂作用下能够定向分化为脂肪细胞、成骨细胞和成肌细胞,染色鉴定结果为阳性,并分别检测到相关标志基因的表达；hBMSCs成脂、成骨和成肌过程中KLF2、KLF15和CLUT4的表达均呈动态变化.结论 KLF2和KLF15与hBMSCs成脂、成骨和成肌分化的启动和维持有关；KLF2和KLF15可能通过GLUT4凋节能量代谢从而影响hBMSCs定向分化.
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KLF9和 KLF15在维吾尔族网膜脂肪中的表达及其与炎症相关性分析
目的：检测维吾尔族网膜脂肪组织KLF9及KLF15 mRNA表达水平，分析KLF9、KLF15与炎症信号通路关键因子的相关性。方法：选取维吾尔族个体NC组50例、OB组45例，检测一般资料和生化指标。采集网膜脂肪组织，RT-PCR法检测KLF9、KLF15及NF-κB炎症信号通路关键因子mRNA表达水平。结果：OB组BMI、WC、HC、WHR、TG和LDL显著高于NC组，差异有统计学意义（ P＜0.05）。维吾尔族网膜脂肪组织中，OB组NF-κB、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平显著高于NC组（P＜0.05），NF-κB mRNA表达与体重和TG显著正相关（P＜0.05），TNF-αmRNA表达与TG和TC显著正相关（P＜0.05）， IL-6 mRNA表达与HC、TG和LDL显著正相关（ P＜0.05）；OB组网膜脂肪组织KLF15 mRNA表达水平显著低于NC组（ P＜0.05），与BMI、WC、WHR显著负相关（ P＜0.05），与HDL正相关，与TG负相关。 KLF9 mRNA表达水平高于NC组，与NF-κB显著正相关（ P＜0.01），与IL-6正相关。结论：KLF15可能通过调控脂代谢发挥抗炎作用；肥胖状态下脂代谢紊乱可能间接上调KLF9的表达，而KLF9作为转录激活因子可能通过调控下游炎症因子的转录活性，从而促进炎症因子的表达和释放。
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益气化瘀化痰法制剂对CCL4所致肝纤维化大鼠肝组织KLF15、NF-κB及下游炎症因子的影响
目的 观察益气化瘀化痰法制剂对四氯化碳(CCL4)所致肝纤维化大鼠模型的治疗作用及其可能机理.方法 105只雄性SD大鼠,随机选取10只为空白对照组,其余大鼠采用腹腔注射40％ CCL4玉米油溶液联合高脂低蛋白饮食建立肝纤维化大鼠模型,成模后随机分为模型组(10只)、秋水仙碱组、益气组、化瘀组、化痰组及益气化瘀化痰合剂组(各9只),分别给予相应药物制剂灌胃治疗,模型组及空白对照组以等量生理盐水灌胃,连续用药12周后处死大鼠.苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)、天狼猩红(Sirius Red)染色观察肝组织形态学变化,RT-qPCR法检测肝组织KLF15、核因子κB(NF-κB)、白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN mRNA)表达水平,Western Blot检测肝组织NF-κB、IL-1β3蛋白表达水平.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠肝组织大量胶原纤维沉积,纤维化明显;NF-κB、IL-1β、TNF-β、Col-Ⅰ、FN mRNA表达显著上调(P＜0.01),KLF15 mRNA表达显著下调(P＜0.01);NF-κB、IL-1β蛋白表达显著上调(P＜0.05).与模型组相比,各药物干预组肝纤维化程度减轻,NF-κB、IL-1β3、TNF-β、Col-Ⅰ、FN mRNA表达下调(P＜0.05),KLF15 mRNA表达上调(P＜0.05),NF-κB、IL-1β蛋白表达显著下调(P＜0.05),其中益气化瘀化痰合剂组各项指标改善明显(P＜0.05).结论 益气、化瘀、化痰法和秋水仙碱均可以降低肝组织内纤维化程度,改善部分纤维化指标,其作用机制可能与上调肝组织KLF15表达,抑制NF-κB等炎症相关因子的表达有关.其中益气化瘀化痰法合剂优于单法治疗和秋水仙碱治疗.
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KLF15基因对心肌纤维化的抑制作用
目的 探讨心肌成纤维细胞Krüppel样因子15(krüppel-like factor 15,KLF15)在心肌间质纤维化及转归中的作用和分子机制.方法 体外培养大鼠心肌成纤维细胞,建立促心肌成纤维细胞肥大模型,构建干涉和过表达KLF15腺病毒载体并转染,分别进行腺病毒组、空病毒组、对照组、阴性干涉组及干涉组细胞玻片染色观察,Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量及KLF15、TGF-β(transforming growth factor-β)、CTGF (connective tissue growth factor)、MRTF-A(myocardin-related tran-scription factor A)细胞因子蛋白表达水平检测.结果 在该细胞模型实验中,腺病毒组KLF15表达水平明显高于其余各组(P＜0.05),相应的TGF-β、CTGF、MRTF-A表达水平及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量却低(P＜0.05),心肌细胞肥大、纤维化表现显著减轻,而干涉组上述各检测值变化恰与之相反(P＜0.05),有更重的心肌细胞肥大、纤维化表现.结论 KLF15可通过反馈调节TGF-β,抑制CTGF及MRTF-A的作用,减轻心肌间质纤维化及心肌成纤维细胞表型转变,从而改善心功能.
