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不同浓度的磷酸盐缓冲液(pH7.4)对血塞通注射液稳定性的影响分析
目的 对不同浓度的磷酸盐缓冲液(pH7.4)对血塞通注射液稳定性的影响进行对比分析,为今后的临床治疗工作提供可靠的参考依据.方法 取市售血塞通注射液和磷酸盐缓冲液,分别配制成浓度为1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%、25%的磷酸盐缓冲液的血塞通注射液,对其在80℃条件下加热6 d,而后分别在0、1、2、3、4、5、6 d时经高效液相色谱法对注射液中R1、Rgl和Rbl的含量进行测定,并对比分析测定结果,观察注射液稳定性的变化情况.结果 浓度为5%的磷酸盐缓冲液配制的血塞通注射液的稳定性好,R1、Rgl和Rbl的含量高.结论 不同浓度的磷酸盐缓冲液会对血塞通注射液的稳定性产生一定程度的影响,临床在用药过程中应给予关注.
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pH对强化酸性戊二醛杀灭细菌芽胞效果影响的试验观察
用碳酸氢钠调节LJ-强化酸性戊二醛(pH 4.5)溶液pH值,观察其在不同pH条件下对枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞的杀灭效果.试验时,将0.5 ml芽胞悬液与4.5 ml消毒液(对照为磷酸盐缓冲液)混匀.作用后取0.5 ml菌药混合液,加入盛有4.5 ml中和剂(含1%甘氨酸、0.5%吐温80的磷酸盐缓冲液)的试管中.中和作用10 min,作活菌计数.样本于37℃培养48 h,计数菌落数,计算杀灭率.
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2所医院物品与人员手HBsAg及HBV-DNA污染检测
于1998年、1999年的3~5月,对福州地区2所医院口腔门诊物品与人员手进行了HBsAg与HBV-DNA检测.检测时,以浸有磷酸盐缓冲液的无菌棉拭,对物品表面与人员手往返涂抹采样.随后,将棉拭头剪入2 ml磷酸盐缓冲液中.在旋涡混匀器中充分震荡后,离心(4000 r/min)5 min.取离心液,用ELISA法检测HBsAg抗原性.以样液OD值(S)与阴性对照OD值(N)的比值(S/N)>2.1,为HBsAg阳性.以上海医科大学预防医学研究所提供的非放射性分子杂交法检测HBV-DNA,当测定孔位呈现蓝紫色斑点时为HBV-DNA阳性.
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乌鲁木齐市医院医疗用品HBsAg污染调查
1998年4月与1999年4月,对乌鲁木齐市25所医院(24所综合性医院和1所专科口腔医院)医疗用品HBsAg污染进行了调查.检测时,对一般器械用无菌棉拭醮采样液(0.03 mol/L磷酸盐缓冲液,经消毒剂消毒者含相应中和剂)在表面来回涂抹10次采样,牙钻则直接放入采样液中振摇10次采样.其中,口腔器械、止血钳采3把为1份样本,剪刀、牙钻采2把为1份样本,采5根针灸针为1份样本.取采样后液体,用EIA酶免疫法(试剂灵敏度为1 ng/ml)检测HBsAg抗原性.
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高氧化还原电位酸性水贮存稳定性的试验观察
为观察由ST-6A型强氧化离子水生成器(北京水都商贸有限责任公司提供)生成的高氧化还原电位酸性水(亦称强氧化离子水,氧化还原电位为1 134 mV,pH 2.41,含有效氯20 mg/L)的贮存稳定性,将其盛于密封的医用方盘内,置室温下避光保存24 h.于保存前、后,分别取样,检测对枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞的杀灭效果.检测时,将含10 g/L蛋白胨的芽胞悬液0.1 ml与5.0 ml该酸性水原液(阳性对照为磷酸盐缓冲液)混匀.作用至规定时间,取0.5 ml菌药混合液,加入4.5 ml中和剂(为含1 000 mg/L硫代硫酸钠与1 000 mg/L卵磷脂的磷酸盐缓冲液)中,混匀.中和作用10 min,作活菌计数,计算杀灭率. 结果,该酸性水原液存放前对枯草杆菌
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韶关市医疗机构医护人员手微生物污染检测
1998年,对韶关市27所医疗机构医护人员手微生物污染进行了检测.采样时,五指并拢,用浸有采样液的棉拭在手指曲面从指根到指端来回涂擦两次,采样面积约25 cm2.将采样后棉拭头剪入10 ml采样液内.两手分别用2支棉拭采样,一采样液为生理盐水,用于检测细菌总数、沙门菌;另一采样液为含1%小牛血清磷酸盐缓冲液,用ELISA法检测HBsAg抗原性.检测结果,以细菌总数≤5 cfu/cm2(Ⅰ、Ⅱ类场所人员)或≤10 cfu/cm2(Ⅲ类场所者)或≤15 cfu/cm2(Ⅳ类场所者)为合格.沙门菌不得检出.以样本OD值(S)与阴性对照OD值(N)比值(S/N)<2.1,为HBsAg阴性.
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手术前备皮用具H B sAg污染的调查
目前,临床备皮仍常用剃毛法.对其用具HBsAg污染进行了调查.调查时,对刀片、刀架(刀柄)与应用中的肥皂,用沾有采样液(0.01 mol/L磷酸盐缓冲液)的棉拭涂抹采样,对毛刷,在盛有采样液的玻璃平皿中揉搓采样,对应用中的滑石粉,取1 g投入盛有采样液的试管内.用ELISA法检测上述采样液中HBsAg抗原性,以样本检测OD值(S)与阴性对照OD值(N)值的比值(S/N)≥2.1为HBsAg阳性.
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臭氧水溶液杀菌效果的试验观察
向臭氧水发生器注入自来水,通电5min,可产生水温24~26℃、含臭氧3.0~5.0 mg/L的臭氧水溶液。将其稀释为含臭氧0.4 mg/L的溶液用于试验。试验时,将大肠杆菌(8099)和含1%蛋白胨的金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)悬液0.5 ml与消毒液(阳性对照为磷酸盐缓冲液)4.5 ml混匀。作用至预定时间,取0.5 ml菌药混合液,加入4.5 ml中和剂(含0.5%硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液)中,混匀。中和作用10 min,作活菌计数,计算杀灭率。
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中纺AB抗菌防臭纤维布抑菌作用试验观察
中纺AB抗菌防臭纤维为聚丙烯晴的一种改性纤维,是在聚丙烯晴高分子链上接以2个带正电荷的抗菌基团而成.该抗菌基团将带负电荷的细菌包围而起到抑菌作用.检测其抑菌效果时,将大肠杆菌(ATCC25922)或金黄色葡萄球菌(ATCC 1844)悬液100μl滴加在置于平皿中该抗菌纤维布片(1.0 cm×3.0 cm,对照为不含抗菌基团的同类布片)上.作用一定时间,用磷酸盐缓冲液5 ml洗脱布片上的菌.取洗脱液作活菌计数,计算抑菌率.
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臭氧对水中细菌杀灭效果的试验观察
在实验室,用臭氧水发生器(万瑞电子仪器厂产)进行了臭氧对水中细菌杀灭效果的试验观察.试验时,将大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)或枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞的悬液0.5ml加入盛有4.5ml臭氧水(对照为含1% 蛋白胨的磷酸盐缓冲液)的试管中,混匀.
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三种消毒剂的杀菌效果及适用性比较
对本院常用的消毒剂2%(即20g/L)碱性复方戊二醛(含亚硝酸钠)、过氧乙酸及金星消毒剂(含次氯酸钠,十二烷基苯磺酸钠,含有效氯60 000 mg/L)进行了比较.采用悬液定量杀菌试验检测其杀灭微生物效果.将含10 g/L蛋白胨的枯草杆菌黑色变种(ATCC 9372)芽胞悬液0.5ml与4.5 ml消毒液混匀(阳性对照为磷酸盐缓冲液).作用到预定时间,取0.5 ml菌药混合液,加入4.5 ml中和剂(复方戊二醛用含10 g/L甘氨酸的磷酸盐缓冲液,过氧乙酸、金星消毒剂用含10 g/L硫代硫酸钠的磷酸盐缓冲液)中,混匀.中和作用10 min,进行活菌计数,计算杀灭率.对乙型肝炎表面抗原(HBsAg),取其含量为10μg/ml并含体积分数6%小牛血清的悬液0.1 ml,与0.4 ml消毒液混匀.作用到规定时间,再加0.5 ml中和剂.
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医院工作人员公用电话机HBsAg污染调查
对本院临床科室公用电话机话筒手持部位、按键,用沾有0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(采样液)的棉拭涂抹采样,将棉拭头剪入采样液中,洗涤.
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左旋棉酚在模拟人体胃肠道环境及生物样品中的稳定性考察
目的:考察左旋棉酚在不同生理pH及不同生物介质中的体外稳定性,为该药物的制剂开发提供参考.方法:取左旋棉酚分别在不同生理(pH 1.2~8.0)的缓冲液、人工胃肠液、离体生物介质中进行孵育,利用HPLC测定不同介质中左旋棉酚的含量变化,流动相乙腈-0.3%甲酸水溶液(80:20),检测波长234 nm,考察左旋棉酚的降解情况及酶稳定性,建立其降解速率方程.结果:左旋棉酚在pH 1.2盐酸溶液、模拟人工胃液及大鼠离体胃内容物中未出现明显降解,孵育12h后降解率均<10%,左旋棉酚孵育12h后在pH6.8,7.4,8.0磷酸盐缓冲液中的降解率分别为64.7%,78.6%,84.4%,且在离体大鼠小肠、大肠内容物及肝组织匀浆中极不稳定,发生了较大程度降解,8h后分别降解81.3%,96.9%,97.3%.降解特征类似于其在不同生理pH的缓冲液中.结论:左旋棉酚在碱性环境中明显降解而在酸性环境中不易降解;在大鼠胃内容物中较稳定,而在小肠、大肠菌群及肝脏中极易降解.
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基于高效液相色谱法的聚乳酸-羟基乙酸共聚物体外降解产物的测定
目的 建立准确、不受基质干扰的测定聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]降解液中降解产物乙醇酸和乳酸的分析方法并进行方法验证,为PLGA类产品的降解液的质量分析提供重要的技术参考.方法 通过优化色谱柱、色谱条件和不同pH值的乳酸和乙醇酸标准溶液的色谱峰面积的比较等方法,确定色谱条件和样品降解液预处理方法,用Waters 1525高效液相色谱仪进行检测,紫外检测器检测波长210nm,外标法定量.结果 亲水性C18柱,20 mmol/L的KH2PO4水溶液为流动相(pH=2.8)和0.6 mL/min的流速等色谱条件可使降解液中的乙醇酸和乳酸得到良好的分离;同时,样品降解液的pH值宜调节至2.8~3.5范围内以对降解液中的乙醇酸和乳酸进行准确定量.此外,方法学验证结果显示,降解液中乙醇酸的线性范围为2.500~250.0 μg/mL(r=0.9999),定量限为0.48 μg/mL,加标回收率为99.4% ~ 102.6%;降解液中乳酸的线性范围为2.642~264.2 μg/mL(r=0.9999),定量限为1.0 μg/mL,加标回收率为97.9%~ 103.2%.结论 该方法简便、准确,实验成本较低,且不受磷酸盐缓冲液pH值的影响,稳定性好,可用于聚乳酸-羟基乙酸共聚物材料体外降解的降解产物的含量分析.
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常规HE染色中蓝化方法的改进
HE染色是病理技术人员的基本功,是生物学尤其是病理学及细胞学诊断工作中必不可少的染色方法.病理组织学的基本知识,绝大部分都是从观察HE染色标本中得来,其染色是否成功直接影响其他方法的选择与进行.
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微波滴染法在临床肾穿组织特殊染色中的应用
肾穿标本的光镜病理诊断在临床诊断肾病方面具有重要作用,作者采用微波湿盒滴染法,应用于肾穿标本的PASM-Masson、PAS、HE 3种染色,既明显缩短时间,又节省大量试剂,不用使用染色缸等,效果满意,现予报道.一、材料与方法1.标本与切片:临床肾穿标本,均经皮肾穿刺活检.经PBF-A液(甲醛-乙醇-磷酸盐缓冲液)固定[1]1 d,换成0.1mol/L PBS保存,然后按石蜡包埋程序包埋,每步脱水及透明各10 min,浸蜡1 h,用58~60℃石蜡包埋.用一次性刀片切片2 μm厚,60℃烤片过夜,脱蜡入水.
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抗凝剂和缓冲液对血涂片染色的影响
目的 探讨抗凝剂和乙酸盐缓冲液提高血涂片染色质量中的使用方法 .方法血涂片操作中对传统方法进行改良,精确使用抗凝剂,并用乙酸盐缓冲液(HAc-NaAc)代替磷酸盐缓冲液(KH2PO4-Na2HPO4),在乙酸盐缓冲液中加入5%~10%瑞氏-吉姆萨复合染液制备血涂片,光学显微镜下观察血涂片的血细胞染色形态.结果 与传统方法比较,改良后的方法可缩短染色时间(由传统方法的8~13 min缩短为2 min左右);光学显微镜下观察血细胞染色形态时显示,各种血细胞结构清晰,着色稳定.结论 该方法可提高血涂片染色的质量和人工复检的效率.
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免疫组化技术检测膀胱癌尿脱落细胞角蛋白20的临床价值
非侵入性的尿脱落细胞检查对膀胱癌早期诊断、监测复发及预后判断具有实用性,但受主、客观因素的影响,其敏感性受到一定限制。细胞角蛋白(CK)是一个大家族,其中CK20正用于膀胱癌早期诊断及预后观察的研究。用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检查尿标本CK20,目前认为是比常规尿脱落细胞(HE)染色更敏感的方法。但RT-PCR需特殊的仪器设备,价格昂贵。免疫组化技术用于细胞学诊断,可以通过直接观察抗原在细胞中的表达来证实和解决许多在常规染色中难以解决的问题,同时也克服了RT-PCR的不足。我们以免疫组化技术检测尿脱落细胞CK20的表达,报道如下。 一、材料和方法 1.检测对象:(1)肿瘤组:40例膀胱癌为本院泌尿科收治的住院患者。全部病例经病理证实,其中膀胱移行细胞癌Ⅰ级26例,Ⅱ级、Ⅲ级分别为11及3例。初发30例,复发10例。年龄47~79岁。(2)对照组:全部20例病例均为临床明确诊断的住院患者,其中前列腺增生16例,尿路结石4例。 2.方法:免疫组化法使用链霉素亲生物素过氧化物酶连接法(S-P法)。收集晨尿,离心后取沉渣涂片,固定液(无水乙醇∶冰醋酸=3∶1)固定30 min,3%过氧化氢浸泡10 min,胰酶消化10 min,加一抗CK20单抗30 min,加二抗及S-P复合物各10 min,重氮氨基苯(DAB)显色,苏木素复染,各步之间用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.2)洗片,以PBS液代替一抗作阴性对照。结果判断:有棕黄色颗粒着色的细胞为阳性细胞。判断标准,本文分“阳性(+)”“阴性(-)”两级。
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一种新型快速检出分枝杆菌变色液体培养基的评价
结核病的早期发现主要靠实验室诊断,涂片抗酸染色(或荧光染色)找抗酸杆菌阳性率低(10%~20%);常用的固体培养基阳性率虽可达40%。但时间长。尽管BACTEC 460TB检测系统能快速检出分枝杆菌,但其仪器及试剂价格昂贵、且有放射性污染[1]。近年来,变色液体培养基在国外应用的越来越广泛[2]。我们将一种新型的分枝杆菌快速变色液体培养基与改良罗-琼(Lowenstein-Jensen,L-J)培养基进行了比较研究,现将结果报道如下。 一、材料 1.标准菌株:人型结核分枝杆菌、浅黄色分枝杆菌、草分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、胞内分枝杆菌、马耳摩分枝杆菌、爱知分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、偶发分枝杆菌、副偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌脓肿亚种、耻垢分枝杆菌、次要分枝杆菌、非洲分枝杆菌、胃分枝杆菌、不产色分枝杆菌、金色分枝杆菌、新金色分枝杆菌、鸟分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、卡介苗和蟾蜍分枝杆菌由我们研究所保藏。 2.标本:141份临床标本,其中139份痰、1份伤口脓性分泌物和1份支气管肺泡灌洗液。 3. 快速变色液体培养基:由深圳市怡百世生物技术有限公司提供。其主要成分为磷酸盐缓冲液、谷氨酸钠、多种维生素、多种微量元素、甘油、马血清、变色剂以及甲氧苄氨嘧啶、氨苄青霉素、多粘菌素B、两性霉素B和萘啶酸等多种抗生素。 4. 改良罗-琼(L-J)培养基:按照文献[1]配制。 二、方法 1.取对数生长期的标准人型结核分枝杆菌和偶发分枝杆菌于含10%吐温80磨菌瓶中,磨菌混匀,用无菌磷酸盐缓冲液调其浊度为No1 MacFarland单位,再用无菌磷酸盐缓冲液作1∶10系列稀释,各分别接种100 μl于变色液体培养基和改良L-J培养基,37℃培养。当培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀时,取少量液体涂片,进行金胺O荧光染色证实为分枝杆菌。 2. 标本处理:标本经2~4倍体积的4%NaOH消化20 min,离心10 min,沉淀经无菌磷酸盐缓冲液洗涤2次,再加入400 μl无菌磷酸盐缓冲液,混匀后,分别取200 μl接种于变色液体培养基和改良L-J培养基,37℃培养。 3.结果观察与报告:变色培养基接种后,每24 h观察1次,2周后每周观察3次,若培养基变为紫红色或底层有紫色颗粒沉淀,经荧光染色证实有分枝杆菌时,报告分枝杆菌生长阳性。改良L-J培养基接种后3 d、7d观察结果,以后每周观察1次。8周未见液体培养基变紫红色或底层有紫色颗粒沉淀,固体培养基上未见菌落,报告分枝杆菌培养阴性。
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聚乙二醇在沙眼衣原体细胞培养中的应用
细胞培养分离沙眼衣原体(CT)一直是诊断CT的“金标准”,此法特异性高,但其敏感性较低。聚乙二醇(PEG)是常用的细胞融合诱导剂,我们对PEG在CT培养中的作用及佳作用浓度进行了初步研究,现将结果报告如下。 一、材料和方法 1.标本采集:(1)CT标准株:B/TW-5(2×108 IFU/ml)。(2)临床标本:新生儿肺炎患儿鼻咽部拭子100份,置入衣原体运输保护液(0.2 mol/L蔗糖-磷酸盐缓冲液)中。24 h内接种或贮存于-70℃待接种。