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应用高速逆流色谱技术从附子中分离制备苯甲酰新乌头原碱
利用高速逆流色谱技术,一次进柱即可实现从附子粗提物中分离得到苯甲酰新乌头原碱.两相溶剂系统用氯仿-甲醇-0.3mol/L盐酸三元系统,上相为固定相,下相为流动相,转速为892rpm,流速为1.2ml/min.通过ESI-MS,13C-NMR、1H-NMR鉴定,确认了其化学结构.经HPLC分析,纯度达98%以上.
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HPLC同时测定附子理中丸中3种单酯型生物碱含量
目的:建立附子理中丸中3种单酯型生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)的含量测定方法.方法:色谱柱Alltimate C18(4.6 mm ×250 mm,5μm)；保护柱Alltimate C18(4.6 mm ×7.5 mm,5μm);流动相40 mmol·L-1乙酸铵(加氨水调pH 10.00 ±0.5)-乙腈梯度洗脱；流速1.0 mL· min-1,检测波长240 nm,柱温35℃.结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱分别在进样量0.212 ～1.272 μg,0.0116～0.0696 μg,1.035 ～6.210 μg线性关系良好,r分别为0.9996,0.9997,0.9996,在8h内稳定性良好.同时,针对苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱,附子理中丸(河南宛西)平均加样回收率依次为97.59％ (RSD 1.90％)、98.81％(RSD 2.00％)、98.37％(RSD 1.72％),附子理中丸(安徽东芝堂)平均加样回收率依次为98.18％ (RSD 2.39％)、103.06％(RSD 1.77％)、98.23％(RSD 2.05％),而附子理中丸(北京同仁堂)仅含苯甲酰新乌头原碱的平均加样回收率100.17％(RSD 2.29％).结论:方法结果准确可靠、快速,适用于构建附子理中丸成方制剂的多指标质量评价模式.
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给药剂量对附子总生物碱在大鼠体内药代动力学特征的影响
目的:考察不同剂量附子总生物碱在大鼠体内的药动学特征,并探讨剂量与药动学的关系.方法:将大鼠随机均分为低、中、高剂量组,分别按9.6,19.2,38.4 mg·kg-1灌胃附子总生物碱,在0,5,10,20,30,40,60,120,180,300,420,540,720,1 440 min共14个时间点眼眶内眦静脉取血,采用UHPLC-Q-TOF-MS测定不同时间点血浆中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和乌头原碱的血药浓度,绘制药-时曲线,计算药动学参数.结果:与低剂量组比较,中、高剂量组上述7种生物碱类成分的药峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积AUC0-∞升高,大部分差异有统计学意义;表观分布容积/生物利用度(Vz/F),清除率(CL)/F,半衰期(t1/2)和达峰时间(Tmax)则大部分无明显变化.结论:剂量对附子总生物碱在大鼠体内的药动学特征有显著影响,从低剂量到高剂量的范围内,附子总生物碱的体内过程基本符合线性动力学特征.
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HPLC同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量
目的：建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量的方法。方法色谱柱为Agilent XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相A为乙腈-四氢呋喃(25∶8),B为0.1 mol/L醋酸铵溶液(每1000 mL加冰醋酸0.5 mL),梯度洗脱；流速：1 mL/min；检测波长：235 nm；柱温：25℃。结果乌头碱在0.072～0.648μg具有良好的线性关系(r＝0.9995),平均回收率为99.29%,RSD＝1.25%；新乌头碱在0.062～0.648μg具有良好的线性关系(r＝0.9995),平均回收率为99.12%,RSD＝0.85%；次乌头碱在0.064～0.384μg具有良好的线性关系(r＝0.9998),平均回收率为99.57%,RSD＝1.07%；苯甲酰乌头原碱在0.056～0.672μg具有良好的线性关系(r＝0.9992),平均回收率为98.11%,RSD＝0.61%；苯甲酰新乌头原碱在0.055～0.993μg具有良好的线性关系(r＝0.9999),平均回收率为99.27%,RSD＝1.10%；苯甲酰次乌头原碱在0.078～0.702μg具有良好的线性关系(r＝0.9998),平均回收率为99.08%,RSD＝1.38%。结论本方法操作简便、灵敏度高、重复性好,结果准确,可作为复方藤乌软膏中乌头类生物碱的含量测定方法。
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HPLC同时测定四逆汤中4种指标性成分的含量
目的:建立四逆汤中苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸和6-姜酚4种成分的高效液相色谱含量测定方法.方法:采用Thermo Hypersil BDS色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),梯度洗脱,流速1.0mL· min-1,检测波长235 nm.结果:苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸、6-姜酚均达到良好分离,线性范围分别为0.006～0.12(r =0.999 9),0.021～0.42(r=0.9997),0.012～0.24(r =0.999 4),0.018～0.36 g·L-1(r =0.999 5)；平均回收率分别为99.3％( RSD 1.5％),96.9％( RSD0.60％),100％( RSD 1.3％),100％ (RSD 2.1％).结论:该方法简便、准确、实用性强,可用于四逆汤中4种指标性成分的含量测定.
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反相离子对色谱法测定附子中生物碱成分
目的测定附子中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、北乌碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰新乌头原碱等6种生物碱的含量.方法用反相离子对HPLC法,使用AichromBond-1 C18柱(250 mm×4.6 mm ID);流动相:乙腈-5 mmol·L-1NaH2PO4溶液,磷酸调至pH 4.5(50:50),内含7 mmol·L-1十二烷基硫酸钠(SDS);检测波长:235 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:35℃.结果以上6种生物碱可以完全分离,准确测定.结论该方法准确度高,可应用于附子中生物碱的含量测定.
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基于外翻肠囊模型的黄芪-附子配伍对附子6种生物碱肠吸收的影响研究
目的 研究黄芪-附子药对配伍对附子3种单酯型生物碱(苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱)和3种双酯型生物碱(次乌头碱、新乌头碱、乌头碱)肠吸收的影响.方法 运用大鼠外翻肠囊模型,选择十二指肠、空肠、回肠为研究肠段,以表观渗透系数(Papp)为评价指标,考察黄芪对附子6种生物碱Papp的影响.结果 当附子-黄芪3∶1时,黄芪在十二指肠和回肠能显著降低双酯型生物碱的Papp,在3种肠段均能降低单酯型生物碱的Papp;当附子-黄芪1∶1时,除次乌头碱在回肠外,黄芪能显著降低双酯型生物碱的Papp;当附子-黄芪1∶3时,黄芪能显著降低单酯型生物碱(除回肠外)的Papp,在各肠段均能显著降低3种双酯型生物碱的Papp.结论 黄芪可抑制附子生物碱的吸收,且其抑制作用因配伍比例、生物碱的种类和肠段不同而不同.
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附子水溶性生物碱提取纯化工艺研究
目的 研究附子水溶性生物碱的提取纯化工艺.方法 采用UPLC-MS/MS技术,以14种生物碱(多根乌头碱、宋果灵、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱)的总量为考察指标,采用单因素实验和正交试验方法筛选佳提取工艺;以8种水溶性生物碱(乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、宋果灵、多根乌头碱)的量为考察指标,对5种大孔树脂吸附和解吸附性能进行考察,优选佳纯化工艺.结果 佳提取纯化工艺为蒸附片加10倍量pH值3.5的酸水,煎煮3次(维持pH值约3.5),每次2h,合并水煎液,用20％ NaOH溶液调pH值10.0,加热回流水解2h后,放冷,调pH值11.0,上大孔树脂HPD 300,上样量为生药2.5 g/mL树脂,6 BV水洗除杂,4 BV 80％乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,减压浓缩干燥,即得附子水溶性生物碱提取物.该提取物收率为1.69％,其中新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、尼奥灵、塔拉萨敏、多根乌头碱、宋果灵的总量高达约15％.结论 优选得到的提取纯化工艺稳定可行,为附子水溶性生物碱的研究应用提供参考.
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HPLC-MS/MS多组分定量测定结合化学计量学研究市售小金丸的质量一致性
目的 建立HPLC-MS/MS同时测定小金丸中藁本内酯、原儿茶酸、肌苷、齐墩果酸、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱10种成分的检测方法,并结合聚类分析、主成分分析(PCA)等化学计量学方法对不同厂家、不同批次小金丸的质量一致性进行评价.方法 建立HPLC-MS/MS方法同时测定小金丸中10种活性成分的量.采用Agilent Technologies Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈;质谱采用ESF多反应监测(MRM)模式扫描,并对定量测定结果进行聚类分析和PCA,综合评价市售小金丸质量的差异性.结果 方法学验证结果显示,10个化合物在各自质量浓度范围内线性关系良好(R2＞0.990 0);定量限为0.01～4.49 ng/mL,平均回收率在94.82％～104.33％.样品测定结果表明A厂家小金丸质量与其他厂家存在较大差异,PCA降维处理后所得荷载图中,苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头碱、肌苷等组分离原点距离远,其量的差异是导致一致性差异的主要成分.结论 市售小金丸质量一致性较差,各厂家在小金丸生产过程中应加强对制草乌和地龙药材的质量控制.
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桂龙凝胶膏剂质量标准研究
目的:建立桂龙凝胶膏剂的质量控制标准.方法:采用TLC法对桂龙凝胶膏剂中五爪龙、羌活、蒲黄进行定性鉴别;采用HPLC法对方中苯甲酰新鸟头原碱含量进行测定.结果:TLC鉴别方法斑点清晰、专属性强,简单可行;苯甲酰新鸟头原碱在167～984 ng范围内与峰面积有良好的线性关系,r=0.999951,平均回收率为98.70％,RSD=1.54％(n=6).结论:该研究所建立的质量标准方法简便、稳定,可用于桂龙凝胶膏剂的质量控制.
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HPLC法同时测定痹通药酒中4种生物碱成分
目的 建立HPLC法同时测定痹通药酒中4种生物碱的含有量.方法 该药物乙醚提取液分析采用Agilent C1s色谱柱(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相[乙腈-四氢呋喃(25∶15)]-0.1 mol/L醋酸铵,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长235 nm.结果 新乌头碱、次乌头碱、乌头碱、苯甲酰新乌头原碱分别在39.87～199.36、99.63 ～498.13、13.87 ～69.33、39.65 ～ 198.27μg/mL范围内线性关系良好(r＞0.999 0),平均加样回收率分别为98.24％(RSD=0.75％)、99.54％(RSD=0.50％)、97.60％ (RSD=1.54％)、99.52％ (RSD=1.32％).结论 该方法简便、准确、可靠,可用于痹通药酒的质量评价和控制.
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指纹图谱测定四逆汤6种有效成分的含量
目的:建立同时测定四逆汤中次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸及6-姜酚含量的方法.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Agilent C18(2)(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸水梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,检测波长分别为230 nm,柱温为30℃.结果:次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸及6-姜酚的线性范围分别为:1.496～14.96,2.340～23.40,2.628～26.28,36.00～360.0,68.640～686.40,7.008～70.08 g·L-1,相关系数r分别为0.9999,0.9999,0.9999,0.9999,0.9997,0.9996;平均加样回收率分别为96.13％,97.72％,100.96％,99.80％,98.98％,95.93％;RSD％分别为4.32％,1.76％,1.78％,1.16％,2.32％,2.41％.结论:建立的该高效液相色谱法简便、准确,适用于同时对四逆汤中次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、甘草苷、甘草酸及6-姜酚含量的测定.
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不同配伍对芍药甘草附子汤中苯甲酰类乌头碱含量变化的影响
目的探讨芍药甘草附子汤不同配伍对苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱3种成分含量变化的影响.方法 采用HPLC法对不同配伍样品煎液中的3种苯甲酰乌头碱进行含量测定,并分析比较不同煎煮时间不同配伍对其含量变化的影响.色谱条件:BDS Hydedsil C18 (250mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈∶四氢呋喃(25∶15)-0.1 mol·L-1醋酸铵溶液梯度洗脱,检测波长235 nm,柱温35℃,流速1.0 mL·min-1.结果芍药甘草附子汤中各配伍与单味附子相比,苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的含量均升高.结论附子与甘草、白芍配伍后能有效地起到减毒增效的作用,体现了中医药配伍用药的合理性和科学性.
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反相高效液相色谱法同时测定骨刺消痛胶囊中3种单酯型生物碱的含量
目的 建立RP-HPLC法同时测定骨刺消痛胶囊中3种单酯型生物碱含量.方法 色谱柱为Inert Sustain C18柱(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相A为乙腈-四氢呋喃(25:8),流动相B为0.1mol·L-1醋酸铵溶液(每1000mL加冰醋酸0.5 mL),梯度洗脱;流速:1.0mL·min-1;检测波长:234nm;柱温:30℃.结果 苯甲酰新乌头原碱在进样量为0.0246～0.615 μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9997),低、中、高浓度平均加样回收率分别为96.8％、98.9％、97.8％,RSD分别为0.94％、0.88％、0.95％;苯甲酰乌头原碱在进样量为0.0987～2.4675 μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9999),低、中、高浓度平均加样回收率分别为100.1％、99.8％、100.3％,RSD分别为0.43％、0.25％、0.19％;苯甲酰次乌头原碱在进样量为0.0118～0.295 μg与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9998),低、中、高浓度平均加样回收率分别为97.7％、99.8％、98.1％,RSD分别为0.91％、1.2％、0.97％.结论 本方法操作简便、灵敏度高、重复性好,结果准确,可作为骨刺消痛胶囊中单酯型生物碱的含量测定方法.
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HPLC同时测定人血浆中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的含量
目的:采用HPLC建立附子中4种生物碱类成分在人血浆中含量测定方法.方法:色谱条件为迪马钻石C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:A为乙腈-四氢呋喃(62∶ 38),B为10 mmol/L醋酸铵水溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:240 nm;柱温:30℃.结果:新乌头碱、乌头碱、次乌头碱和苯甲酰新乌头原碱的线性范围分别为1.69～1 690 μg/mL、1.58 ～1 582 μg/mL、2.56 ～2 563 μg/mL和3.60 ～3 597 μg/mL(r ＞0.9985),加样回收率RSD＜ 4.5％.结论:该方法灵敏度高、精密度好,可用于附子中4种生物碱成分的药物动力学研究.
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RP-HPLC法测定五生饮中3种单酯型乌头类生物碱的含量
目的 建立五生饮中3种单酯型乌头类生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)的含量测定方法.方法 采用YMC-Pack ODS-AM C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温:35℃,以乙腈-四氢呋喃(25:15)为流动相A,0.1 mol·L-1醋酸铵溶液(每1000 mL加冰醋酸0.5 mL)为流动相B,梯度洗脱,流速:1.0 mL·min-1,检测波长:235 nm,进样量:10μL.结果 苯甲酰新乌头原碱在146.96～ 1469.60 ng范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为99.05％(RSD为1.87％);苯甲酰乌头原碱在16.78 ～ 167.80 ng范围内线性关系良好,r=0.9998,平均回收率为99.42％(RSD为1.94％);苯甲酰次乌头原碱在20.30 ～ 203.00ng范围内线性关系良好,r=0.9999,平均回收率为100.15％(RSD为1.53％).结论 本研究所建立的方法操作简单,稳定性好,准确度高,重复性好,为五生饮水煎剂的质量控制提供参考.
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双乌止痛酊质量标准研究
目的 制订双乌止痛酊的质量标准.方法 采用薄层色谱法对双乌止痛酊中的制天南星、当归及苯甲酰次乌头原碱进行定性鉴别,同时对制剂中的毒性成分乌头碱进行限量检查;采用高效液相色谱法测定苯甲酰新乌头原碱含量,色谱柱选用Inertsustain C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol/L的磷酸二氢钠(25:75)为流动相,检测波长为230 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min.结果 双乌止痛酊中制天南星、当归及苯甲酰次乌头原碱的定性鉴别专属性强,乌头碱限量测定符合规定;苯甲酰新乌头原碱的检测质量浓度在0.01244～0.09952 g/L(r=1.0000,n=5)范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为99.36％,RSD=2.45％(n=9).结论 该方法操作简单,准确可靠,可用于双乌止痛酊的质量控制.
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高效液相色谱法测定附桂通便颗粒中苯甲酰新乌头原碱和新乌头碱的量
目的 对附桂通便颗粒中苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱进行含量测定.方法 运用高效液相色谱法(HPLC),Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.015％二乙胺-乙腈溶液,线性梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长240 nm.结果 苯甲酰新乌头原碱、新乌头碱分别在0.088 8～0.888 0 μg (r=0.999 8)、0.199 0～1.990 0 μg(r=0.999 8)范围内,具有良好的线性关系;平均加样回收率依次为99.11％、99.13％,相对标准偏差(RSD)分别为0.76％、1.61％.结论 该方法快速、简便,重现性好,可作为该制剂的定量分析方法.
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附子煎煮过程中13种生物碱含量的动态变化规律研究
目的:采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱,精确测定附子水煎液中酯型生物碱、原碱、去甲猪毛菜碱等成分的含量,探讨附子煎煮过程中13种生物碱的动态变化规律,为临床应用和炮制提供参考.方法:采用Agilent SB-C1s色谱柱(2.1 mm×20mm,1.8μm),以2 mmol·L-1醋酸铵溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.4 mL·min-,柱温35℃;质谱采用ESI+离子源,多反应监测模式(MRM),检测13种生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱、附子灵、多根乌头碱、宋果灵、去甲猪毛菜碱)以及内标氢溴酸高乌甲素的定量离子和定性离子.结果:生附片煎煮过程中双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)含量迅速降低,4h后趋于稳定且含量很低;单酯型生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)含量先升后降,于4～6h达到高峰;原碱中乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱含量一直快速增加,而附子灵、宋果灵、多根乌头碱和去甲猪毛菜碱含量缓慢增加,约在4h达到高峰,后趋于稳定或略有降低.黑顺片煎煮过程中生物碱成分的动态变化趋势与生附片相似,但变化幅度显著小于生附片.结论:生附片煎煮2～4h,双酯型生物碱含量已很低,能保证临床用药安全,且总生物碱等主要成分的含量显著高于黑顺片水煎液.
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高效液相色谱与QDA质谱联用同时测定附子理中丸中6个单酯及双酯型生物碱含量
目的:建立同时测定附子理中丸中6个单酯及双酯型生物碱含量的方法.方法:应用高效液相色谱(HPLC)与QDA质谱联用同时测定附子理中丸中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱6个成分的含量.使用Phenomenex Luna C1s色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2％乙酸水(用三乙胺调pH 6.2)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,分流比为1:4,使用ESI+离子源,选择性离子扫描(SIM)模式下对苯甲酰新乌头原碱(m/z 590.0)、苯甲酰乌头原碱(m/z 604.0)、苯甲酰次乌头原碱(m/z 574.0)、新乌头碱(rr/z 632.0)、次乌头碱(m/z 616.0)和乌头碱(m/z 646.0)进行测定.结果:苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、次乌头碱、新乌头碱和乌头碱6个成分的质量浓度分别在0.000 2～51.75 μg· mL-1(r=0.999 2)、0.000 2～50.95 μg·mL-1(r=0.999 5)、0.000 2～50.25 μg·mL-1(r=0.999 8)、0.000 2～49.80 μg·mL-1(r=0.999 9)、0.000 2～50.60 μg·mL-1(r=0.999 5)和0.000 2～52.00 μg· mL-1(r=0.999 7)范围内线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为101.8％、101.3％、98.2％、104.8％、99.9％和89.9％,RSD分别为6.4％、2.6％、2.7％、6.1％、3.8％和5.7％.3批附子理中丸中6个生物碱成分即苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的含量范围分别为7.095～7.366、1.007～1.214、0.594～0.742、1.261～1.438、1.492～1.578和0.135～0.163μg·g-1.结论:该方法可测定附子理中丸中6个生物碱成分含量,为附子理中丸的质量标准提高打下了基础.
