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2所医院物品与人员手HBsAg及HBV-DNA污染检测
于1998年、1999年的3~5月,对福州地区2所医院口腔门诊物品与人员手进行了HBsAg与HBV-DNA检测.检测时,以浸有磷酸盐缓冲液的无菌棉拭,对物品表面与人员手往返涂抹采样.随后,将棉拭头剪入2 ml磷酸盐缓冲液中.在旋涡混匀器中充分震荡后,离心(4000 r/min)5 min.取离心液,用ELISA法检测HBsAg抗原性.以样液OD值(S)与阴性对照OD值(N)的比值(S/N)>2.1,为HBsAg阳性.以上海医科大学预防医学研究所提供的非放射性分子杂交法检测HBV-DNA,当测定孔位呈现蓝紫色斑点时为HBV-DNA阳性.
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肝炎基因诊断芯片检测肝炎患者血清及肝组织中HBVDNA、HCVRNA的临床研究
肝炎基因芯片是根据肝炎病毒的特征基因片段设计探针序列,将探针以微阵列形式排列在经过特殊处理的玻片上,从待测血液、组织标本中抽取微量肝炎病原体DNA(RNA),与探针杂交,用特有的荧光波长扫描芯片,通过计算机软件进行分析诊断.我们用病毒性肝炎基因诊断芯片,分别双盲检测40份乙型肝炎患者和健康人、丙型肝炎患者血清,99份肝炎后肝硬化肝组织蜡块标本,15份慢性乙型肝炎患者肝组织活检标本;同时用荧光微粒子定量法测定血清中乙型肝炎病毒标志物HBcAg,PCR法检测血清中HBVDNA、HCVRNA,用免疫组化法、原位分子杂交法分别检测肝组织HBcAg、HBVDNA.结果报道如下.
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分子杂交法快速鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的初步评价
目的:评价结核分枝杆菌鉴定试剂盒(分子杂交法)进行分枝杆菌菌种初筛的准确性,并探讨如何快速准确地鉴定结核分枝杆菌复合群(MTC)和非结核分枝杆菌(NTM)混合感染标本。方法采用分子杂交法对200株结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定。人工制备结核分枝杆菌和胞内分枝杆菌、结核分枝杆菌和脓肿分枝杆菌、结核分枝杆菌和偶发分枝杆菌的混合感染模型,评价基因测序法、芯片法和 Hain test 在检测分枝杆菌混合感染中的准确性。结果以对硝基苯甲酸(PNB)分离鉴定结果为参照,分子杂交法的敏感性和特异性分别为65.12%(65/86)和98.25%(112/114)。对于人工制备的13种不同比例混合的 H37Rv 和 NTM,芯片法和Hain test 均可以准确鉴定出混合感染标本中的混合菌种,而基因测序结果表明,H37Rv:偶发分枝杆菌的比例在10%~90%范围内才能区分出混合感染的类型。结论分子杂交法对于结核分枝杆菌诊断有较高的特异性,一旦经该法鉴定为 NTM,则具有很高的诊断意义。明确标本中存在混合感染后可以采用芯片法或 Hain test 对临床上高致病的分枝杆菌进行菌种水平的鉴定。
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乙肝病毒携带产妇母乳喂养安全性探讨
乙肝病毒通过肠道外途径传播已被确认.有研究乙肝病毒携带产妇用分子杂交法从唾液、精液及阴道分泌物中检出乙肝病毒( HBV)- DNA.有 PCR法证实母乳中也含有 HBsAg、 HBeAg和 HBV- DNA.虽然母乳是婴儿好的食物,但有关乙肝病毒携带产妇能否哺乳仍有争议,为探讨母乳喂养的安全性,我们做了以下研究.
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癌基因的功能与免疫组织化学标记
本文对癌基因与抑癌基因的种类和功能作了简单的介绍,并阐明了目前病理学中应用多的方法是用免疫组化法检测癌基因蛋白产物,该方法简便、快速,是对原位分子杂交法的一种补充,起相互印证作用.
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两种方法检测HBV-DNA结果比较
为了解斑点分子杂交和聚合酶链反应(PCR)检测HBV-DNA的差异性,用斑点分子杂交法检测了270例住院乙肝患者血清HBV-DNA,120份病例同时行PCR检查.结果表明,270例乙肝患者斑点分子杂交法检测HBV-DNA阳性例数60例,阳性率22.22%;两种方法检测120份病例,阳性率经统计学处理差异有显著性.提示:PCR和斑点分子杂交灵敏度不同,操作方法不同,应根据不同情况选用.