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3种不同方法对入境旧书中携带蜡样芽孢杆菌的检测分析
目的 对一株从美国入境旧书中分离的菌株进行鉴定.方法 从旧书表面采集样本分离获得一株菌株,分别采用VITEK生化鉴定、16s rDNA序列分析法及特异性引物PCR3种方法进行鉴定.结果 VITEK生化鉴定判定可能属于蜡样芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌或蕈状芽孢杆菌的一种.16s rDNA通用引物PCR检测结果显示该菌株与芽孢杆属同源性高达99%.特异性引物PCR检测结果判定为蜡样芽孢杆菌.结论 初筛和特异性检测方法相结合,可以有效的对入境货物携带的致病微生物进行鉴定.
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温州口岸不同蝇种在不同季节与不同场所携带肠道致病菌隋况分析
[目的]通过了解温州口岸蝇类携带肠道致病菌情况的研究,为媒介生物防制和传染病监测工作提供科学依据.[方法]2007年1-12月在温州机场、龙湾码头、七里港码头3个地方,选择生活区、食堂、垃圾场作为调查点.将各点捕获的蝇类分类、分组后,对蝇体表、体内携带的细菌进行定量培养和鉴定.[结果]蝇类体表、体内携带的细菌很多,但绝大部份为人体肠道正常菌和条件致病菌.其中(大肠埃希菌除外)以变形杆菌属和普罗威登菌属为常见;其次为哈夫尼菌属和肠杆菌属等细菌;偶有检出沙雷菌属、摩根菌属、假单胞菌属、产碱杆菌属等的细菌.[结论]蝇类携带的细菌与其孳生环境密切相关,故搞好环境卫生是防止蝇类机械性传播疾病的关键.
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副溶血弧菌快速检测的进展及其应用
副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus,简称VP)是一种广泛分布于海洋与盐湖中的嗜盐性细菌,海产品中常有此菌,它是引起食源性疾病的主要病原之一,是我国沿海地区食物中毒和夏季腹泻的重要病原[1].由于我国物流频率迅速增加,内地省份也与沿海地区一样,频繁报告由VP感染引起的消化道疾病,严重威胁人们的身体健康并造成经济财产的巨大损失.为有效控制病原的发生扩散,准确即时的检测手段正是预防控制VP传播的关键所在.通常鉴定方法是分离培养、镜检观察、生化鉴定、嗜盐性试验等,不仅耗时,且操作复杂,灵敏度有限.现代分子生物学方法具有特异性高、快速灵敏的优势.因此,逐渐成为现代检验学的发展趋势.国外已将分子生物技术引入食品检验中[2],我国学者也已对食品VP的分子生物学检测进行了研究和应用[2,3].
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旋转恒温箱在快速细菌培养及鉴定中的应用
目的:探究分析旋转恒温箱进行快速细菌和鉴定的实用性.方法:选取本县人民医院在2017年1月~2017年12月收治的怀疑沙门杆菌感染的败血症患者的血液标本,经BACTEC9120仪培养确定为阳性的50株细菌为当做临床标本,选取已知菌株和标准菌株组成模拟标本100份,随机分为两组,研究组采用旋转恒温箱进行培养,对照组采用普通恒温培养箱进行培养.结果:研究组阳性显示时间多在24h之内,显著低于对照组96h之内(P<0.05),两组快速法判读结果相同,快速法结果判读所需时间少于常规法(P<0.05).结论:旋转恒温箱能够减少快速细菌培养和鉴定的时间,应用效果理想.
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从一例腹泻患者中检出山夫登堡沙门菌
2002年8月北京市西城区一餐馆内3名民工食炒饼6 h后出现呕吐、腹泻等症状,采取3人未用药前粪便标本,经常规方法检测,结果从1例患者中检出一株山夫登堡沙门菌.将该患者粪便在亚硒酸氢盐培养基增菌18~24 h,转SS平板培养18~24 h,从SS平板上挑取单个菌落,接种三糖铁培养基,37℃培养18~24 h,反应为斜面产碱,高层产酸产气.H2S阳性,动力阳性.经生化鉴定邻硝基苯一半乳糖甙、脲素、色氨酸、肌醇、蔗糖、明胶、苦杏仁甙、氧化酶均阴性;精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、柠檬酸钠、硫化氢、丙酮酸盐、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、鼠李糖、阿拉伯糖均阳性.
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一起食物中毒事件中副溶血弧菌的分子生物学、血清学和毒力研究
对分离自一起食物中毒事件中的31株副溶血弧菌的tdh和trh毒力基因进行了检测,同时采用血清学分型方法和ERIC-PCR基因分型方法进行克隆分析.分离菌株来自病例肛拭(33份)、食品(59份)和餐具涂抹(12份)标本.生化反应鉴定采用VITEK系统和API 20E生化鉴定条.共分离得到31株副溶血弧菌,其中1株来自食品,30株均分离自患者肛拭.
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致腹泻大肠埃希菌引起急性肠道感染调查分析
为检测急性肠道感染性腹泻中大肠埃希菌并了解其在人群中的分布状况,我们于2000年5~10月收集了我院肠道门诊急性感染性腹泻病人543份粪便标本进行分离培养、生化鉴定和血清凝集实验以检测致腹泻大肠埃希菌,并用10种抗生素检测该菌的药物敏感性,报告如下.
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多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳技术辅助鉴定肠炎沙门菌
伤寒沙门菌和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌引起肠热型感染,而肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、鸭沙门菌等则多引起急性胃肠炎型感染.准确的沙门菌菌株鉴定对于传染病的预防控制有重要意义.笔者应用肠杆菌科细菌鉴定系统ATB ID32E和API 20E对一起食源性疾病暴发事件中分离到的2株沙门属菌株及1株分离自住院患者的沙门属菌株进行生化鉴定,同时进行血清凝集试验.
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实时荧光PCR快速检测沙门菌
60份食品样本同时用常规国标法、科玛嘉平板分离法和实时荧光PCR法进行沙门菌检测研究.按国标GB/T4789.4-2003对60份食品样本进行沙门菌检测,在分离培养的同时将增菌液划线于科玛嘉沙门菌显色平板,挑可疑菌落(紫色或紫红色)进一步试验,所有分离菌株用SENSITITRE微生物鉴定分析系统进行生化鉴定.用Invitrogen提取试剂盒提取细菌DNA,具体方法按说明书操作,鼠伤寒沙门菌作为参考菌株经纯培养后制成菌悬液,同时提取DNA.
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肥达试验免疫血清制备的探讨
对伤寒、副伤寒的临床实验室诊断主要包括细菌培养分离、生化鉴定及血清学试验.细菌分离培养可能由于被检者用过抗菌药物,结果有时成阴性,或者由于检查过程复杂难以达到早期诊断的目的,此时,血清学试验往往具有重要的诊断价值.因此肥达反应迄今仍然是临床诊断伤寒的重要实验室指标.人患伤寒、副伤寒后,约经1~2周,血清内产生相应抗体,此种抗体在体外与相应细菌(伤寒、副伤寒杆菌)结合时,能使细菌发生凝集.肥达试验即是依据此原理用已知伤寒沙门菌菌体(O)抗原和鞭毛(H)抗原,以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌和希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作试管或微孔板凝集试验,测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验[1].在我们实验教学中,通常采用免疫后的兔血清米代替人血清进行肥达反应,通过实验现象的观察和实验结果的分析,帮助学生理解肥达实验的原理、操作方法、结果判断及临床意义.现将伤寒、副伤寒免疫血清的制备过程简介如下.
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肠出血性大肠埃希杆菌O157:H7溶血毒素的检测方法
我们曾和美国马利兰大学发展了鉴定肠出血性大肠埃希杆菌的探针,其特异性和灵敏性极高。经序列分析发现该探针是溶血素基因的部分片段。我们又从溶血表型进一步完善了这一鉴定方法。由于其溶血条件特殊,人们一直认为该菌不溶血。我们将经验总结报告如下。 一、材料和方法 1.菌种来源:肠出血性大肠埃希杆菌882364,1986年江苏省徐州市卫生防疫站分离,经本实验室鉴定,并保存。851006为本实验室筛选到的溶血素基因的天然缺失株(对照菌株)。 2.菌株鉴定:生化鉴定为大肠埃希菌。O157单抗和H7血清为本实验室制备。用O157:H7 PCR诊断试剂盒检测882364、851006的溶血素基因,882364的扩增结果为阳性,851006为阴性。 3. 血平板的制备[1]:脱纤维羊血用磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次,加入至终浓度为3%。培养条件:于混合气(8%CO2,40%H2,52%N2)环境中37℃培养16 h,然后置21℃空气中6 h。 4.液体溶血活性检测[2]:(1)标准1%羊红细胞的制备;(2)活化菌体;(3)活性检测。 二、结果血平板检测的结果需对光观察,如发生溶血,可见菌落周围透明溶血环。液体溶血检测的结果如只需定性,则A值大于完全不溶血管即可;如需相对定量,可用溶血单位(HU)表示,一个溶血单位(HU)为裂解50%羊红细胞的检测样品的量。
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应用通用寡核苷酸芯片技术检测病原菌的初步研究
常规的细菌检测通常包括细菌的分离培养、染色和生化鉴定,常规方法通常需要24 h左右才能获得较确切的结果,会延迟正确的诊断和治疗,因此对于临床而言,建立一种快速且特异性强的微生物检测方法是十分必要的.生物芯片是一种新兴的高通用技术,在面积较小的载体,如玻片上可以实现对多种目标基因的同时检测[1].本研究对利用寡核苷酸芯片技术实现病原菌的通用检测的可能性进行了探讨.
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肌肉注射引起偶发分枝杆菌局部感染的细菌学鉴定
1998年8月~1999年3月,福建省南平市樟湖镇,先后发生了59例患者因肌肉注射引起的局部细菌感染,且久治不愈,主要表现为感染部位肿痛,无发烧,局部组织病理学检查表现为脓肿及肉芽肿小结节形成的空泡细胞条带。所有患者感染部位渗出液标本经培养均分离出一种分枝杆菌,经鉴定确定为偶发分枝杆菌(M. Fortuitum)。报道如下。 一、材料和方法 1.标本来源:59例因肌肉注射引起局部感染久治不愈而收治入院的患者。临床根据患者情况不定期抽取炎性渗出液作细菌培养及鉴定,先后送检96份标本(每个患者先后送检1~3份标本)。 2.细菌鉴定仪器及试剂盒:Hemoline双相血培养瓶,细菌生化鉴定卡(ATB和API)和药敏卡(Rapid ATB STAPH和ATB G-),细菌鉴定仪均由生物梅里埃公司提供。菌株的生物学及生化反应特性的鉴定参照有关文献[1-3]。药敏纸片由浙江省军区后勤部卫生检定所生产。 3.标本接种及鉴定:将96份感染部位渗出液标本接种Hemoline双相血培养瓶和改良罗氏结核菌培养基,同时接种麦康凯、SS、普通营养琼脂和血琼脂平板等,置28℃需氧培养。所有分离出的菌株接种API、ATB生化鉴定卡作出初步鉴定,对符合分枝杆菌属的菌株再按上述文献中有关分枝杆菌分类方法作进一步的生物学及生化特性鉴定。对确定为偶发分枝杆菌的菌株再接种上述药敏试验卡,37℃孵育36~48 h后用ATB鉴定仪或手工判读药敏结果,同时有部分药物用药敏纸片扩散法作对照检测。 二、结果 1.生物学特性:从患者感染部位采取的96份标本,均检出分枝杆菌,各菌株的生物学特性基本相同。标本接种Hemoline双相血培养瓶培养48 h后,液体明显混浊,有薄层菌膜形成,半固体斜面生长出灰白色菌落,直径1~2 mm。在改良罗氏培养基和血平板上,28℃培养48 h后,菌落形态及大小与上述相似,继续培养后,菌落表面逐渐干燥和粗糙。在SS和麦康凯平板上,生长缓慢,培养3天后,形成1~1.5 mm大小的菌落,呈紫红色。各菌株在pH 4~11.5培养可生长,但以pH 8.0~10.0佳。涂片革兰染色阳性,菌体呈杆状或球杆状,长约1~3μm;抗酸染色阳性或弱阳性。
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本期寄语
传染病的诊断:在新老技术应用与整合中前行
人类对于传染病(含感染病)认识的进步在很大程度上取决于对病原微生物认识的进步。从早显微镜下观察、病原分离培养、生化鉴定,到现代免疫学发展起来的血清学检测,以及分子生物学技术、质谱技术及计算机和互联网技术,这种新技术的应用及新老技术的不断整合,使得人们对病原微生物的认识一步步加深。 -
本期寄语
一个可能颠覆人类对疾病和健康再认识的研究领域--人体微生态
自从地球原始环境中出现第一个生命形式—病毒,地球上的生命便开始了漫长进化演变过程,进而形成各种微生物和其他生命形式,人类也是这个进化的分支。在历次进化的分道扬镳中,进化中的微生物与其他动植物宿主结伴而行,影响这些动植物包括人类的生命活动,逐渐形成了与宿主相互依赖、相互制约的关系。人们对这种影响的真正认识开始于微生物培养技术的出现。病原体的发现开创了现代传染病学,同时人们也逐渐认识到人体正常菌群对于健康和疾病的影响。但是由于微生物(主要是细菌)研究技术长期受限于培养和生化鉴定,而大多数人体细菌在目前条件下仍无法培养,因此,人体微生态研究经历了几十年的无重大突破阶段。 -
采用16S rRNA序列分析法鉴定非结核分支杆菌
对第四次全国结核病流行病学抽样调查获得的经生化鉴定为非结核分支杆菌的49株菌株进行了16S rRNA序列分析法鉴定,并与生化法进行了比较.
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四种药品微生物快速鉴定技术的方法学一致性评价
目的 对4种药品微生物快速鉴定技术的鉴定结果进行比较分析,建立一种用于药品微生物鉴定技术的评价方法.方法 以19株标准菌株和10株野生菌株为参考,分别采用API微生物鉴定系统、VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统、RiboPrinter全自动微生物基因指纹鉴定系统和MicroSeq ID DNA测序系统对其进行不少于50次的鉴定,计算各鉴定方法在属水平和种水平上的准确性及重现性.结果 4种鉴定技术均可用于药品控制菌的鉴定,在非控制菌中存在明显差异,分子生物学技术的准确性和重现性均优于生化鉴定技术.结论 实验室应对微生物鉴定系统进行确认,谨慎评价所用方法及其使用范围.
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PNP-葡糖苷酸钠试剂盒快速检定药品中大肠杆菌的方法研究
常规方法检验药品中的大肠杆菌,从混合菌分离到生化鉴定一整套实验一般需时4~5
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肠杆菌科细菌生化鉴定系统的研制及评价分析
目的 探讨肠杆茵科细茼生化薹定系统的研制并对其性能进行评价.方法 细菌鉴定采用常规API微生物鉴定系统(对照组)与我院自制观察系统(观察组),将自行研究的生化基质置聚苯乙烯条中脱水制干组合成鉴定条,辅以细菌编码技术,对120株临床菌株进行鉴定,并与API鉴定结果进行比较.结果 11株标准菌株接种于本系统,8~24h的观察结果符合率为92.4%~98.6%.本系统与API2种方法鉴定技术水平的符合率为95%.经检验两者间无呈著性差异(P>0.05).结论新研制系统鉴定肠杆菌科细菌快速、简单,能很好的为临床提供准确实验依据.
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AHL感应菌株生物检测铜绿假单胞菌变异株
铜绿假单胞菌(Pseudomona aeruginosa)是一种以N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactone,AHL)为信号分子调控自身群体感应行为的人体机会致病菌[1].近些年,在临床分离的非发酵病原菌中,铜绿假单胞菌检出率高[2].铜绿假单胞菌的诊断及合理用药有赖于病原菌的确认,目前国内较常用的检验方法仍是生化鉴定.