首页 > 文献资料
-
成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养与免疫学特点
目的 探讨成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养方法及嗅鞘细胞(OECs)的免疫学特点. 方法 通过手术取成人嗅区黏膜7例,将其消化为单个细胞后采用差速贴壁法除去成纤维细胞.倒置显微镜下行形态学观察,并利用p75、S100、GFAP抗体对嗅鞘细胞进行免疫荧光化学染色,共焦显微镜下进行各种抗体阳性率的统计.结果 共焦显微镜下可见嗅黏膜细胞中S100和p75阳性细胞多见,GFAP阳性细胞在嗅黏膜细胞中较少见.一般在同一细胞上可见S100和p75共同表达,而GFAP与S100、p75未见有共同表达现象;p75阳性细胞胞体大小和形态也大不相同.经统计S100和p75阳性细胞的平均百分率为(35.0±8.3)%. 结论成功进行了成人鼻腔嗅区黏膜细胞的分离培养.
-
人参总皂苷调控中风后巢内细胞对神经干细胞的作用
目的：：中风是一种严重危害人类健康的疾病,神经干细胞能够促进中枢神经系统功能的修复。神经干细胞的增殖、分化、迁移需要干细胞niche的调控,前期实验发现人参总皂苷可以显著增加中风后神经干细胞的数量。体外模拟神经干细胞niche内星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞对神经干细胞的影响,以研究人参总皂苷是否能作用于星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞而促进中风后神经干细胞的分化,修复脑损伤？将脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞和神经干细胞共培养,观察模拟神经干细胞niche内复杂微环境条件下,人参总皂苷能否使脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞分泌的VEGF增多,从而促进中风损伤的神经干细胞分化。方法：取1-3 d的新生SD大鼠,分离培养星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞。取孕16 d SD大鼠,分离培养神经干细胞。利用Transwell装置,将神经干细胞、星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞共培养。制备神经干细胞缺氧6h的脑中风模型。用含1μg/ml的人参总皂苷培养基作用1d,设置空白对照组。MAP-2标记成熟神经元,GFAP标记星形胶质细胞。用细胞免疫荧光化学染色检测缺氧6h神经干细胞分化后的MAP-2和GFAP阳性细胞比例,ELISA检测人参总皂苷对星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞共培养上清中VEGF含量的影响。结果：与脑微血管内皮细胞、星形胶质细胞共培养条件下,与空白对照组比较,人参总皂苷可显著增加MAP-2阳性细胞比例( P<0.01)；人参总皂苷作用于星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞48 h可显著上调VEGF表达( P<0.01)。结论：人参总皂苷作用于脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞可增加中风后神经干细胞向神经元定向分化并促进其成熟,可能与人参总皂苷调控脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞VEGF分泌,改善神经干细胞niche微环境有关。
-
胰腺癌组织转录因子GATA-6表达及其意义的探讨
目的:探讨胰腺癌组织GATA-6的表达及其对胰腺癌发生、发展的可能作用及临床意义.方法:采用免疫组化检测33例胰腺癌、15例慢性胰腺炎和6例正常胰腺组织GATA-6蛋白的表达；免疫细胞荧光法检测胰腺癌细胞株Panc-1、BxPC-3和SW1990及正常胰腺导管上皮细胞H6C7的GATA-6蛋白表达情况；Real-time RT-PCR技术检测上述细胞株的GATA-6 mRNA表达；并分析GATA-6与胰腺癌临床病理参数的关系.结果:GATA-6蛋白在胞核中表达,胰腺癌组织GATA-6的阳性表达率(88.9％)显著高于慢性胰腺炎(40.0％)和正常胰腺组织(16.7％),P＜0.01,但与性别、年龄、分化程度和临床分期均无显著性相关；3种胰腺癌细胞株均有GATA-6蛋白表达,而正常胰腺导管上皮细胞无表达；3种胰腺癌细胞株GATA-6 mRNA表达也明显高于正常胰腺导管上皮细胞,P＜0.05.结论:GATA-6在胰腺癌组织及细胞中呈高表达,提示GATA-6在胰腺癌的发生、发展中可能起一定作用.
-
双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能的影响
背景：有研究表明双膦酸盐可抑制破骨细胞的骨吸收功能，但对其骨吸收功能关键细胞因子组织蛋白酶K是否产生作用，至今少有报道。
目的：观察双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能影响。
方法：用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养破骨细胞。实验分2组：对照组加入质量浓度100μg/L核因子κB受体活化因子配体进行诱导至收获细胞，双膦酸盐组在对照组的基础上加入10-7 mol/L阿仑膦酸盐处理至收获细胞。培养第7天检测各组破骨细胞生成和骨吸收功能，培养72 h免疫荧光检测两组组织蛋白酶K表达差异，Western blot检测组织蛋白酶K蛋白表达情况。
结果与结论：两组均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞生成，并在牙本质磨片上形成吸收陷窝；但对照组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于双膦酸盐组(P<0.01)。免疫荧光检测组织蛋白酶K表达对照组强于双膦酸盐组(P<0.01)；Western blot检测组织蛋白酶K表达双膦酸盐组低于对照组(P<0.01)。结果证实，双膦酸盐通过抑制组织蛋白酶K因子的表达，阻碍破骨细胞的骨吸收功能。 -
ATPase F1α在人结直肠癌组织和细胞株中的表达及其意义
目的:观察人结直肠癌组织和细胞株中ATPase F1α的表达,并探讨其意义.方法:应用免疫组化EnVision法测定收集自长海医院2007年8月至12月的44例结直肠癌组织及癌旁组织手术切除标本中ATPase F1α的表达;半定量RT-PCR方法检测8例结直肠癌及癌旁组织中ATPase F1α mRNA的表达水平.采用免疫荧光法检测ATPase F1α在人结肠癌LoVo细胞株胞膜的表达;采用CCK-8活细胞计数法检测抗ATPase F1α抗体对LoVo细胞增殖的抑制作用.结果:44例结直肠癌组织中ATPase F1α的表达显著高于癌旁组织(P<0.01);44例结直肠癌组织中ATPase F1α的中高度表达有35例(79.5%),癌旁配对组织的中高度表达为15例(34.1%).8例结直肠癌组织中ATPase F1α mRNA的表达明显高于癌旁组织(P<0.01).ATPase F1α在结直肠癌组织中的阳性表达率高于患者术前血浆CEA阳性率(P<0.01),而与患者年龄、性别、肿瘤的临床分期、淋巴结转移、远处转移、肿瘤的部位、分化程度等均无关(P>0.05).结肠癌LoVo细胞株胞膜上可见颗粒状分布的ATPase F1α,ATPase F1α抗体对LoVo细胞的增殖活性有明显的抑制作用(P<0.01).结论:人结直肠癌组织和细胞株均高表达ATPase F1α,其作为肿瘤抗原,有可能成为结直肠癌靶向治疗的新靶点.
-
人非小细胞肺癌F1ATPase-α的表达及临床意义
目的:研究人类非小细胞肺癌(NSCLC)组织中ATP合酶F1ATPase-α的表达,并探讨其临床意义.方法:(1)以EnVision免疫组织化学方法检测38例NSCLC配对标本、7例肺良性肿瘤与肺炎性病变标本的F1ATPase-α表达情况.(2)应用RT-PCR方法检测12例NSCLC组织、癌旁肺组织中F1ATPase-α的mRNA表达.(3)用免疫荧光法检测F1ATPase-α在正常支气管上皮细胞与A549细胞胞膜中的表达. 结果:(1) F1ATPase-α在肺癌组织呈中高度表达者36例(36/38),低度表达2例;癌旁正常配对组织成呈中高度表达11例(11/38),低度表达27例;7例肺良性病变组织全部低度表达.肺腺癌F1ATPase-α的高表达显著高于肺鳞癌(11/16 vs 5/20,P＜0.05).F1ATPase-α高表达率在肿瘤不同部位、分化程度、大小、淋巴结转移及临床分期之间差异无统计学意义.(2) 12例肺癌组织中F1ATPase-α mRNA相对表达量为0.54±0.19,显著高于配对的癌旁肺组织(0.31±0.12,P＜0.01).(3) 肺癌A549细胞胞膜上有颗粒状分布的F1ATPase-α,正常支气管上皮细胞未检测到.结论:(1)F1ATPase-α在NSCLC中有相对较高的表达水平.(2)F1ATPase-α表达于非小细胞肺癌A549细胞株的细胞膜上,提示有作为靶向药物治疗分子靶点的潜力.
-
鞘内注射氟代柠檬酸和/或米诺四环素对骨癌痛小鼠脊髓胶质细胞增殖及活化的影响
[目的]研究鞘内注射星形胶质细胞抑制剂氟代柠檬酸(FC)和/或小胶质细胞特异性抑制剂米诺四环素(MI)对骨癌痛小鼠脊髓胶质细胞增殖及活化的影响.[方法]建立小鼠跟骨癌痛模型.将雄性C3H/He小鼠随机分为6组(n=10),包括:正常组、假手术组、癌痛+人工脑脊液组、癌痛+FC组、癌痛+MI组、癌痛+FC+MI组.术后每天给药1次,持续21d,并于手术当天、术后3、7、14、21d采用免疫荧光法观察各组小鼠脊髓背角小胶质细胞及星形胶质细胞的增殖及活化情况,免疫印迹半定量分析骨癌痛小鼠脊髓腰膨大段星形胶质细胞标志物GFAP及小胶质细胞标志物CD11b的蛋白含量.[结果](1)免疫荧光法:与正常组相比,癌痛组术后3d脊髓背角小胶质细胞明显被激活,术后14d脊髓背角星形胶质细胞明显被激活.癌痛组内,与ACSF组相比,MI、MI+FC组小鼠脊髓背角术后3d小胶质细胞及MI、FC、MI+FC组术后14d星形胶质细胞的活化均明显被抑制;其中MI+FC组更为显著.(2)免疫印迹结果显示:与术前对照组比较,骨癌痛组术后3d脊髓L4～L5节段小胶质细胞标志物CD11b的蛋白含量明显增加(P＜0.05),术后14d星形胶质细胞标志物GFAP的蛋白含量明显增加(P＜0.05).[结论]在本实验剂量下,鞘内注射氟代柠檬酸和/或米诺四环素,能明显抑制不同时期骨癌痛小鼠脊髓背角小胶质细胞及星形胶质细胞的增殖及活化;同时小胶质细胞抑制剂米诺四环素能很好地抑制星形胶质细胞的活化,小胶质细胞的功能状态影响星形胶质细胞增殖活化.
-
人肝细胞毛细胆管表达IL-2Rα的研究及意义
目的 了解人肝细胞毛细胆管是否表达IL-2Rα,观察其表达特异性和灵敏度.方法 对正常人肝组织、慢性乙型肝炎等不同病种人肝组织进行IL-2Rα标记,通过免疫组织化学染色、免疫荧光化学染色及免疫电镜3种方法 观察其表达.结果 免疫组化染色法和免疫荧光染色法显示IL-2Rα标记人肝细胞膜毛细胆管面定位正确,无非特异性染色,而肝细胞膜的血窦面、细胞质、细胞核不被IL-2Rα标记.酶标记免疫电镜显示人肝细胞膜毛细胆管面有明显电子致密物沉积.结论 人肝组织毛细胆管确实表达IL-2Rα,其特异性和灵敏度均优于CEA(多克隆抗体).
-
人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定
目的:从人LAK细胞分离纯化和鉴定小分子抗菌多肽.方法:用Hypaque-Ficoll梯度离心法从人外周血分离单核白细胞,经IL-2和PHA刺激培养后,5%乙酸匀浆细胞获取酸溶性提取物,应用制备尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化多肽,N-端氨基酸测定和质谱分析鉴定其分子特性.免疫荧光化学、ELISA和Western Blotting方法进行定位分析.
-
孕马血清促性腺激素刺激后卵巢储备功能随年龄变化的研究
目的 探讨孕马血清促性腺激素(PMSG)刺激后不同年龄组雌性大鼠血清中抗中肾旁管激素(AMH)的变化规律,探讨PMSG刺激后AMH对预测卵巢储备功能的作用.方法 SD雌性大鼠分为幼年组、成年组和老年组.PMSG注射后54 h,运用ELISA和免疫荧光化学方法,检测血清和卵巢中AMH的表达.结果 血清AMH水平,幼年组(2.92±0.55)ng/mL,成年组(1.90±0.11)ng/mL,老年组(0.80±0.08)ng/mL,成年组与幼年组(P<0.05)、老年组与幼年组(P<0.001)、老年组与成年组(P<0.001)相比,差异具有统计学意义.卵巢中卵泡总数,幼年组57.3±5.5,成年组31.6±31.6,老年组15.1±1.4,成年组与幼年组(P<0.001)、老年组与幼年组(P<0.001)、老年组与成年组(P<0.05)相比,差异具有统计学意义.AMH阳性卵泡的数量,幼年组9.2±2.0,成年组6.3±1.4,老年组4.4±0.8,呈下降趋势.结论 随着大鼠年龄增长,PMSG刺激后,卵巢中分泌AMH的生长卵泡数量减少,血清AMH水平显著降低.PMSG刺激后的AMH水平是一个较好的反映卵巢储备功能的指标.
-
NR1和GluR2在成年大鼠海马结构的共表达
目的 探讨NMDA受体NR1亚单位(NMDA/NR1)和AMPA受体GluR2亚单位(AMPA/GluR2)在正常成年大鼠海马结构的分布特征.方法 在多聚甲醛固定的海马切片上,采用免疫荧光组织化学方法染色,通过激光扫描共聚焦显微镜观察NR1和GluR2在正常成年大鼠海马结构中的表达与分布.结果 NR1和GluR2在正常成年大鼠海马结构广泛表达,并且两者免疫荧光染色阳性表达的分布基本一致,其中在CA1和CA3区的锥体细胞层以及齿状回门区的中间神经元表达强;在CA1和CA3区的分子层以及齿状回的颗粒细胞层中也有明显的NR1和G luR2免疫荧光染色颗粒的分布;但在CA3区的分子层和齿状回的多形层NR1的表达阳性强于GluR2.阳性反应主要位于神经细胞的胞膜和突起.结论 NMDA/NR1和AMPA/G luR2在海马结构中的分布特征基本一致,提示它们可能共同参与完成海马的某些重要功能.
关键词： NMDA/NR1 AMPA/GluR2 海马结构 免疫荧光化学
