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人卵泡液抑制素B的分离与鉴定
目的 探讨人卵泡液抑制素B(INH-B)的分离纯化方法. 方法 收集25例育龄期女性成熟卵泡液,分别用乙腈、丙酮、乙醇3种试剂处理样品,富集低丰度蛋白,经蛋白浓度测定和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,比较3种方法对高丰度蛋白去除效果.再通过二乙基氨乙基(DEAE)阴离子交换柱和蛋白质等电点分离法分离目的蛋白. 结果 采用乙腈沉淀法能去除卵泡液样品中约88.7％的高丰度蛋白.并用乙腈富集、阴离子交换柱分离、等电点分离的“三步分离法”分离人卵泡液后,INH-B蛋白回收率为38.7％,等电点为4.55. 结论 乙腈沉淀法是一种较为有效的去除样品中高丰度蛋白、富集低丰度蛋白的方法.乙腈富集、阴离子交换柱分离、等电点分离的“三步分离法”能初步纯化获得人体天然INH-B蛋白分子粗制品,纯化回收率达38.70％.
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中药水煎煮液分离、纯化工艺的比较研究
目的:对中药水煎液的常用精制方法进行比较研究,以评价各种方法的优劣.方法:用醇沉法、超滤法、澄清剂法、大孔树脂法分别对淫羊藿、黄芩汤等单味药和复方的水提液进行分离、纯化,并用HPLC及其他方法对其单味药和复方中的指标成分及多糖、蛋白质进行定量测定和定性鉴别.结果:4种分离纯化技术各有其优点.结论:需根据临床治疗的需要、药物的化学成分及所需制备剂型的要求选择不同的分离和纯化方法.
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分子印迹技术在生物医学分析研究中的进展
分子印迹技术是一种人工合成具有分子识别功能介质的一种新技术,从20世纪70年代开始,随着Wulff和Mosbach等在分子印迹技术领域的开拓性工作,此技术得到了蓬勃发展.分子印迹聚合物(MIP)以其通用性和惊人的立体识别性,愈来愈受到人们的青睐.现在,以MIP为基质,进行生物物质分析、检测、分离与纯化所涉及的范围很广,可用于氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、维生素、药物等领域,且伴随研究的进一步深入,应用领域不断拓宽.
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机械化分离成人胰岛的研究
分离出高数量、高活性的胰岛是保障成人胰岛移植成功的关键环节[1].目前广泛采用的纯手工方法进行成人胰岛的分离与纯化所获得的胰岛并不能达到临床移植的要求.本实验通过采用机械化方法成功地进行了8例成人胰岛的分离、纯化,并显著提高了成人胰岛质量,为下一步运用于胰岛临床移植提供了有力的保障.
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制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与纯化豚鼠内耳抗原
粗制内耳抗原(crude inner ear antigen，CIEAg)广泛用于自身免疫性内耳病（autoimmune inner ear disease，AIED）的研究，包括建立动物模型和作为抗原检测AIED患者血清自身抗体［1，2］。但CIEAg成分复杂，其中何种亚组份起关键作用尚不清楚。我们通过制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳（preparative polyacry-lamide gel electrophoresis，简称制备性PAGE）分离纯化豚鼠CIEAg的主要亚组份，为深入研究AIED的发病机制和寻找内耳特异性抗原奠定基础。 一、材料和方法 1.豚鼠CIEAg的制备：取200～300 g耳廓反射正常的豚鼠(华中科技大学同济医学院实验动物部提供)，参照肖红俊等［3］报道的方法提取。考马斯亮蓝G-250法测定其浓度。 2. 凝胶电泳方法：①分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳(analytical polyacrylamide gel electrophoresis，以下简称分析性PAGE)凝胶厚1.25 mm，浓缩胶和分离胶的浓度分别为4%和10%；加样量为4～32 μg，蛋白质分子量标准加样20或40 μg；样品进入分离胶前恒电流10 mA，进入分离胶后恒电流20 mA，15℃恒温电泳；常规考马斯亮蓝R-250染色和脱色，并对脱色后凝胶进行薄层扫描；②制备性PAGE 凝胶厚3 mm，加样量为2～3 mg；样品进入分离胶前恒电流40 mA，进入分离胶后恒电流50 mA，15℃恒温电泳；电泳结束后，快速考马斯亮蓝R-250染色液加温染色40～50 min，然后在含有5%甲醇、10%冰乙酸的脱色液中加温脱色10 min左右［4］，其余同①；③制备性PAGE和分离亚组份的回收电泳同②；电泳结束后自板胶的中央纵向切下宽1 cm左右的窄带，进行快速染色和脱色。将染色后的凝胶条用蒸馏水冲洗后复位，根据染色凝胶蛋白区带的位置，从未染色的凝胶上切下主要蛋白区带冰浴匀浆。-50℃保存备用。
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利用大孔树脂从葛根中分离纯化总黄酮
目的筛选分离葛根总黄酮的佳树脂,并对影响分离的各种因素进行系统的研究,使纯化工艺达到优.方法采用静态与动态的吸附-解吸两种方法,利用紫外可见分光光度计测量葛根总黄酮的含量,研究不同大孔吸附树脂及其不同的工艺条件对总黄酮分离纯化的影响.结果SP70分离效果好,其佳工艺为药液浓度0.5 g·mL-1(相当于原生药)、pH为5-6、以2 BV·h-1速率进行上样,上样量为60BV,以5 BV的70%乙醇、2 BV·h-1的流速进行洗脱,效果佳.经SP70处理后的葛根总黄酮的含量可达80%以上.结论大孔吸附树脂SP70分离纯化总黄酮效果较好,适合工业生产.
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超滤法分离与纯化香菇多糖
香菇Lentinus edodes(Berk.)Sing.是一种食药用菌,其主要药用成分为香菇多糖,含量约为12.8 mg/g[1].相对分子质量为400 000～800 000的香菇多糖具有抗癌活性,通过调节胞质分裂增强身体免疫系统功能[2].而且香菇多糖还对艾滋病有一定疗效[3]
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高速逆流色谱应用于黄酮类成分分离与纯化研究进展
高速逆流色谱(HSCCC)是一项无固体载体即一种连续高效的新型液-液分配色谱技术,主要利用化合物在溶剂系统中分配系数的差异达到分离目的,在化合物分离以及单体制备等方面有广泛运用.综述了近年来高速逆流色谱技术在分离纯化黄酮苷元和黄酮苷类化合物中的应用,包括高速逆流色谱技术分离纯化已知和未知天然产物黄酮类成分、筛选黄酮活性成分,为今后高速逆流色谱在分离黄酮类化合物中的应用提供借鉴.
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大孔树脂富集纯化狭基线纹香茶菜总三萜酸工艺研究
目的:研究AB-8型大孔树脂富集、纯化狭基线纹香茶菜总三萜酸的工艺条件及参数.方法:以狭基线纹香茶菜总三萜酸的洗脱率和精制度为指标,考察大孔树脂富集、纯化狭基线纹香茶菜总三萜酸的吸附性能和洗脱参数.结果:狭基线纹香茶菜样品液20 mL(0.5 s/mL)上大孔树脂柱(D15 mm×H120 mm,干重10 g),用蒸馏水200 mL、60%乙醇80mL、90%乙醇160 mL依次洗脱,狭基线纹香茶菜总三萜酸富集于90%乙醇洗脱液部分,且除杂质能力强.通过大孔树脂富集与纯化后的狭基线纹香茶菜总三萜酸洗脱率达93.2%,90%乙醇洗脱液干燥后总固物中狭基线纹香茶菜总三萜酸纯度可达21.0%.结论:采用此法可较好地纯化狭基线纹香茶菜总三萜酸.
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胞外囊泡的分离与纯化
胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)的定义及临床研究价值一、EVs的定义EVs是一种由细胞来源的脂质双分子层包绕的球状膜性结构,包括通常所说的微泡和外来体.EVs是一组直径介于40～5 000 nm间的囊泡状小体,多种细胞均可向其生存的微环境中分泌EVs[1-2].EVs可携带多种生物活性物质,如蛋白酶、各种生长因子及受体、组蛋白、mRNA、miRNA及起源细胞的分子标志等,并把这些生物活性物质由起源细胞转移至靶细胞[3].
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蛇莓乙酸乙酯萃取物的化学成分
目的:研究蛇莓乙酸乙酯萃取物的化学成分.方法:以95%乙醇回流提取,对提取液的乙酸乙酯萃取物采用正相硅胶、反相硅胶、Sephadex LH-20柱色谱和高效液相色谱进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的化学结构.结果:分离得到13个化合物,分别鉴定为蔷薇酸(1),arjunic acid(2),对羟基桂皮酸(3).芹菜素(4),山柰酚(5),2α-羟基乌苏酸(6),2α-羟基齐墩果酸(7),委陵菜酸(8),刺梨苷(9),翻白叶苷A(10),野蔷薇苷(11),紫云英苷(12)和异槲皮苷(13).结论:化合物2～5、10、12均为首次从蛇莓属中分离得到.
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脐血CD34+细胞的分离与纯化
脐血造血干细胞的分离是进行干细胞移植、体外扩增培养的关键.研究采用明胶自然沉降法、Ficoll分层法分离脐血MNC后,用MACS分离纯化CD34+细胞,计数并用流式细胞仪进行纯度分析.结果 显示:每份脐血的采集量平均为95+52ml,3g/dl明胶自然沉降法所获MNC密度平均为(5.76±0.67)×107/ml;CD34+细胞密度平均为(5.53±1.16)×105/ml,较Ficoll分层法高(P＜0.01).因此,3g/dl明胶自然沉降法是一种较理想的分离MNC的方法,用明胶沉降法和MACS相结合是分离脐血 CD34+细胞的理想方法.
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NOD小鼠胰岛分离与纯化的方法研究
目的:研究非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠胰岛分离与纯化的方法.方法:采用改良的胰导管逆行灌注胶原酶静止消化胰腺,分离成年NOD小鼠胰岛,不连续密度梯度Ficoll液(25%,23%,20.5%,11%)离心、纯化胰岛.用双硫棕(Dithizone, DTZ)对胰岛进行特异性染色,以葡萄糖刺激胰岛素释放检测胰岛功能.结果:不同浓度(0.5mg*ml-1,1mg*ml-1,2mg*ml-1)的胶原酶在不同时间(20min,40min,60min)内静止消化胰腺后收获的胰岛数量和胰岛活性不同,采用1mg*ml-1浓度的Ⅺ型胶原酶消化40min后效果好,平均能得到(195±8)个胰岛/胰腺,活性>90%,纯度>90%.DTZ染色后胰岛呈红色,形态完整.高糖刺激后胰岛素释放量为低糖刺激后的2倍.结论:改良的胰导管逆行灌注胶原酶静止消化NOD鼠胰腺,及不连续密度梯度Ficoll液纯化胰岛的方法,可获得数量较多,纯度较高和功能较好的胰岛.
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一种简易高效建立小鼠胰岛移植模型的方法
目的 探索一种简便高效建立小鼠胰岛移植模型的方法.方法 摘取4只C57BL/6小鼠的胰腺,0.25 mm penfine针对胰腺反复多点注射胶原酶P后静止消化20 min;采用自制的推进式离心管,以单一密度梯度Ficoll液(1.088 g/ml)纯化胰腺消化物,双硫腙对胰岛进行特异性染色,利用胰岛素释放试验检测胰岛细胞的功能;纯化后的胰岛移植到实验性糖尿病BALB/c小鼠的肾包囊下,术后观察其血糖变化.结果 纯化后共得到(789.6±26.4)个胰岛细胞当量(IEQ),平均纯度为(77.12±3.23)%;胰岛细胞对胰岛素释放刺激反应良好,高糖时胰岛素的释放量为低糖时的2.35倍(P＜0.01).移植后可逆转糖尿病小鼠的高血糖平均达(16.3±2.9)d.结论 提供了快速获取小鼠胰岛细胞的方法,为胰岛移植的实验研究建立了一种简易高效的制作动物模型的方法.
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嗜酸性粒细胞的分离与纯化
以往关于嗜酸性粒细胞分离与纯化的有关资料介绍得比较简单,实验中往往分离不到理想纯度和活性的嗜酸性粒细胞.我们用Percoll不连续密度梯度离心法[1]提取嗜酸性粒细胞,效果满意,现介绍如下.
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核酸分离与纯化的原理及其方法学进展
核酸的分离与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术.随着分子生物学技术广泛应用于生物学、医学及其相关等领域,核酸的分离与纯化技术也得到进一步发展.各种新方法、经完善后的传统经典方法以及商品试剂方法的不断出现,极大地推动了分子生物学的发展.现就核酸分离与纯化的原理及其方法学进展作一综述.
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溶剂结晶法纯化头孢菌素C钠盐
目的比较不同溶剂法结晶纯化头孢菌素C钠盐收率和质量.方法用HPLC、ESEM等检测方法检测头孢菌素C钠盐的纯度和晶型.结果用无水乙醇、丙酮、异丙醇三种溶剂所得的头孢菌素C钠盐指标均达到国内厂家内控检测标准,超过国外同类产品指标;其中以丙酮结晶法收率较高,乙醇结晶法纯度高,晶型好.结论丙酮结晶法成本较低,为厂家选择结晶工艺提供参考.
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突出腰椎间盘胶原的定量研究
①目的探讨椎间盘中胶原的变化与腰椎间盘突出症的关系.②方法利用溴化氰(CNBR)消化椎间盘胶原产生多肽的方法,借助于梯度层析和氨基酸分析对突出和正常椎间盘胶原对比分析.③结果突出椎间盘纤维环Ⅰ型与Ⅱ型胶原比值较正常纤维环高(t=7.93,P<0.01),突出髓核中出现Ⅰ型胶原,而Ⅱ型胶原相对含量无明显变化(t=0.31,P>0.05).④结论椎间盘胶原的变化为腰椎间盘突出症的重要病理基础之一.
