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维药制剂药渣中蛋白质及游离氨基酸的含量测定
目的:测定药渣中蛋白质及氨基酸的含量.方法:用考马斯亮蓝G-250、茚三酮显色,分光光度法测定蛋白质及氨基酸的含量.结果:CBB G-250显色测定蛋白质线性范围0.081～0.202 mg,加样回收率102.06％、RSD为0.99％;茚三酮显色测定氨基酸的线性范围0.016～0.029 mg/mL,加样回收率99.83％、RSD为1.82％.结论:CBB G-250和茚三酮显色,均具有简便、快速、灵敏度高、成本低、重现性好等特点.
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用考马斯亮蓝测定动物药材中可溶性蛋白质含量方法初探
目的 探讨考马斯亮蓝法用于测定动物药材中可溶性蛋白质含量的稳定性研究.方法 采用紫外分光光度法,以蟾蜍干体为原料,牛血清白蛋白为对照,在595 nm处测定蛋白质与考马斯亮蓝结合复合物的吸光值.结果 实验表明,吸光度和蛋白含量间具有良好的线性关系(r=0.996),样品在10 min内测定稳定(RSD=5.0%).结论 本方法可靠、简单、快速.
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一种改良的蛋白质电泳考马斯亮蓝G-250染色方法
目的 建立一种简便、低毒的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法.方法 电泳后的凝胶经短暂固定后,用含氨基磺酸的考马斯亮蓝GG-250溶液染色,无需脱色.结果 该方法灵敏度高于经典考马斯亮蓝R-250染色方法,并去除了常规染色和脱色液中有毒的甲醇等溶剂.结论 改良方法具有灵敏度高、染色背景浅、节省染料、直接显色无需脱色及配方安全低毒等优点.
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乙型肝炎病毒前-X在大肠杆菌中的表达和纯化
目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-X蛋白,并进行纯化和鉴定.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)获得HBV前-X基因,将前-X克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),考马斯亮蓝染色.采用凝胶电泳回收纯化.经Western blot.结果:成功扩增获得HBV的前-X编码基因片断,并构建大肠杆菌表达载体.表达载体转化的大肠杆菌经过IPTG的诱导,裂解,SDS-PAGE,结果显示得到了目的蛋白Mr27000.以抗-His的单克隆抗体进行的western blot杂交实验,结果表明表达、纯化的目的蛋白具有特异性免疫反应识别.结论:成功表达HBV的前-X蛋白,对于研究HBV的前-X蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了坚实的基础.
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乙型肝炎病毒前-前-S蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化
目的:在大肠杆菌中表达乙型肝炎病毒(HBV)前-前-S蛋白,并进行纯化和鉴定.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)获得HBV前-前-S基因,将前-前-S克隆至PET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达,表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),考马斯亮蓝染色.采用凝胶电泳回收纯化.经Western blot.结果:成功扩增获得HBV的前-前-S编码基因片断,并构建大肠杆菌表达载体.表达载体转化的大肠杆菌经过IPTG的诱导,裂解,SDS-pAGE,结果显示得到了目的蛋白Mr28 000.以抗-His的单克隆抗体进行的western blot杂交实验,结果表明表达、纯化的目的蛋白具有特异性免疫反应识别.结论:成功表达HBV的前-前-S蛋白,对于研究HBV的前-前-S蛋白的免疫原性和生物学特性奠定了坚实的基础.
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投稿常见文字差错
示例如下（箭头后为正确用字）：前驱病变→前期病变，愈复期→恢复期，异性蛋白→异种蛋白，过渡超载→过度超载，转酞酶→转肽酶，1％饿酸→1％锇酸，嗽口→漱口，环胞素→环孢素，期未→期末，阿斯匹林→阿司匹林，神经未梢→神经末梢，肾孟肾炎→肾盂肾炎，甲氨喋呤→甲氨蝶呤，服帖→服贴，松驰→松弛，均浆→匀浆，海棉→海绵，从新→重新，应急性溃疡→应激性溃疡，探察→探查，基因片断→基因片段，纠份→纠纷，慧星→彗星，图象→图像，纵膈→纵隔，丝裂酶素→丝裂霉素，同功酶→同工酶，运做→运作，及其重要→极其重要，排它性→排他性，形像→形象，型势→形势，据为已有→据为己有，幅射→辐射，与下属熔为一体→与下属融为一体，烦燥→烦躁，愈后→预后，成份→成分，肌肝→肌酐，综合症→综合征，侯诊→候诊，心里上→心理上，适应症→适应证，机率→概率，记数法→计数法，书藉→书籍，辨证唯物主义→辩证唯物主义，辩证论治→辨证论治，随然→虽然，电子病例→电子病历，青眯→青睐，各负其则→各负其责，启步→起步，机构配制→机构配置，拔款→拨款，雷怕霉素→雷帕霉素，阿酶素→阿霉素，瘀血→淤血，考马斯亮兰→考马斯亮蓝，连结→连接，石腊→石蜡，无须→无需，耦连→耦联，偶联→耦联，已往→以往，退性性→退行性，5－羟色氨→5－羟色胺，硫基→巯基，毛细血管嵌压→毛细血管楔压，枸椽酸钠→枸橼酸钠，轶和检验→秩和检验等。
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投稿常见文字差错
示例如下（箭头后为正确用字）：前驱病变→前期病变，愈复期→恢复期，异性蛋白→异种蛋白，过渡超载→过度超载，转酞酶→转肽酶，1％饿酸→1％锇酸，嗽口→漱口，环胞素→环孢素，期未→期末，阿斯匹林→阿司匹林，神经未梢→神经末梢，肾孟肾炎→肾盂肾炎，甲氨喋呤→甲氨蝶呤，服帖→服贴，松驰→松弛，均浆→匀浆，海棉→海绵，从新→重新，应急性溃疡→应激性溃疡，探察→探查，基因片断→基因片段，纠份→纠纷，慧星→彗星，图象→图像，纵膈→纵隔，丝裂酶素→丝裂霉素，同功酶→同工酶，运做→运作，及其重要→极其重要，排它性→排他性，形像→形象，型势→形势，据为已有→据为己有，幅射→辐射，与下属熔为一体→与下属融为一体，烦燥→烦躁，愈后→预后，成份→成分，肌肝→肌酐，综合症→综合征，侯诊→候诊，心里上→心理上，适应症→适应证，机率→概率，记数法→计数法，书藉→书籍，辨证唯物主义→辩证唯物主义，辩证论治→辨证论治，随然→虽然，电子病例→电子病历，青眯→青睐，各负其则→各负其责，启步→起步，机构配制→机构配置，拔款→拨款，雷怕霉素→雷帕霉素，阿酶素→阿霉素，瘀血→淤血，考马斯亮兰→考马斯亮蓝，连结→连接，石腊→石蜡，无须→无需，耦连→耦联，偶联→耦联，已往→以往，退性性→退行性，5-羟色氨→5-羟色胺，硫基→巯基，毛细血管嵌压→毛细血管楔压，枸椽酸钠→枸橼酸钠，轶和检验→秩和检验等。
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投稿常见文字差错
示例如下（箭头后为正确用字）：前驱病变→前期病变，愈复期→恢复期，异性蛋白→异种蛋白，过渡超载→过度超载，转酞酶→转肽酶，1％饿酸→1％锇酸，嗽口→漱口，环胞素→环孢素，期未→期末，阿斯匹林→阿司匹林，神经未梢→神经末梢，肾孟肾炎→肾盂肾炎，甲氨喋呤→甲氨蝶呤，服帖→服贴，松驰→松弛，均浆→匀浆，海棉→海绵，从新→重新，应急性溃疡→应激性溃疡，探察→探查，基因片断→基因片段，纠份→纠纷，慧星→彗星，图象→图像，纵膈→纵隔，丝裂酶素→丝裂霉素，同功酶→同工酶，运做→运作，及其重要→极其重要，排它性→排他性，形像→形象，型势→形势，据为已有→据为己有，幅射→辐射，与下属熔为一体→与下属融为一体，烦燥→烦躁，愈后→预后，成份→成分，肌肝→肌酐，综合症→综合征，侯诊→候诊，心里上→心理上，适应症→适应证，机率→概率，记数法→计数法，书藉→书籍，辨证唯物主义→辩证唯物主义，辩证论治→辨证论治，随然→虽然，电子病例→电子病历，青眯→青睐，各负其则→各负其责，启步→起步，机构配制→机构配置，拔款→拨款，雷怕霉素→雷帕霉素，阿酶素→阿霉素，瘀血→淤血，考马斯亮兰→考马斯亮蓝，连结→连接，石腊→石蜡，无须→无需，耦连→耦联，偶联→耦联，已往→以往，退性性→退行性，5-羟色氨→5-羟色胺，硫基→巯基，毛细血管嵌压→毛细血管楔压，枸椽酸钠→枸橼酸钠，轶和检验→秩和检验等。
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制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离与纯化豚鼠内耳抗原
粗制内耳抗原(crude inner ear antigen，CIEAg)广泛用于自身免疫性内耳病（autoimmune inner ear disease，AIED）的研究，包括建立动物模型和作为抗原检测AIED患者血清自身抗体［1，2］。但CIEAg成分复杂，其中何种亚组份起关键作用尚不清楚。我们通过制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳（preparative polyacry-lamide gel electrophoresis，简称制备性PAGE）分离纯化豚鼠CIEAg的主要亚组份，为深入研究AIED的发病机制和寻找内耳特异性抗原奠定基础。 一、材料和方法 1.豚鼠CIEAg的制备：取200～300 g耳廓反射正常的豚鼠(华中科技大学同济医学院实验动物部提供)，参照肖红俊等［3］报道的方法提取。考马斯亮蓝G-250法测定其浓度。 2. 凝胶电泳方法：①分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳(analytical polyacrylamide gel electrophoresis，以下简称分析性PAGE)凝胶厚1.25 mm，浓缩胶和分离胶的浓度分别为4%和10%；加样量为4～32 μg，蛋白质分子量标准加样20或40 μg；样品进入分离胶前恒电流10 mA，进入分离胶后恒电流20 mA，15℃恒温电泳；常规考马斯亮蓝R-250染色和脱色，并对脱色后凝胶进行薄层扫描；②制备性PAGE 凝胶厚3 mm，加样量为2～3 mg；样品进入分离胶前恒电流40 mA，进入分离胶后恒电流50 mA，15℃恒温电泳；电泳结束后，快速考马斯亮蓝R-250染色液加温染色40～50 min，然后在含有5%甲醇、10%冰乙酸的脱色液中加温脱色10 min左右［4］，其余同①；③制备性PAGE和分离亚组份的回收电泳同②；电泳结束后自板胶的中央纵向切下宽1 cm左右的窄带，进行快速染色和脱色。将染色后的凝胶条用蒸馏水冲洗后复位，根据染色凝胶蛋白区带的位置，从未染色的凝胶上切下主要蛋白区带冰浴匀浆。-50℃保存备用。
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BAY及DMSO在体外对小鼠精子顶体反应的影响
目的 探究BAY(激素敏感脂酶抑制剂)及DMSO(二甲基亚砜)对小鼠精子顶体反应(AR)的直接影响.方法 分别通过5个和6个不同的浓度梯度的BAY及DMSO在体外探究其对小鼠精子AR的影响,在不同孵育时间段采用FITC-PSA和考马斯亮蓝染色法对小鼠精子的顶体反应进行鉴定.结果 在所选浓度范围内BAY未能直接影响精子的顶体反应及存活率(P＞0.05),而DMSO在一定浓度和时间内可直接影响精子顶体反应及精子存活率.结论 DMSO和BAY对小鼠精子发生的作用是通过不同途径来实现的,前者可直接影响精子顶体反应和精子的存活率,而后者则与顶体反应及存活率无关.提示在AR的研究中使用DMSO时需控制好作用浓度及作用时间.
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尿液与脑脊液总蛋白测定方法研究
蛋白质是临床生化和生物化学基础的问题.在定性与定量两个方面进行了全面的研究.①首创了考马斯亮蓝法定性尿液蛋白质;②建立了钨酸比浊法定量测定尿液与脑脊液蛋白质;③以人混合血清做蛋白标准,应用邻苯三酚红钼法;④确立了尿总蛋白/肌酐参考值,消除了尿量对蛋白测定的影响; ⑤探讨了疾病的应用价值.正常尿液与脑脊液蛋白浓度很低,测定方法相似,其临床意义重大.
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考马斯亮蓝染色在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用
在研究医学媒介节肢动物与宿主相互关系过程中,经常用到聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,以分析功能成分的变化及作用关系,通过分析蛋白凝胶电泳后的色带图谱,可识别不同的蛋白,或用凝胶电泳法分析DNA,其中的关键显色技术是考马斯亮蓝染色法.本文结合实际研究的经验,介绍一种快速显色的技术,供相关人员参考使用.本实验流程仅需三小时,且具有快速、安全、染色及观察(色带)简便等优点.
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两种蛋白电泳染色方法的比较
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可用于检测蛋白质的相对分子质量,但常规的考马斯亮蓝R-250染色法耗时长,成本高,废弃的甲醇和冰醋酸还可造成对实验室和周围环境的污染.我们在实验过程中逐渐摸索出一种非常省时、成本很低并且对环境无污染的染色方法.
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两种蛋白电泳染色方法的比较
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可用于检测蛋白质的相对分子质量,但常规的考马斯亮蓝R-250染色法耗时长,成本高,废弃的甲醇和冰醋酸还可造成对实验室和周围环境的污染.我们在实验过程中逐渐摸索出一种非常省时、成本很低并且对环境无污染的染色方法.
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白及溶胶中植物蛋白的定性定量方法研究
目的 研究白及溶胶中植物蛋白定性定量方法.方法 应用硝酸与蛋白质的硝化反应对其进行定性鉴别,应用双缩脲试剂与蛋白质的染色反应进行色谱鉴别,应用考马斯亮蓝染色法对其进行定量检测.结果 白及溶胶加入硝酸后呈现蛋白质硝化的黄色反应,与对照品反应颜色一致;白及溶胶溶液与双缩脲试剂反应呈紫色,在540 nm处有大吸收,与对照品一致;该植物蛋白样品溶液在595 nm处有大吸收,标准蛋白溶液在3.92 ～ 19.61 μg/ml范围内呈良好的线性关系,曲线方程为Y=0.036 X-0.000 5(r =0.999 5),平均回收率为96.2％,尉D为1.33％.结论 硝酸用于白及溶胶中植物蛋白的定性鉴别,速度快,黄色呈现明显;考马斯亮蓝染色法用于白及溶胶中植物蛋白的含量测定,方法简便、快捷,灵敏度高,结果重现性好,适用于该溶胶的定量.
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快速、低背景凝胶染色和脱色方法
科研及临床工作中，经常需要用电泳法纯化或分离蛋白质，电泳后其胶染色方法有多种，常见的如考马斯亮蓝(G250、R250)、氨基黑及印度墨水染色法等。这些方法，各具特点，但均存在一些缺点：如需大量价格较贵且有毒性的甲醇及乙酸等溶液进行染色，染色后为降低背景，脱色十分困难，耗时长，过浓的染料溶液用后弃之，容易污染环境。我们参考国外文献及有关实验室经验，改进总结出一种应用考马斯亮蓝G250快速、低背景的二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)胶等蛋白染色、脱色方法。 一、试剂及仪器 1.试剂：1 mol/L HCL,1 g/L考马斯亮蓝G250储存液，5 mmol/L HCL胶平衡液，15 mg G250/L胶染色液(1 ml 1 mol/L HCL及15 ml考马斯亮蓝G250储存液/L)，1 mmol/L HCL胶脱色液。 2.仪器：微型胶电泳仪(Miniprotein 3 System，BlO-RAD)，多功能电泳仪系统(Multiphorll，Phamaca),普通摇床(上海)，荧光成像系统(Fluor-S，BlO-RAD)，电泳图像扫描仪：(Bio-Scanner Bio-Med lnstruments lns)。 二、电泳：SDS-PAGE，按文献常规操作。 三、染色、脱色 1.平衡：将电泳胶移至塑料盒中，按每块大胶16cm×20cm 300～500 ml，小胶9cm×10cm 100 ml，加入平衡液，平稳摇动30 min，换新鲜平衡液，重复上述步骤1～2次。 2.染色：弃平衡液，按每块大胶300～500 ml，小胶100 ml，加入染色液，平稳摇动，直至染色程度适合成像检测，通常大于4 h，好放置过夜。 3.脱色：弃染色液，按每块大胶300～500 ml，小胶100 ml，加入脱色液，平稳摇动2～4 h，直至背景降至合适水平。 4.成像、扫描：上述脱色胶可贮存于1 mmol/L HCL中，待成像处理、密度扫描半定量测定蛋白浓度或干胶后备用。 四、结果 1.背景低； 2. 蛋白条带染色清晰； 3. 脱色快；4. 低蛋白染色(条带目视清楚)100 ng； 5. 染色蛋白条带或双向电泳斑点于2.0～40 μg蛋白浓度范围，成像扫描分析可呈线性。 五、讨论 本法染料G250用量远远低于其他方法染料用量，减少污染。无需使用浓磷酸、乙醇或甲醇等试剂配制染色液，成本降低。本法染色脱色，背景极低，十分有利于成像扫描分析。
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对精子改良巴氏染色法的改进
精液涂片染色是分析精子形态的主要手段.目前由于采用的染色方法和形态学评定标准不同,导致各实验室结果缺乏可比性[1,2].国内一些实验室现常采用改良巴氏染色法,瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法[3].其中改良巴氏染色法是男科学实验室较常用的方法,同时也是世界卫生组织推荐的方法[4].
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Dimension AR专用通道微量蛋白测定试剂的研制
尿液中微量蛋白测定常用的方法有三氯乙酸沉淀-双缩脲法、丽春红S法、三氯乙酸比浊法等,此类方法准确性差,操作繁复,不宜自动化.能用于自动化仪器的方法如考马斯亮蓝染料结合法[1,2],由于染料会吸附管道和比色皿,使该法应用受到限止.据文献[3]报告,邻苯三酚红-钼酸复合物测定尿微量蛋白,不污染仪器,且具有更多的优点,为了使该法能用于Dimension AR分析仪,代替价格昂贵的进口试剂,我们作了实验.
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一种蛋白质定量方法在重组药品监测中的应用
随着生物科学的快速发展，许多临床应用药物都可以用基因工程的方法重组而成。重组葡激酶(r-SAK)是一种由枯草杆菌BW110质粒表达的外分泌蛋白，在发酵过程中，由于条件的差异，工程菌分泌蛋白量的监测显得十分重要。本文采用SDS-PAGE凝胶电泳，考马斯亮蓝G250染色、脱色后，用吡啶溶液洗脱凝胶上着色的考马斯亮蓝条带，于波长605nm测定洗脱液OD值，根据标准曲线计算发酵液中r-SAK组份的含量。以达到质控的目的。此法是一种方便、准确的、简单的蛋白质定量方法。
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哺乳动物精子顶体反应检测考马斯亮蓝染色法
顶体反应(acrosome reaction,AR)是精子在受精过程中经历的重要环节之一.在AR机理研究中,检测精子是否发生AR是生殖生物学和生殖医学中常用的研究手段.目前已建立了十多种较实用的AR检测技术,但由于精子及其顶体存在种间差异性,使许多方法在应用上都存在一些局限.近年来Moller[1]和Aarons[2,3]等报道采用考马斯亮蓝染色法来检测小鼠精子AR,作者等人先前已将此法移用于人精子AR的检测中[4],方法简便、经济.本研究目的是为了推广考马斯亮蓝染色的适用范围,建立一种哺乳动物精子AR检测较通用简便的技术.
