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分子生物学方法在人类杯状病毒诊断和分型中的应用
人类杯状病毒(HuCVs)是引起急性胃肠炎的主要病原之一.自1990年NV全基因克隆测序以来,相继建立了多种新的诊断方法,为灵敏、特异而又简便地检测HuCVs感染开辟了新途径.本文主要就分子生物学方法在人类杯状病毒诊断和分型中的应用作一综述.
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HBVYMDD拉米夫定耐药变异及其检测的研究进展
主要阐述HBV多聚酶及其逆转录酶区C区的分子结构,YMDD基序及其变异的含义、类型及诱其发生的背景,YMDD变异病毒对拉米夫定耐药的分子机制,目前用于检测HBVYMDD变异的分子生物学方法.
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光照制对大鼠ALAD活性与Hb含量昼夜节律的影响
光照制(Lighting regimen)是指机体所处环境光照与黑暗的时间长短交替方式,光照条件对机体的生理活动及其节律有重大影响[1].观察各种光照条件下生物节律的变化具有实际意义,国内外学者对此进行不少研究,但光照对大鼠血中氨基乙酰丙酸脱氢酶(ALAD)活性与血红蛋白(Hb)含量的生物节律影响尚未见报道.铅通过抑制ALAD活性,干扰卟啉代谢,影响血红素合成.本研究采用时间生物学方法,观察光照对SD大鼠血中ALAD活性与Hb含量生物节律的影响,为铅毒性全面评价及铅作业人员劳动保护提供时间毒理学依据.
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以PCR为基础的结核分支杆菌DNA分型技术及其应用
1998年结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组测序工作宣告完成,这就为建立分子生物学方法鉴定结核分枝杆菌并对其分型提供了更有力的依据.H37Rv整个基因组由4,411,529对碱基组成,含有约4000个基因,整个基因组内有56个区与插入序列(ISs)同源[1].
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单克隆抗体免疫荧光法检测解脲支原体
非淋菌性尿道炎(NGU)是指由淋球菌以外病原体引起的尿道炎.解脲支原体(UU)是NGU常见的病原体之一[1].UU的实验室检测方法有培养法、细胞学检查、直接荧光抗体检查、酶免疫法、分子生物学方法、血清学检查等.快速、简便、价廉、特异性好是临床检验的基本要求,自2000年6月~12月对100例泌尿、生殖道感染患者,应用单克隆抗体免疫荧光法检测UU,同时做UU培养对照.现报告如下.
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基层适宜的沙眼衣原体检验技术
沙眼衣原体是一类在细胞内寄生的微生物,引起的泌尿生殖道感染已成为常见的性传播疾病.它可引起男性尿道炎、附睾炎,女性宫颈炎、盆腔炎、宫内感染等多种疾病,尤其是在与淋球菌等合并感染时可加重疾病的发展并引起其它并发症.孕妇生殖道感染沙眼衣原体可导致新生儿眼炎和肺炎,在孕前优生健康检查项目中进行淋球菌及沙眼衣原体检查,对预防新生儿疾病具有重要的现实意义.由于沙眼衣原体感染者中,有50%的男性和70%~80%的女性常表现为无临床症状,所以其实验室检查具有重要作用[1].沙眼衣原体实验室检查方法主要分3大类:①细胞培养法,检测过程类似病毒分离培养;②分子生物学方法,如PCR测DNA;③抗原检测方法,如免疫层析法测抗原.
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副溶血弧菌快速检测的进展及其应用
副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus,简称VP)是一种广泛分布于海洋与盐湖中的嗜盐性细菌,海产品中常有此菌,它是引起食源性疾病的主要病原之一,是我国沿海地区食物中毒和夏季腹泻的重要病原[1].由于我国物流频率迅速增加,内地省份也与沿海地区一样,频繁报告由VP感染引起的消化道疾病,严重威胁人们的身体健康并造成经济财产的巨大损失.为有效控制病原的发生扩散,准确即时的检测手段正是预防控制VP传播的关键所在.通常鉴定方法是分离培养、镜检观察、生化鉴定、嗜盐性试验等,不仅耗时,且操作复杂,灵敏度有限.现代分子生物学方法具有特异性高、快速灵敏的优势.因此,逐渐成为现代检验学的发展趋势.国外已将分子生物技术引入食品检验中[2],我国学者也已对食品VP的分子生物学检测进行了研究和应用[2,3].
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结核分枝杆菌的检验及结果分析
检出痰液中结核分枝杆菌一直是临床诊断肺结核或鉴别肺结核与其他肺病的主要依据,涂片法简单易行,但阳性率较低,罗氏培养法虽为金标准,但因周期较长,均难以满足临床需要.近年来,作为直接检测分枝杆菌种系的鉴定及药敏的许多分子生物学方法得到长足发展,这些方法能将诊断的时间从几周缩短到几天,其中实时荧光定量PCR(FO-PCR)因其技术成熟,具有较高的敏感性和特异性,已逐步应用于临床,我们用以上3种方法同时检测100例临床痰液标本结核杆菌,对结果进行分析.
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辽宁省1997-2002年霍乱弧菌分离株核糖体分型和脉冲场凝胶电泳分型分析
为探讨辽宁省不同地区、不同来源霍乱病原体之间的遗传相关性,并对从鸭绿江水中分离出来的霍乱弧菌进行基因水平的分析,我们采用16S RNA核糖体基因分型(RT)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)等分子生物学方法,对23株分离自1997-2002年辽宁省患者、外环境霍乱菌株进行研究.所用菌株经鉴定均为El tor生物型.染色体DNA提取、Southern杂交、PFGE参照文献[1]进行.20株霍乱弧菌共分3个RT型,其中18株菌为RT1型,RT2型、RT3型各1株菌(表1).14株霍乱弧菌共出现3种电泳条带(PFGE分型),结果见图1和表1.
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用分子生物学方法确诊一例登革1型病毒感染病例
2004年8月广州军区总医院收治1例登革热(DF)疑似病例,我们用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行了确诊与分析.
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乙型肝炎表面抗原并非饮食从业人员筛查HBV传染源的理想指标
笔者使用分子生物学方法对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者的传染性进行定量研究,以探讨HBsAg作为饮食从业人员中HBV传染源监控指标的可行性.
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幽门螺杆菌与胃癌相关研究
一、我国在幽门螺杆菌与胃癌研究领域的机遇与挑战关于幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)与胃癌的关系,1994年国际癌症研究中心(IARC)也已将其列为人类胃癌的第一类致癌物,当时的主要依据为人群流行病学资料[1,2].近年来,各国学者开展了大量分子流行病学、分子生物学和动物实验研究,对Hp与人类胃癌间发生的关系有了更进一步的认识.在流行病学研究中, 提出了特定菌型与人类胃癌发生相关的学说,注意到细胞毒素相关蛋白A(CagA)以及cag毒力岛(cag-PAI)的差异在各地的意义不同.在相关的动物实验研究和实验室研究中,已取得了部分较为直接的Hp与胃癌相关的证据,如发现某些类型的Hp菌株在与机体的相互作用中,能将其CagA通过Ⅳ型分泌系统注射到上皮细胞内部,进入细胞的CagA成分(包括进入细胞后被磷酸化的CagA和未被磷酸化的CagA)均可参与细胞信号传导的多个环节、引起细胞骨架重排和细胞增殖特征的改变[3].但要深入探讨并终明确Hp与人类胃癌发生的关系及相关机制,必须结合大量胃癌高、中、低发病率地区人群资料,有效利用宏观流行病学方法与分子流行病学、分子生物学方法的结合来进行.我国属胃癌高发国,其胃癌人群的分布特征和人群的稳定性特征已成为国际公认的良好研究现场.
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逆转录聚合酶链式反应检测某些动物性产品中冠状病毒初探
对于引起人类严重急性呼吸综合征的冠状病毒(SARS-associated coronavirus)[1]检验方法有免疫荧光法、ELISA法和分子生物学方法,这些方法全部针对临床标本.目前食品中检测的病毒种类仅限于甲肝病毒、轮状病毒、诺瓦克病毒、柯萨奇病毒等肠道病毒.由于环境样品不同于医学标本,样品中病毒数量极少,传统方法需要从大量样本中富集、分离病毒,再经过如组织培养等方法检测,这些方法因细胞病变不明显、重复性差、时间太长等均不适用.
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电针对神经痛大鼠的治疗作用及机制初探
本研究采用行为学及分子生物学方法,对电针对神经痛大鼠痛敏分数的影响及其机制进行了系列研究.主要结果如下:
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新分子细胞生物学方法与技术研究进展
分子细胞生物学是从20世纪60年代迅速发展起来的一门新兴学科,通过对细胞核以及细胞质内的各种超微结构及其功能更为直观的认识,尤其是从分子水平上对其进行深入的探讨,使得分子细胞生物学日臻完善,并且也成为研究生命科学的重要技术.在医学研究领域,体细胞核移植、干细胞定向诱导分化、细胞重编程(特别是诱导性多潜能干细胞技术)的研究为我们制备体外疾病模型、研究疾病发生机制、寻求细胞及组织移植的新材料方面提供了重要的技术支撑.
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用荧光原位杂交在石蜡切片上检测t(11;18)和涉及bcl-10基因染色体易位的方法
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridisation,FISH)是在石蜡包埋组织中检测细胞染色体变化及基因异常的一种敏感性强、特异性高的分子生物学方法.对石蜡包埋组织进行FISH染色所采用的方法有两种,在提取的细胞核上进行和直接在石蜡包埋组织切片上进行.然而,从石蜡包埋组织中提取细胞核进行FISH的方法复杂、耗时,而且所需组织较多,在临床活检小组织中的应用受到一定局限.我们介绍一种简单易行的在常规甲醛固定、石蜡包埋组织切片上进行FISH方法.
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逆转录-聚合酶链反应检测蚊标本乙型脑炎病毒核酸片段
蚊子是乙脑病毒的传播媒介,蚊子带毒率的调查是监测自然界乙脑流行的主要手段之一.一般用常规的生物学方法分离病毒了解蚊带毒率情况,该方法工作量大,出结果慢,费时费力.本研究试图用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测蚊标本乙脑病毒核酸片段,并与常规分离病毒方法进行比较.1997年夏季从辽宁、沈阳、长春等地采集蚊标本约1 100余只,液氮保存.将蚊标本20~30只混合为一组,常规消毒、研磨、离心后,将上清分为两份,一份接种C6/36和BHK-21,连传3代,观察细胞病变,另一份作RT-PCR检测.
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生殖器都柏林念珠菌分离与PCR-RFLP鉴定
都柏林念珠菌是1995年采用现代分子生物学方法鉴定的念珠菌属的一个新种.近年来,都柏林念珠菌等非白念珠菌引起的深部感染比例逐渐增长,对氟康唑很容易产生不可逆的耐药性.因此都柏林念珠菌的分离与鉴定引起了国内外学者的高度重视.目前,45℃温度试验筛查都柏林念珠菌操作简便,已得到国内外学术界的广泛认可和采用.都柏林念珠菌DNA经限制性内切酶消化后,可产生独特的RFLP图谱,但单纯RFLP图谱结果模糊.为此,用PCR方法对核糖体DNA内部转录间隔区的编码基因进行核酸扩增,然后分析限制性酶酶切图谱,鉴定都柏林念珠菌,并对都柏林念珠菌在天津的流行情况作了分析.
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PCR快速检测粪便中志贺菌属和侵袭性大肠埃希菌IpaH基因及其临床应用
煮沸法从粪便标本中快速抽提出细菌DNA作为聚合酶链反应(PCR)模板,用自行设计的1对特异性引物扩增位于志贺菌和侵袭性大肠埃希菌染色体和质粒DNA上的多拷贝侵袭性质粒抗原(Ipa)H基因,扩增产物为620bp,以常规细菌培养检出率为对照.用20种常见肠道病原菌标准菌株的DNA抽提物进行PCR反应的方法来对PCR反应的特异性进行检验.用DNA序列分析的方法对PCR扩增产物的特异性进行检验.共检测81份门诊粪便标本,细菌培养阳性有27例,福氏志贺菌25株,宋内志贺菌2株,培养阳性率为33.3%,PCR检测阳性有39例,阳性率为48.1%,PCR检测阳性率比常规细菌培养阳性率高14.8%,其中细菌培养阳性的标本PCR检测均为阳性,29例住院病人经过正规治疗1周后,PCR检测12例仍然阳性.统计学分析显示两者之间差异有显著性(P<0.05).标准菌的PCR检测和PCR产物的DNA序列测定结果显示我们设计的PCR方法具有较高的特异性.本研究中采用的PCR方法是一种快速简便、特异性高和敏感性强的检测细菌性痢疾病原菌的现代分子生物学方法.
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4株金黄色葡萄球菌临床分离株的多位点测序分型
多位点序列分析(Multilocus Sequencing Typing, MLST)是近年报道的一个具有很高分辨能力的分子生物学方法,它的主要优势是已经建立了有大型数据库的国际网站http://www.mlst.net,可以直接将实验结果提交数据库与已知的流行株进行比较,分析不同时间不同地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)临床分离株的遗传相关性.本研究对从天津分离的4株金葡菌临床株进行MLST分型,并与国际流行克隆株比较,了解它们的遗传背景和可能的来源.