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现代分子生物学技术在食品和药品微生物检测中的应用
在我国药品、食品行业急速发展的社会形势下,食品、药品的质量与人们生命健康息息相关,然而我国当前使用的食品、药品检测手段还不够先进,因此,发展一项新的食品、药品检测技术具有现实性。本文首先详细分析了聚合酶链式反应技术的原理、应用及前景,接着简要介绍了变性梯度凝胶电泳技术、基因芯片和现代免疫技术。
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1-09 间接致癌物对肝细胞DNA的损伤
目的二甲基亚硝胺(NDMA)和氯乙烯(VC)这两种间接致癌物需经肝实质性细胞(PC)活化后才具有致DNA损伤作用.为验证经肝PC活化代谢的NDMA物中间活性产物能否"传递”给肝非实质性细胞(NPC),引起后者DNA损伤.方法应用单细胞微量凝胶电泳技术对NDMA和VC的DNA损伤作用进行了研究.实验程序:(1)程序1:NPC和PC分别暴露不同浓度的NDMA或VC中,然后作DNA测试;(2)程序2:先将NPC装入透析袋中,浸没于含不同浓度NDMA或VC的PC悬液中,混合培养后,作DNA测试.结果 NDMA和VC对肝PC的DNA损伤作用具有明显的剂量-效应关系.NPC单独暴露NDMA或VC中无明显的DNA损伤作用,但NPC与PC混合培养并暴露NDMA或VC中时,均出现DNA损伤作用.结论经过PC活化代谢后的NDMA或VC的中间活性产物可进入透析袋内作用于NPC,引起后者DNA损伤.本实验结果有助于解释起源于肝内皮细胞的肝血管肉瘤的产物机制.
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多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳技术辅助鉴定肠炎沙门菌
伤寒沙门菌和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起肠热型感染,而肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸭沙门菌等则多引起急性胃肠炎型感染.准确的沙门菌菌株鉴定对于传染病的预防控制有重要意义.笔者应用肠杆菌科细菌鉴定系统ATB ID32E和API 20E对一起食源性疾病暴发事件中分离到的2株沙门属菌株及1株分离自住院患者的沙门属菌株进行生化鉴定,同时进行血清凝集试验.
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莱菔子及其伪品的蛋白电泳鉴别
莱菔子为十字花科植物萝卜Raphanus sativus L.的种子,具有消食除胀、降气化痰之功效[1].药材菟丝子和决明子与莱菔子性状相近,易混淆.目前,聚丙烯酰胺凝胶电泳技术已广泛应用于生理生化的研究中,但在鉴定中药方面应用较少.本研究为凝胶电泳技术在莱菔子药材的质量及混乱品种鉴定提供理论依据.
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医院感染中产ESBLs大肠埃希菌基因型及同源性研究
大肠埃希菌是目前院内感染的主要病原菌之一,其与腹腔感染、尿路感染、伤口感染及血流感染等多种感染相关。由于广谱抗菌药物,尤其是三代头孢菌素的滥用及不合理使用,产超广谱β-内酰胺酶( ESBLs)大肠埃希菌检出率不断增高,给临床治疗带来很大困难。本研究同时分析采自我院患者和医院环境样本,采用多重 PCR 的方法对试验菌株ESBLs基因 TEM、SHV、OXA、PER、VEB、GES、CTX及β-内酰胺酶基因AmpC进行扩增,确定基因型;脉冲场凝胶电泳技术( PFGE)对患者菌株和环境标本菌株进行同源性分析,以追踪传染源和传播途径。
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脉冲场凝胶电泳技术及其在细菌分型中的应用
随着对细菌感染研究的日益深入,传统的细菌鉴定技术已不能很好地满足医院感染的诊断和流行病学调查的需要,表型分型方法如药敏试验等可用于检测疫情的爆发流行,但不能确认菌株之间的相关性[1].如今,从型、亚型、株甚至分子水平上去认识细菌变得愈来愈重要,因此分子生物学在细菌分型上得到了广泛应用.
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人卵巢癌细胞系A2780及顺铂耐药系蛋白质双向电泳图谱的差异分析
近年来,生命科学研究领域的热点,蛋白质组学理论和技术的迅速发展和完善,可望从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度,探讨卵巢癌顺铂耐药的机理[1].本研究应用固相pH梯度双向凝胶电泳技术,分离人卵巢癌细胞系A2780及顺铂(DDP)耐药系(A2780-DDP)的总蛋白,建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱,再应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,及数据库鉴定部分差异蛋白质,希望发现与顺铂耐药有关的特异性蛋白质.
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考马斯亮蓝染色在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的应用
在研究医学媒介节肢动物与宿主相互关系过程中,经常用到聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,以分析功能成分的变化及作用关系,通过分析蛋白凝胶电泳后的色带图谱,可识别不同的蛋白,或用凝胶电泳法分析DNA,其中的关键显色技术是考马斯亮蓝染色法.本文结合实际研究的经验,介绍一种快速显色的技术,供相关人员参考使用.本实验流程仅需三小时,且具有快速、安全、染色及观察(色带)简便等优点.
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医院内多重耐药鼠伤寒沙门氏菌的暴发流行——质粒指纹技术的采用
自从Meyer等1976年报告可用简易的琼脂凝胶电泳技术来观察质粒DNA指纹以来,该技术已逐步被用来监测医院内外微生物流行情况.
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尿微量蛋白检测及尿蛋白电泳在肾脏疾病诊断中的应用
我们应用十二烷基磺酸钠-琼脂糖凝胶电泳技术来进行蛋白尿的分类,并结合尿β2-微球蛋白(β2-m),尿视黄醇结合蛋白(RBP),尿微量白蛋白及α2-巨球蛋白测定进行对照分析,探讨尿微量蛋白检测及尿蛋白电泳在肾脏疾病中的诊断价值.
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12种《中国药典》对照药材的聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析
植物类中药细胞内普遍含有受遗传基因控制的蛋白质分子,且具有种的特异性和稳定性, 利用这一规律,可鉴别亲缘关系相近的不同种类的药材.本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 (PAGE),对12种《中国药典》对照药材进行了分析,旨在为中药材鉴别提供一项新的评价指标,同时为建立中药材电泳鉴别图谱库提供资料.
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脉冲凝胶电泳技术在沙门菌属染色体结构分析中的应用
沙门菌属(Salmonella)是肠杆菌科家族中的成员,属内有五个亚属,包括2500多个血清型.因该属细菌中不同的种、型往往具有很强的宿主特异性,故能在哺乳类、鸟类和爬行类等多种动物中引起疾病.多年来对该属细菌的研究主要基于宿主特异性、是否存在特异性表面抗原及对噬菌体的敏感性等表型特征.随着分子生物学技术的发展,尤其近年来迅速兴起的脉冲凝胶电泳(Pulsed-field gel electro phoresis,PFGE)技术的应用,已在基因水平对沙门菌属细菌进行分析,找出属中菌间遗传方面的差异及进化根源,进而对病原菌进行流行病学研究,以便找到更好的预防和控制方法.现将PFGE技术在沙门菌属染色体结构分析中的应用综述如下:
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RCR Ribotying在细菌分子流行病学研究中的应用
细菌流行病学鉴定的分子标记技术迅速发展,常以染色体或染色体外DNA为材料,产生特异的或随机的多态性.如DNA限制性片段长度多态性分析(RFLP)、脉冲凝胶电泳技术是非常有效的,但二者都受到耗时及需要昂贵设备等因素的限制,不适于临床实验;rRNA基因的DNA探针技术也适于流行病学研究,但操作较烦琐;Srull[4]等率先把rRNA基因的限制性片段长度多态性(RFLP)分析应用于实践,并称为ribotyping.利用rRNA为基础的广谱探针,分析Southern杂交后呈现的染色体探针指纹谱,已被众多研究者用作描述细菌特征和菌株分型(ribotypes)的一种方法.
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脉冲凝胶电泳技术在肺炎克雷伯菌分型中的应用
肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)为周围环境及人肠道、呼吸道长居菌群,也是常见的机会病原菌.
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变性梯度凝胶电泳技术及其在口腔微生物检测中的应用
口腔微环境是细菌适宜的栖息地,大约有七百余种细菌,构成了一个复杂多样的微生态系统[1].其中某些微生物是导致龋病、牙髓病、牙周病等口腔常见感染性疾病的主要病原菌,准确快速检测口腔微生物群落的多样性和动态性,进而探明导致这些疾病发生发展并影响预后转归的微生物特性成为预防及治疗口腔疾病的重中之重.
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人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定
目的:从人LAK细胞分离纯化和鉴定小分子抗菌多肽.方法:用Hypaque-Ficoll梯度离心法从人外周血分离单核白细胞,经IL-2和PHA刺激培养后,5%乙酸匀浆细胞获取酸溶性提取物,应用制备尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化多肽,N-端氨基酸测定和质谱分析鉴定其分子特性.免疫荧光化学、ELISA和Western Blotting方法进行定位分析.
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尿蛋白琼脂糖凝胶电泳及临床应用
1997年底我们引进了法国Sebia公司的全自动电泳扫描系统,建立了尿蛋白琼脂糖凝胶电泳技术并应用于临床.现报告如下.