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高速逆流色谱法对补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的分离纯化研究
补骨脂素和异补骨脂素是中药补骨脂的特征成分,含量较高且具有多种生物活性,目前已成为补骨脂及其产品的质量控制成分.本文以补骨脂干燥成熟果实为原料,经乙醇回流制备补骨脂粗提物,率先采用高速逆流色谱技术进行分离,所得样品由高效液相色谱检测纯度,并由对照品确定成分.实验结果表明:采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7:3:5:5)作为两相溶剂体系,经一步逆流分离可以从补骨脂粗提物中分离得到补骨脂素和异补骨脂素,二者纯度分别达到99.4%、99.1%.该法具有制备量大、分离效率高等优点.
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应用高速逆流色谱分离连翘中连翘苷
目的:应用高速逆流色谱技术从连翘药材提取物中分离得到连翘苷.方法:采用两相溶剂系统,四氯化碳-氯仿-甲醇-水的四元体系,上相为固定相,下相为流动相；仪器转速为900rpm,流速为1.2mL· min-1.结果:经过ESI-MS和1H-NMR的鉴定,确认为连翘苷单体化合物,外标法测定纯度为98.8％.结论:本方法可以用于分离制备连翘苷单体.
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应用高速逆流色谱技术从延胡索中分离制备延胡索乙素
利用高速逆流色谱技术,一次进柱过程即可从延胡索粗提物中分离到活性成分延胡索乙素.两相溶剂系统用石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水四元系统,上相为固定相,下相为流动相,转速为850r/min,流速为1.2ml/min.通过EI-MS和1H-NMR鉴定,基本确认了其化学结构.经HPLC分析,纯度达96.4%.
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应用高速逆流色谱技术从附子中分离制备苯甲酰新乌头原碱
利用高速逆流色谱技术,一次进柱即可实现从附子粗提物中分离得到苯甲酰新乌头原碱.两相溶剂系统用氯仿-甲醇-0.3mol/L盐酸三元系统,上相为固定相,下相为流动相,转速为892rpm,流速为1.2ml/min.通过ESI-MS,13C-NMR、1H-NMR鉴定,确认了其化学结构.经HPLC分析,纯度达98%以上.
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高速逆流色谱快速分离山竹子素的制备方法实验研究
目的:制备山竹子素(garcinol)化学对照品.方法:采用高速逆流色谱法,从多花山竹子、山木瓜、大叶藤黄三种藤黄属植物粗提物中快速分离化合物garcinol,溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-95％乙醇-水(8:8:12∶4,体积比),上相做固定相,下相做流动相,仪器转速850 rpm,温度25℃,检测波长254 nm,目标化合物馏分经Sephadex LH-20凝胶柱柱色谱纯化,所得样品由高效液相色谱法检测纯度.结果:可从104.765 g多花山竹子枝、105.270 g山木瓜枝、102.318 g大叶藤黄果实中分离得到garcinol的量分别为45 mg、281 mg、4080 mg,纯度分别为98.72％、98.36％、98.42％.结论:通过对比三种植物样品处理方法,结果以大叶藤黄果实作为原料时,正己烷-乙酸乙酯-95％乙醇-水(5∶5∶5∶5,体积比)萃取的上相浸膏,经高速逆流色谱法结合凝胶柱柱色谱法,可快速高效、大量制备化合物garcinol.实验表明该方法效率高,可操作性强,制备量大.
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高速逆流色谱在快速筛选中药天然产物活性成分中的应用
高速逆流色谱结合快速生物活性检测方法,特别适合从中药和天然产物中筛选活性成分.结合本课题组的研究和近年研究进展,本文综述了高速逆流色谱在中药和天然产物中快速筛选活性成分的应用进展.
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白鲜皮中白鲜碱的分离及抗炎活性
目的:提取分离白鲜碱单体,对白鲜皮醇提物及白鲜碱单体进行抗炎效果检测.方法:采用高速逆流色谱分离的方法分离得到白鲜碱单体；利用小鼠耳廓肿胀及小鼠腹腔毛细血管渗透性实验确定待试物抗炎活性.结果:选择正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(1∶1∶1∶1)溶剂系统对白鲜皮醇提物进行分离,经HPLC检测,所分离白鲜碱纯度达98％.白鲜皮粗提物的各剂量组可显著抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀,抑制率分别为44.26％,52.46％,44.26％,差异显著(P＜0.05)；白鲜碱中剂量组对小鼠耳廓肿胀亦有抑制作用,抑制率为25.00％,且差异显著(P＜0.01)；但在抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管渗透性增高方面,低剂量组效果不明显.结论:高速逆流色谱分离白鲜碱,简单快速易于操作,且具有较好的分离效果；白鲜皮醇提物及白鲜碱单体具有很好的抗炎作用,不同抗炎模型对抗炎效果表现出一定的差异性.
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延胡索中生物碱成分的研究
目的:建立高速逆流色谱结合半制备高效液相色谱法分离纯化延胡索中生物碱的方法.方法:延胡索生物碱经高速逆流色谱法分离,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶3∶3∶2)为溶剂系统,上样量300 mg,得到1个混合物和2个生物碱单体.混合物再以半制备高效液相色谱分离,得到2个生物碱单体,所得产物采用ESI-MS,NMR进行结构鉴定.结果:分离得到4个高纯度的生物碱单体:海罂粟碱(125 mg,1)、四氢巴马亭(40.5 mg,2)、d-紫堇碱(23.5 mg,3)、四氢小檗碱(10 mg,4),其纯度分别为96.5％,97.54％,98.3％,97.3％.结论:HSCCC结合半制备高效液相色谱是一种有效的分离制备延胡索生物碱的方法.
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高速逆流色谱结合大孔树脂从龙胆中快速分离高纯度龙胆苦苷
目的:建立龙胆中高纯度龙胆苦苷的快速分离制备方法.方法:药材醇提取液经D101大孔吸附树脂柱的层析物直接进行高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography,HSCCC)分离纯化,以醋酸乙酯-正丁醇-水(2:1:3)为溶剂系统,下相为流动相,流速1.5 mL·min-1,检测波长254 nm,分离温度30℃,所得产物经高效液相色谱与质谱分析检测,并与标准品对照.结果:在此条件下,经一步分离从300 mg粗提物中得到136 mg纯度为99.6%的龙胆苦苷.结论:该法简便、快速、所得产物纯度高,适合于龙胆苦苷标准品的制备.
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高速逆流色谱分离制备菊苣酸单体
菊苣酸(cichoric acid)是紫锥菊植物中的主要活性成分,为咖啡酸衍生物,具有增强免疫功能,抗炎作用并能抑制透明质酸酶,保护胶原蛋白Ⅲ免受可导致降解的自由基的影响.近来的研究还表明,菊苣酸具有抑制HIV-1和HIV-1整合酶的作用.然而在紫锥菊天然植物中菊苣酸的含量却很低,而且存在着大量的其他成分的干扰物[1-2].
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黄花乌头中Hetisine型生物碱的高速逆流色谱分离与结构鉴定
目的研究黄花乌头块根的化学成分,寻找更多天然活性物质.方法采用高速逆流色谱法分离纯化黄花乌头块根中的生物碱类化学成分,根据理化性质、波谱学分析鉴定化合物的结构.结果高速逆流色谱的两相溶剂分离系统采用氯仿-甲醇-0.2 mol·L-1HCl(体积比为10:3:3),从黄花乌头块根中一次性分离得到8个化合物,分别鉴定为2α-propionyl-11α,13β-diacetyl-14-hydroxyhetisine(Ⅰ)、关附已素(Ⅱ)、关附庚素(Ⅲ)、关附己素(Ⅳ)、关附Z素(Ⅴ)、关附辰素(Ⅵ)、关附甲素(Ⅶ)、关附壬素(Ⅷ).结论化合物Ⅰ为新化合物,命名为关附未素(Guanfu base R).
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高速逆流色谱结合电喷雾多级串联质谱方法高效分离制备、鉴定五味子木脂素类成分
应用高速逆流色谱技术(HSCCC)从北五味子粗提物中快速分离制备木脂素类成分.采用两种溶剂系统进行洗脱,溶剂系统分别为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(9∶1∶5∶5)及正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(9∶1∶9∶5),转速900 r·min-1,流速为2.0 mL·min-1,从五味子粗提物一次分离制备出5种单体成分.利用电喷雾多级串联质谱技术(ESI-MSn)及超高效液相色谱技术(UPLC)对高速逆流色谱分离产物进行结构鉴定及纯度分析.5种单体成分分别为五味子醇甲、戈米辛J、五味子醇乙、五味子酯甲和五味子甲素,纯度分别为98.74％、94.32％、99.53％、94.23％和98.68％.该方法快速、简便,分离效率高,适用于五味子木脂素类成分的制备.
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抗生素新药研发中分析分离的3种方法
从发酵液中分离纯化抗生素,是抗生素新药研发的难点.目前已发展毛细管电泳法、高速逆流色谱法和反相高效液相色谱法这3种较有优势的分离技术,它们都可以简单、快速、高效的分离出结构上相似的不同抗生素,从而广泛应用于抗生素新药开发中的药理研究和血药浓度测定.现对这3种方法在抗生素分离分析中的应用进行综述.
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高速逆流色谱法提纯盐酸黄连素对粪肠球菌抑菌效果的研究
目的 探讨高速逆流色谱法(HSCCC)提纯黄连中盐酸黄连素对粪肠球菌体外抑菌效果的影响.方法 选择150株临床分离的粪肠球菌株为研究对象,随机分为Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组各50株,均配制成2000～3000 cfu/ml的粪肠球菌液；将黄连制成中药煎剂,配制成浓度为1.0 g/ml的A药液；将HSCCC提纯黄连中的盐酸黄连素配制成浓度为1.0 g/ml的B药液；Ⅰ组将粪肠球菌液涂到用A药液与M-H培养基混合的培养基上,Ⅱ组将粪肠球菌液涂到用B药液与M-H培养基混合的药液培养基上,Ⅲ组将粪肠球菌液涂到M-H培养基上,上述培养基均采用环丙沙星(CIP)、红霉素(ERY)、四环素(TE)和青霉素(PEN)药敏纸观察培养基药敏情况.结果 Ⅰ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为26.0％、40.0％、36.0％、20.0％；Ⅱ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为10.0％、26.0％、14.0％、8.0％；Ⅲ组中CIP、ERY、TE和PEN的耐药率分别为46.0％、80.0％、44.0％、26.0％.在对环丙沙星、红霉素、四环素和青霉素的耐药率方面,Ⅲ组＞Ⅰ组＞Ⅱ组,三组间耐药率差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HSCCC提纯黄连中盐酸黄连素对临床分离的粪肠球菌菌株具有较强的抑菌活性,其抑菌作用比黄连煎剂强.
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高速逆流色谱法分离制备蛹虫草发酵液中虫草素
目的 以蛹虫草发酵液虫草素粗提物为原料,对高速逆流色谱(HSCCC)分离制备虫草素条件进行研究.方法 利用HPLC测定分配系数法结合分析型HSCCC对分离虫草素的溶剂体系进行筛选,确定虫草素分离的佳溶剂体系为醋酸乙酯-正丁醇-0.5％氨水(2∶3∶5),并运用此溶剂体系,上相作为固定相,下相作为流动相,利用制备型HSCCC分离制备蛹虫草发酵液中虫草素.结果 400 mg虫草素粗产品通过制备型HSCCC一次分离制备获得质量分数为98.7％的虫草素产品43.8 mg.结论 该法效率高,操作简单,为虫草素的大量制备提供了重要参考.
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苦参生物碱的高速逆流色谱法制备研究--色谱参数和仪器参数的佳化
应用新型的液液分配技术--高速逆流色谱法(High Speed Counter-current Chromatography,HSCCC)对苦参生物碱类成分的分离制备进行探讨.选用氯仿-磷酸-磷酸钠缓冲液(pH 6.20)溶剂系统,经正交试验确定了HSCCC 的佳运行参数,将苦参粗提物分离得到6 个固态收集物,经TLC 4 种不同展开系统证实其中有一个为单一组分.实验表明,HSCCC法是一种高效、简便的分离制备中草药有效成分纯品的新方法.
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高速逆流色谱分离制备裂叶独活中香豆素类成分
目的 建立高速逆流色谱(HSCCC)法从裂叶独活根中分离制备高质量分数的香豆素类成分.方法 利用高效液相色谱-二极管阵列检测器分析优化溶剂体系,选择正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(1.5:2.5:2:1.5)为HSCCC溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,主机转速为850 r/min,体积流量为3 mL/min,检测波长为323 nm.所接收馏份在50℃减压浓缩,静置得到蛇床子素晶体、二氢欧山芹醇乙酸酯晶体和二氢欧山芹醇当归酸酯晶体,应用核磁共振氢谱、碳谱、质谱、红外光谱等进行鉴定,并用HPLC测定质量分数.结果 进样量为300 mg浸膏,得到二氢欧山芹醇乙酸酯6.3 mg、蛇床子素10.6 mg、二氢欧山芹醇当归酸酯6.4 mg,三者的质量分数均达到96.0％以上.结论 HSCCC法可用于裂叶独活中高质量分数香豆素类成分的快速分离制备.
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柱色谱-高速逆流色谱法分离纯化虎杖中大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷
目的 建立从虎杖药材中高效制备分离大黄素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(EG)的方法.方法 采用大孔吸附树脂柱色谱和ODS柱色谱分离目标组分,高速逆流色谱(HSCCC)纯化目标化合物,质谱和核磁共振波谱数据鉴定结构,HPLC不加校正因子的主成分自身对照法检测纯度.结果 优化确定以二氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水(8∶1∶6∶5)为HSCCC溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,纯化制备了符合定量测定用要求的EG对照品,HPLC法检测质量分数大于98％.结论 方法适于从虎杖药材中大量制备高纯度EG,为含有该成分的天然产物及其制剂质量评价提供对照物质.
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丹参二萜醌部位高速逆流色谱制备工艺及体外抗肿瘤活性研究
目的 优选分离丹参二萜醌佳的高速逆流色谱(HSCCC)溶剂体系,明确丹参二萜醌的体外抗肿瘤活性.方法 采用CO2超临界萃取法制备丹参总二萜醌,采用UPLC测定丹参酮ⅡA和隐丹参酮在不同溶剂系统上下相中的峰面积,计算分配系数(K)值及K值的比值(α),确定佳溶剂体系.CKK-8法观察丹参二萜醌对人肝癌(QGY-7703)、肺癌(PC9、A549)、胃癌(MKN-45、HGC-27)、结肠癌(HCT116)、骨髓瘤(U266、RPMI8226)、乳腺癌(MCF-7)等9种人源肿瘤细胞株的抑制作用.结果 HSCCC溶剂系统为石油醚-醋酸乙酯-甲醇-水(12∶8∶13∶7)时,丹参酮ⅡA和隐丹参酮能得到较好的分离,丹参二萜醌的得率为8.65％.丹参二萜醌体外对人肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、骨髓瘤、乳腺癌等9种人源肿瘤细胞均有一定的抑制作用,其中对人肺癌PC9细胞及人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用为显著.结论 确定的溶剂体系对丹参二萜醌有效部位的分离效果可靠,建立的HSCCC制备方法操作简单,可作为高效快速分离纯化丹参二萜醌的分离制备方法.丹参二萜醌在体外具有良好的抗肿瘤活性.
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高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明
目的 建立高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的方法.方法 使用正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(5:5:7:3)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,体积流量2.0 mL/min,转速800 r/min,温度25℃,固定相的保留率为50%,检测波长300 nm,对草豆蔻粗提物进行分离.结果 从100 mg草豆蔻粗提物中一步分离纯化得到17.2 mg山姜素和25.1 mg小豆蔻明.经HPLC分析,质量分数分别为98.1%、99.2%,其化学结构由1H-NMR和13C-NMR鉴定.结论 与传统的、存在不可逆吸附现象的柱色谱法相比,高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的方法具有简单、高效、回收率高等优点.
