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壮骨镇痛胶囊含药血浆对破骨细胞骨吸收功能的影响
目的 探讨壮骨镇痛胶囊含药血浆对破骨细胞( osteoclast,oc)骨吸收功能的影响.方法 取1日龄新生SD大鼠四肢骨髓分离培养OC,实验组加入2.5％含药血浆,对照组采用生理盐水对照血浆,运用重氮盐法检测含药血浆对OC分泌抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)的影响；运用甲苯胺蓝染色法观察含药血浆对OC形成骨吸收陷窝的影响.结果 2.5％含药血浆共育组在48h、72h、96h对OC分泌TRAP的量都小于对照血浆组且呈明显的时效关系,与对照血浆组比较,其差异具有统计学意义(P＜0.01).2.5％含药血浆组在48h、72h、96h OC的存活数低于对照血浆组,且呈明显的时效关系,与对照血浆组比较,其差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 壮骨镇痛胶囊含药血浆能够明显抑制OC的活性.
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补肾中药对破骨细胞骨吸收功能的影响
目的:探讨补肾中药对破骨细胞(osteoclast,OC)骨吸收功能的影响.方法:取新生(出生24h内)SD乳鼠四肢骨髓分离培养OC,实验组加入不同(高、中、低)剂量的补肾中药血清,对照组采用无中药血清,采用酶动力学法测定培养上清中抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRACP)的活性;利用甲苯胺蓝对骨吸收陷窝染色并在图像分析仪下测定骨吸收陷窝的面积和数目.结果:补肾中药高、中剂量组均降低TRACP活性,减少骨片上骨吸收陷窝的面积及数目,与空白对照组比较差异有显著性意义(P＜0.01),高、中剂量组间比较差异有显著性意义(P＜0.05),以中剂量组作用为明显.结论:补肾中药可降低破骨细胞培养上清中的TRACP活性,减少骨吸收陷窝面积及数目,达到抑制破骨细胞的骨吸收功能目的.
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氟对破骨细胞骨吸收陷窝的影响
目的观察氟对大鼠破骨细胞(Osteoclast, OC)形成的骨吸收陷窝的影响.方法通过机械分离新生大鼠乳鼠四肢长骨方法体外培养OC,并于1 d后加入含不同浓度氟的培养基,观察氟对OC形成的骨吸收陷窝数量及面积的影响.结果随染氟剂量的增加,骨吸收陷窝数及陷窝面积逐渐增加,各剂量组与对照组比差异均有显著性(P＜0.05),其中尤以4.0 mg/L染氟组为明显(P＜0.01).结论在一定的剂量范围内,随染氟剂量的增加,OC的骨吸收作用是增强的.
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福莫特罗和ICI118551对大鼠成熟破骨细胞骨吸收功能的影响
目的 研究选择性β_2肾上腺素能激动剂福莫特罗(Formoterol)和阻滞剂ICI118551对体外培养大鼠成熟破骨细胞(osteoclast,OC)功能的影响,探讨β_2肾上腺素能受体信号对骨代谢的影响.方法 取清洁级出生24 h内的SD乳大鼠,长骨干骨髓腔内壁机械分离成熟OC后分别加入不同浓度(10~(-5) mol/L～10~(-9) mol/L)的 Formoterol和ICI118551,以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞形态,甲苯胺蓝染色计数骨片上的骨吸收陷窝数目,Image-Pro Plus 6.0图像软件分析骨片上骨吸收陷窝面积.结果 破骨细胞与骨片共培养6天,不同浓度的Formoterol与对照组相比均可增加骨片上OC的骨吸收陷窝数目和面积;随着ICI118551浓度的提高骨片上骨吸收陷窝的数目和面积逐渐减少.结论 β_2肾上腺素能受体激动剂可促进体外培养OC的骨吸收功能,阻滞剂对OC的骨吸收功能有抑制作用,且呈剂量依赖性.
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阿仑膦酸钠抑制破骨细胞体外吸收的研究
本研究利用体外分离培养的兔破骨细胞,观察第三代双膦酸盐阿仑膦酸钠(alendronate)对骨吸收的抑制作用.将alendronate加入培养液中使其终浓度为0M,1μM,10μM,100μM.同时观察两组用alendronate盐溶液100μM,50μM浸泡的骨片对破骨细胞吸收功能的影响.用倒置光相差显微镜在不同时间点观察计数骨吸收陷窝并拍照.结果随着培养液内alendronate浓度增高,骨吸收陷窝数减少,面积亦减少.而用alendronate浸泡过的骨片上未见骨吸收陷窝.说明alendronate具有抑制破骨细胞体外骨吸收的作用.
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双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能的影响
背景：有研究表明双膦酸盐可抑制破骨细胞的骨吸收功能，但对其骨吸收功能关键细胞因子组织蛋白酶K是否产生作用，至今少有报道。
目的：观察双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能影响。
方法：用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养破骨细胞。实验分2组：对照组加入质量浓度100μg/L核因子κB受体活化因子配体进行诱导至收获细胞，双膦酸盐组在对照组的基础上加入10-7 mol/L阿仑膦酸盐处理至收获细胞。培养第7天检测各组破骨细胞生成和骨吸收功能，培养72 h免疫荧光检测两组组织蛋白酶K表达差异，Western blot检测组织蛋白酶K蛋白表达情况。
结果与结论：两组均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞生成，并在牙本质磨片上形成吸收陷窝；但对照组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于双膦酸盐组(P<0.01)。免疫荧光检测组织蛋白酶K表达对照组强于双膦酸盐组(P<0.01)；Western blot检测组织蛋白酶K表达双膦酸盐组低于对照组(P<0.01)。结果证实，双膦酸盐通过抑制组织蛋白酶K因子的表达，阻碍破骨细胞的骨吸收功能。 -
组织块法与传统破骨细胞培养方法对骨吸收功能的比较研究
目的:比较组织块法与传统破骨细胞培养方法对破骨细胞骨吸收功能的影响.方法:用组织块法与传统破骨细胞培养方法进行破骨细胞培养,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色鉴定破骨细胞,超声去除骨片上细胞后,骨片经1％甲苯胺蓝染色,光镜下观察骨片上吸收陷窝.根据骨片上陷窝数目、面积以及深度定量比较两组破骨细胞骨吸收功能.结果:吸收陷窝经甲苯胺蓝染色后光镜下可清晰识别,组织块法在骨片上的吸收陷窝数目比传统法明显少,而且骨片上陷窝面积及深度也比传统法小而浅(P＜0.05).结论:组织块法培养的破骨细胞无论从数量上还是从功能上均没有传统法培养的好.数量大的成骨细胞对共培养破骨细胞骨吸收功能起到负面作用.
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类风湿关节炎患者破骨细胞分化情况及其与骨破坏的关系
目的:观察类风湿关节炎(RA)患者破骨细胞(OC)的分化情况,并分析其与RA骨破坏的关系.方法:采用密度梯度离心法分离12例RA患者和10例健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC),经核因子 κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导培养为OC,进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并计数阳性细胞数,分别通过甲苯胺蓝染色及扫描电镜观察骨吸收陷窝;对RA组患者进行Sharp评分及骨密度(BMD)检测,将RA组外周血生成的OC数量与Sharp评分、BMD(T值)进行相关性分析.结果:RA组和对照组生成的OC形态相似;RA组TRAP阳性细胞数(个/10个视野)为127.67±6.96,较对照组79.40±3.86显著升高(P<0.05);RA组OC骨吸收功能较对照组明显增强;RA组OC数量与Sharp评分呈显著正相关(r=0.810,P=0.001),与BMD(T值)呈显著负相关(r=-0.685,P=0.014).结论:RA患者PBMC向OC分化的能力明显增强,RA患者OC的分化能力与RA骨破坏密切相关.
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体外应用不同方法培养破骨细胞的实验对比研究
目的:研究体外应用不同培养方法对所生成的破骨细胞数量及功能的影响.方法:体外采用3种方法培养破骨细胞:A组小鼠骨髓细胞中加入10 ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)培养24 h,未贴壁细胞30 ng/ml M-CSF预诱导3d后,50ng/ml M-CSF+ 100 ng/ml核因子κB受体活化因子配体(RANKL)继续诱导；B组小鼠骨髓细胞与小鼠颅骨成骨细胞以10∶1的比例混合培养,加入1×10-6 mol/L前列腺素E2(PGE2)和1×10-8 mol/L维生素D3(VitD3)；C组小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7中加入100 ng/ml RANKL诱导培养.检测每组细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色情况及牙本质磨片吸收陷窝情况,Real-timePCR检测各组破骨细胞NFATc1 、c-Fos表达情况.结果:各组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝.B组所形成的破骨细胞数量多,C组次之,A组少；B组骨吸收陷窝数目多,陷窝总面积大,A组其次,C组差；B组NFATc1、c-Fos表达高于C组及A组,A组表达差.结论:3种培养破骨细胞的方法相比较,B组在破骨细胞分化和吸收功能方面优于A、C组.A、C组相比较,A组培养的破骨细胞骨吸收功能更强,C组所培养的破骨细胞分化更佳.
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软骨下骨骨吸收陷窝对骨关节炎的影响及中药干预研究
目的:探讨在病理状态下软骨下骨骨吸收陷窝对软骨病理变化和软骨下骨的影响及中药对其的影响.方法:5月龄未孕SD雌性大鼠24只建立大鼠膝骨关节炎模型,通过药物干预,采用HE染色记数软骨下骨骨吸收陷窝数目和分级,进行软骨组织金属蛋白酶-13(MMP13)的表达检测和软骨下骨骨组织计量学分析.结果:2级陷窝数目:与B组比较,A、D组2级陷窝数目减少,差异有非常显著性意义(P＜0.01);与A组比,C、D组均有不同程度升高,差异有显著性意义(P＜0.05).与A组比较,B、C、D组MMP13显色指数升高,差异有非常显著性意义(P＜0.01);与B组比较,C、D组MMP13显色指数值降低(P＜0.01);与C组比较,D组MMP13显色指数值降低(P＜0.01).BV/TV%:与A组比较,B、C组BV/TV%值升高显著(P＜0.01);与B组比较,C、D组BV/TV%值降低(P＜0.01).Tb.Sp:与B组比较,A、D组Tb.Sp值升高显著(P＜0.01).结论:软骨下骨骨吸收陷窝可作为软骨下骨骨重建的通道之一,早期应用中药可抑制骨形成增加,减轻软骨下骨硬化,减少2级骨陷窝的形成降低软骨降解的程度.
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葛根素对体外破骨细胞性骨吸收的影响
目的研究葛根素对体外破骨细胞性骨吸收的影响.方法分离破骨细胞,与牛骨磨片共培养,分别加入10-8、10-7、10-6 mol/L的葛根素,以17β-雌二醇10-8 mol/L为阳性对照药,利用相差倒置显微镜观察破骨细胞吸收牛骨磨片的情况.于培养3、5、7 d计数各组骨吸收陷窝数目的变化,并进行显微摄片和图像分析.结果与正常对照组相比,葛根素10-8、10-7、10-6 mol/L及17β-雌二醇10-8 mol/L能使体外培养破骨细胞性骨吸收数目和吸收陷窝面积呈剂量依赖性减少.结论葛根素在体外能直接抑制破骨细胞性骨吸收.
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1,25(OH)2维生素D3诱导大鼠骨髓单核细胞形成破骨细胞
目的 观察1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2 D3]诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成多核破骨细胞的作用.方法 实验分为单核细胞诱导组和全骨髓诱导组,每组各10只大鼠.密度梯度离心法分离大鼠骨髓中的单核细胞,α-MEM培养液中加入10-8 mol/L的1,25(OH)2 D3诱导单核细胞向破骨细胞分化.利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、倒置相差显微镜和扫描电镜,观察诱导不同时相TRAP阳性(TRAP+)多核细胞的形态学特征、特异性酶表达、以及骨吸收陷窝.进而计数诱导的破骨细胞数量,鉴定其功能活性,并与全骨髓诱导方法比较.结果 骨髓单核细胞诱导组在培养第7 d出现TRAP+多核细胞,第14 d TRAP+多核细胞数量达峰值,第21 d TRAP+多核细胞数量开始减少.从培养第14 d到第23 d,单核细胞诱导组TRAP+多核细胞数量多于全骨髓诱导组(P＜0.05);培养第10 d到第23 d单核细胞诱导组骨吸收陷窝数量多于全骨髓诱导组 (P＜0.05).单核细胞诱导组破骨细胞数量高峰期可持续7 d,全骨髓诱导法仅持续3 d.结论 1,25(OH)2 D3能够诱导成年大鼠骨髓来源的单核细胞形成破骨细胞;所诱导的破骨细胞的数量和峰值持续时间、以及骨吸收活性均高于全骨髓诱导方法.
