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肥大细胞源性外来体参与构建针刺穴位效应启动小网络的探讨
外来体是由细胞分泌的囊泡小体,是囊泡运输的常见形式,参与细胞间信息交流.国内外现有研究和本课题组前期工作表明,针刺效应的产生与穴位局部神经、肥大细胞及相关信号分子等因素相关.外来体参与神经细胞信息传递、肥大细胞功能活动、信号分子释放等生理功能.基于外来体与神经、肥大细胞、信号分子的密切关系,我们认为针刺引起穴位局部肥大细胞释放的外来体是针刺穴位初始效应的关键因素之一,在神经-肥大细胞-信号分子的网络联系中具有信使作用.
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卵巢癌细胞株来源的外来体的抗原性初步研究
外来体(Exosomes)是一种直径30～90nm的膜性囊泡,初在网织红细胞中被观察到并命名,后来发现多数细胞可分泌此囊泡,如血小板、B淋巴细胞、细胞毒性T淋巴细胞、树突状细胞(DC)、肥大细胞和一些肿瘤细胞.本研究培养了5种卵巢癌细胞系,试图从培养上清液中分离出外来体,经过免疫电镜和Western blot鉴定其是否携带有肿瘤细胞的特异性抗原,为外来体用于卵巢癌主动免疫治疗提供理论基础.
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肿瘤坏死因子-α对A549肺腺癌细胞外来体诱导抗肿瘤作用的影响
肺癌的发病率及病死率较高,传统的治疗方法如手术、放疗及化疗等毒性及不良反应大,疗效不满意,生物免疫疗法是肺癌治疗的重要手段之一.肿瘤细胞来源的外来体含有肿瘤抗原和共刺激分子,能诱导抗肿瘤免疫反应,但其抗肿瘤疗效有待进一步提高.研究结果显示多种细胞因子能调节外来体的分泌和功能,肿瘤坏死因子( tumor necrosisfactor,TNF)-α是多效性的细胞因子,能抑制肺癌、肾癌及黑色素瘤等多种肿瘤[1],但TNF-α对肺癌细胞外来体有无影响尚不明确.我们研究TNF-α对肺癌细胞来源的外来体诱导抗肿瘤作用的影响,为TNF-α联合外来体疫苗抗肿瘤治疗提供理论基础.
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卵巢上皮性癌患者腹水中外来体的分离和鉴定及临床意义
目的 分离和鉴定卵巢上皮性癌(卵巢癌)患者腹水中的外来体(exosome),并探讨其临床意义.方法 收集2006年3月-2007年3月间收治的41例卵巢癌患者的腹水,通过差速离心联合密度屏障离心法分离腹水中的外来体,分别采用透射电镜和蛋白印迹法对外来体进行形态学和分子标志物鉴定,并回顾性分析卵巢癌患者腹水中出现外来体的临床意义.结果 卵巢癌患者腹水中可成功分离并获得外来体,卵巢癌患者腹水中外来体的阳性率为85%(35/41);其形态具有典型的外来体的形态学特征,且表达外来体的相对特异性分子标志物,其中组织相容性复合物I(MHC-I)阳性率为100%(35/35)、热休克蛋白70(Hsp70)阳性率为91%(32/35)、CD81.阳性率为86%(30/35).不同年龄、病理类型、病理分级、手术病理分期、手术的彻底性、术后血清CA125水平下降满意度、化疗反应的卵巢癌患者腹水中外来体的阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).卵巢癌患者行肿瘤细胞减火术后,腹水中外来体阳性患者血清CA125水平平均下降幅度为(66±27)%,明显高于外来体阴性患者的(37±86)%及卵巢痛患者整体的(61±44)%(P<0.01);且这种差异与手术是否彻底无关(P<0.01).结论 卵巢癌患者腹水中能够分离到典型的外来体.外来体的存在与卵巢癌患者肿瘤细胞减灭术后CA125水平下降幅度有关,但与其预后的关系有待进一步研究.
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外来体对心脏保护作用的研究进展
外来体多数是指心血管系统细胞释放的微小脂质双分子囊泡结构,尽管目前外来体的纯化方法仍存在一定技术挑战,但外来体已被证实具有心脏保护作用,如从血浆中纯化的外来体可激活心脏保护途径,而干细胞释放的外来体有利于改善心血管功能.本文主要综述了心血管系统细胞和干细胞释放的外来体对心脏保护作用的研究进展,以期为心血管疾病的治疗提供新方向.
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微颗粒及外来体在子痫前期发病机制中的作用
子痫前期是一种起源于胎盘、累及全身多脏器的妊娠期特发性疾病.胎盘浅着床导致胎盘缺血缺氧,释放胎盘毒性物质进入母体血液循环并引起全身小动脉痉挛是子痫前期发病的基本过程.过去认为胎彘释放的毒性物质主要是各种氧化应激产物.
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胃癌细胞来源的exosome的提取和鉴定
目的 从胃癌细胞系SGC7901培养上清中分离获得外来体(exosome),并进行形态学观察鉴定.方法 通过低速离心、高速离心、超滤及超高速离心等方法,从SGC7901胃癌细胞培养上清中分离exosome,用透射电子显微镜观察其形态特征,Lorry方法蛋白定量,通过免疫印迹进行主要组织相容性复合体(MHC)分子鉴定.结果 SGC7901胃癌细胞上清中分泌大量的exosome,电镜下观察呈椭圆形或圆形的双层膜的囊泡,直径为30～100nm,具有完整的细胞膜.结论 用离心的方法可从SGC7901胃癌细胞培养上清中提取exosome,有可能作为胃癌免疫治疗的潜在抗原,同时也为研究肿瘤的发病机制提供一个新的途径.
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树突状细胞分泌的exosomes体外诱导特异性CTL抗肾癌的初步研究
目的 提取树突状细胞外来体(DE)分泌的外来体(exosomes),检测其体外刺激同源T细胞活化和诱导特异性细胞毒性T细胞(CTL)抗肾癌769-P的免疫效应.方法 从健康志愿者外周血单个核细胞中诱导培养DE,流式细胞术检测DC的表型;通过超速离心法结合超滤法制备DC分泌的exosomes,透射电镜观察exosomes的形态,MTT法检测DC分泌的exosomes诱导T细胞的增殖和特异性CTL对769-P的体外杀伤活性.结果 超速离心法结合超滤法能从DC上清中分离exosomes,并且肿瘤抗原致敏DC分泌的exosomes能有效促进T细胞的增殖及特异性CTL抗769-P效应,T细胞增殖倍数达(1.68±0.22)%,CTL杀瘤活性为(38.23±2.16)%.结论 抗原致敏DC分泌的exosomes能有效诱导激活具有较强杀瘤活性的肿瘤特异性CTL.
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卵巢癌来源外来体研究新进展
外来体被认为是一种脂质双层结构包裹而成的囊性液泡,直接跨度在30 ～ 100 nm之间,可广泛来源于哺乳动物各类细胞类型,包括淋巴细胞、上皮细胞、内皮细胞和肿瘤细胞等.在真核细胞完整生命周期中,胞内各种囊性结构形成早期内涵体,而以腔内小泡形成为主要形态标志的晚期内涵体形成后,继续吸收胞内各种细胞成分及胞膜碎片,积聚于细胞核周边,通过三磷酸鸟苷酶活化蛋白(guanosinetriphos-phatase activating protein,GAP)的调控释放于胞外[1].长期以来,外来体被单纯地认为是细胞外排胞内垃圾成份的一种途径,然而近年来大量研究表明外来体与细胞间信号传递、肿瘤的发生发展及免疫逃逸等密切相关[1-2].
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骨关节炎软骨细胞源外来体抑制软骨细胞中Ⅱ型胶原合成
目的：探讨正常软骨细胞和骨关节炎软骨细胞外来体分泌量和内含物的差别及不同来源外来体对正常软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响。方法：分离人正常软骨细胞和骨关节炎软骨细胞，检测细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达量和外来体标志物CD9、CD81及外来体内含物TNF-α、MHC I、MHC II的含量；用正常软骨细胞源外来体（200μg/mL）和骨关节炎软骨细胞源外来体（50,100和200μg/mL）处理正常软骨细胞24，48、72和96h，RT-PCR检测细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达量。结果：正常软骨细胞中Ⅱ型胶原mRNA表达量和细胞增殖速率均显著高于骨关节炎软骨细胞（P<0.05）；两种细胞均可分泌外来体，骨关节炎软骨细胞分泌外来体量和外来体内含物含量均显著高于正常软骨细胞（P<0.05）；正常软骨细胞源外来体对正常软骨细胞中Ⅱ型胶原合成无显著影响（P>0.05），骨关节炎软骨细胞源外来体可抑制正常软骨细胞中Ⅱ型胶原合成且抑制作用存在时间和剂量依赖性。结论：骨关节炎软骨细胞分泌外来体量和外来体内含物含量均高于正常软骨细胞，且以时间和剂量依赖性的方式抑制正常软骨细胞中Ⅱ型胶原合成。
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供体来源ImDex联合抗原特异性Treg保护大鼠肝脏移植物的研究
目的:探讨供体来源低剂量未成熟树突状细胞外来体(immature dendritic cells exosome,imDex)联合供体抗原特异型调节性T细胞(regulatoryt cells,Tregs)对于肝脏移植物的保护作用.方法:以BN-＞Lewis大鼠为供受体,建立大鼠原位肝移植模型.利用超高速梯度离心法获得imDex,采用流式细胞术鉴定该imDex的表型.不同剂量imDex用于本移植模型,生存分析探究其对肝脏移植物的保护作用及该作用与剂量的相关关系.利用磁珠分选技术获得Treg,混合淋巴细胞培养获得供体抗原特异性Treg,将不同性质的Treg用于移植受体,验证抗原特异性Treg保护肝脏移植物.进一步探究两者联合使用的效果,应用免疫荧光、流式细胞术研究Treg在移植受体中的分布.结果:超高速梯度离心法分选出的imDex具有imDC表型,其保护肝脏移植物的佳作用剂量为20 μg,Treg发挥保护移植物作用具有抗原特异性.两者联合应用组生存时间长于对照组(P＜0.05).病理显示,输注的Treg分布于受体移植物.结论:ImDex联合抗原特异性Treg可以有效保护大鼠肝脏移植物.
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胞外囊泡的分离与纯化
胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)的定义及临床研究价值一、EVs的定义EVs是一种由细胞来源的脂质双分子层包绕的球状膜性结构,包括通常所说的微泡和外来体.EVs是一组直径介于40～5 000 nm间的囊泡状小体,多种细胞均可向其生存的微环境中分泌EVs[1-2].EVs可携带多种生物活性物质,如蛋白酶、各种生长因子及受体、组蛋白、mRNA、miRNA及起源细胞的分子标志等,并把这些生物活性物质由起源细胞转移至靶细胞[3].
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外来体在肿瘤免疫治疗中的研究进展
外来体的特征、来源与功能外来体(exosomes,EXO)是细胞内多囊泡体(multivesi cular bodies,MVBs)膜内陷形成,并与细胞膜融合,分泌到胞外的膜性囊泡状小体.一般认为EXO的特征为被膜是脂质双分子层、直径为50～100nm、在密度梯度蔗糖溶液中浮选密度为1.13～1.21g/mL以及其胞质溶胶内或定位于膜上的各种蛋白的成分[1].
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真核细胞tRNA的降解
tRNA在蛋白质合成过程中起着关键性的作用,不但为三联密码子翻译成氨基酸提供了接合体,而且为将氨基酸运送到核糖体提供了运送载体.在真核细胞中,tRNA前体必须经过广泛的加工修饰,成为成熟的tRNA分子才能充分发挥生物学功能.以往对tRNA的研究主要集中于tRNA的结构、功能、加工和成熟上,却很少关注tRNA分子的降解.近研究发现tRNA的降解在tRNA的生成、加工和功能发挥上同样起着重要作用.
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多功能Exosome在卵巢癌靶向治疗中的作用及临床意义
目的 探讨构建多功能外来体(Exosome)用于卵巢癌靶向治疗的应用价值.方法 选用BALB/c小鼠未成熟树突状细胞(DC)作为Exosome供体细胞,转染表达肿瘤靶向肽iRGD的融合蛋白质粒,构建具有肿瘤靶向性的iRGD-Exos,观察其与NuTu-19肿瘤细胞的相互作用,同时利用电穿孔方法将阿霉素(Dox)负载到iRGD-Exos中,构建iRGD-Exos-Dox,选取30只BALB/c小鼠,随机分为PBS组、Exosome组、Dox组、blank-Exos-Dox组和iRGD-Exos-Dox组,每组6只,观察各组小鼠体内肿瘤生长情况.结果 与blank-Exos相比,iRGD-Exos在肿瘤细胞膜上定位更快,膜融合程度更明显;iRGD-Exos与肿瘤细胞结合率为(95.41±12.43)%,明显高于blank-Exos,差异有统计学意义(P<0.05);iRGD-Exos在注射后0.5 h内迅速出现在肿瘤组织部位,在2 h达到高值,持续8 h后代谢完全,而blank-Exos注射后未出现在肿瘤组织部位;iRGD-Exos-Dox组小鼠肿瘤体积为(0.561±0.132)cm3,明显小于PBS组、Exosome组、Dox组和blank-Exos-Dox组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 构建多功能Exosome在抗肿瘤治疗中有较好的应用前景,具有较好的肿瘤靶向性.
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人脐血树突状细胞分泌外来体的特性及其增强CTL杀伤活性的研究
目的:探讨脐血树突状细胞(UBDC)及其分泌的亚细胞结构外来体(exosomes)的特性,以及他们对细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性的增强作用.方法:分离脐血单个核细胞(UBMC),用rhSCF、rhGM-CSF及rhIL-4诱导12 d,加入经反复冻融提取的肿瘤细胞膜抗原,继续培养2 d.收集DC并从其培养上清中通过离心(1×105 g)分离外来体.用流式细胞术、SDS-PAGE、透射电子显微镜(TEM)和MTT比色法,对DC和外来体的特性及其对CTL杀伤活性的增强作用进行分析.结果:用3种细胞因子体外诱导UBMC 12 d,可使其扩增10倍,并出现DC典型的形态特征.负载肿瘤抗原后,细胞表面可高表达MHC-I、MHC-II、CD40、CD80、CD86、CD11c和CD54.利用超速离心法能从DC培养上清中分离出外来体.混合淋巴细胞反应(MLR)和CTL杀伤活性的分析表明,脐血DC分泌的外来体能有效地刺激T细胞增殖并增强CTL的杀伤活性.结论:由UBMC可诱导出大量的DC并分泌外来体.后者可有效地向CTL细胞递呈肿瘤抗原使之活化并增强其杀伤活性.
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HBsAg与恒定链融合基因真核表达载体的构建及鉴定
我国是乙型病毒肝炎的高发国家,约有1.2亿有HBV携带者,而原发性肝癌中90%的患者有HBV感染[1].研究者发现,72.7%的肝癌旁组织及45%的肝癌组织中可检出HBsAg,故其可作为肝炎后肝癌患者免疫治疗的相对特异的"肿瘤相关分子"[2].
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腹水中外来体的提取及形态特征观察
目的: 从卵巢癌患者的腹水中获得外来体(exosome).方法: 通过低速离心、高速离心、超滤及超高速离心等,从5例卵巢癌患者的腹水中分离外来体,用透射电子显微镜观察其形态特征.结果: 5例卵巢癌患者的腹水中均存在外来体,电镜下观察呈椭圆形或圆形囊泡,直径为30～90 nm, 具有完整的细胞膜.结论: 用离心的方法可从卵巢癌患者的腹水中提取外来体,为卵巢癌的治疗开辟了一种新的途径.
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外来体源性 miRNA 在恶性肿瘤中的研究进展
外来体（exosomes）是由细胞内多泡体与细胞膜融合后，释放到细胞外的一种直径约30-100nm 的膜性囊泡。外来体广泛存在于血清、尿液、乳液、唾液等细胞外液体中。而 miRNA 则是一类内源性非编码小分子 RNA，通过与靶 mRNA 特异的碱基配对，引起靶 mRNA 翻译抑制，从而在转录后水平调节基因的表达。外来体中含有各种蛋白质、miRNA 以及 mRNA，并能将其携带的 miRNA 递送至受体细胞而发挥生物学作用。近年来，关于外来体源性 miRNA 可作为新的肿瘤标志物、参与细胞间信息传递及作为肿瘤靶向治疗等方面的研究成为热点，本文主要对外周血中的外来体源性 miRNA 在恶性肿瘤中的研究进展进行综述。
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外来体与肿瘤免疫治疗研究进展
细胞可以向其周围释放含有受体的蛋白与其它细胞联系,但是细胞也可以分泌更复杂的结构:镶嵌跨膜蛋白的脂质双分子的囊泡结构.外来体(exosomes)是由多种真核细胞内多泡体(Microvesicular body,MVB)与细胞膜融合后释放到细胞外基质中的一种膜性囊泡,是20年前人们在研究网织红细胞时发现的,近人们把注意力转向其特殊的免疫功能.外来体具有独特的蛋白质和脂质成分,可能参与了免疫细胞间物质传递,可以将肿瘤抗原递呈给T细胞,引发肿瘤抗原特异性细胞免疫反应,在体内外具有重要的免疫调节作用,外来体为非细胞成分,而且可以有效的发挥免疫刺激作用和抗肿瘤免疫[1],在本文中我们外来体的免疫性能的研究和近潜在的免疫治疗价值,特别是外来体在肿瘤免疫治疗现状作一综述.
