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制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与纯化豚鼠内耳抗原
粗制内耳抗原(crude inner ear antigen，CIEAg)广泛用于自身免疫性内耳病（autoimmune inner ear disease，AIED）的研究，包括建立动物模型和作为抗原检测AIED患者血清自身抗体［1，2］。但CIEAg成分复杂，其中何种亚组份起关键作用尚不清楚。我们通过制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳（preparative polyacry-lamide gel electrophoresis，简称制备性PAGE）分离纯化豚鼠CIEAg的主要亚组份，为深入研究AIED的发病机制和寻找内耳特异性抗原奠定基础。 一、材料和方法 1.豚鼠CIEAg的制备：取200～300 g耳廓反射正常的豚鼠(华中科技大学同济医学院实验动物部提供)，参照肖红俊等［3］报道的方法提取。考马斯亮蓝G-250法测定其浓度。 2. 凝胶电泳方法：①分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳(analytical polyacrylamide gel electrophoresis，以下简称分析性PAGE)凝胶厚1.25 mm，浓缩胶和分离胶的浓度分别为4%和10%；加样量为4～32 μg，蛋白质分子量标准加样20或40 μg；样品进入分离胶前恒电流10 mA，进入分离胶后恒电流20 mA，15℃恒温电泳；常规考马斯亮蓝R-250染色和脱色，并对脱色后凝胶进行薄层扫描；②制备性PAGE 凝胶厚3 mm，加样量为2～3 mg；样品进入分离胶前恒电流40 mA，进入分离胶后恒电流50 mA，15℃恒温电泳；电泳结束后，快速考马斯亮蓝R-250染色液加温染色40～50 min，然后在含有5%甲醇、10%冰乙酸的脱色液中加温脱色10 min左右［4］，其余同①；③制备性PAGE和分离亚组份的回收电泳同②；电泳结束后自板胶的中央纵向切下宽1 cm左右的窄带，进行快速染色和脱色。将染色后的凝胶条用蒸馏水冲洗后复位，根据染色凝胶蛋白区带的位置，从未染色的凝胶上切下主要蛋白区带冰浴匀浆。-50℃保存备用。
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恒电流微分电位溶出法测定水中痕量汞的研究
测定水中痕量汞现行的标准方法有冷原子吸收法、原子荧光法及双硫腙比色法.汞的溶出分析曾用K2Cr2O7或KMnO4和Cr(Ⅵ)联合作氧化剂或Cu(Ⅱ)作敏化剂等[1,2].本文详细探讨了汞的溶出分析条件,建立了一种恒电流微分电位溶出测定水中痕量汞的分析方法.本法操作简便、快速,无需氧化剂,在2.4 mol/LHCl介质中,用金膜电极在电压-0.4 V下富集150s时,汞的低检出浓度高达0.8μg/L.
