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基于双向凝胶电泳技术的中医寒、热体大鼠蛋白质组表达谱研究＊
目的：利用双向凝胶电泳技术对中医寒、热体大鼠进行蛋白质组表达谱研究，以期寻找与寒热体相关的蛋白质，并探讨中医寒、热体形成的生物学基础。方法：提取大鼠肝脏细胞的总蛋白，采用双向凝胶电泳（2-DE）及MALDI-TOF-MS质谱技术筛选并鉴定寒热体表达差异的蛋白质群。结果：经过筛选和质谱技术共获得10个具有统计学意义的蛋白表达差异点：氨甲酰磷酸合成酶、二硫键异构酶、过氧化氢酶、过氧化氢异构酶、细胞质氨肽酶、谷氨酸脱氢酶、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶、热休克蛋白前体、同型半胱氨酸、葡萄糖调节蛋白前体。结论：中医寒热体大鼠在蛋白质组表达方面存在一定的差异性，酶类蛋白代谢异常可能是寒热体形成的物质基础之一。
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肾阳虚股骨颈骨折患者松质骨组织差异蛋白质的表达分析
目的:比较并分析肾阳虚与非肾虚患者股骨颈松质骨差异表达的蛋白质,从骨组织功能蛋白质角度初步探讨“肾主骨”理论科学内涵.方法:收集肾阳虚患者及非肾虚患者的股骨颈松质骨标本各13例,进行骨总蛋白提取、双向电泳(2-DE)蛋白质分离、凝胶图谱的获取、质谱分析及生物信息学检索.结果:2-DE获得的肾阳虚及非肾虚患者股骨颈松质骨可辨识总蛋白点数目为582个,与非肾虚组比较,肾阳虚证组有16个蛋白出现差异表达.其中线粒体热休克蛋白90(Hsp90s)等5个蛋白表达上调;骨形态发生蛋白4(BMP-4)等11个蛋白表达下调.结论:股骨颈松质骨16个蛋白表达改变可能与肾阳虚证的发生有关, “肾”可能通过调节这些与骨组织关系密切的蛋白表达而发挥“主骨”作用.
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正常及脾阳虚大鼠脾组织蛋白组学差异分析
目的:通过比较正常及脾阳虚大鼠脾组织蛋白质谱,筛选和鉴定与脾阳虚证有关的疾病特异性蛋白,探寻脾阳虚证生物标志物.方法:选取SD大鼠20只随机分为对照组、脾阳虚组,每组10只.造模成功后无菌摘除脾脏,取出脾组织10mg/只,进行双向电泳实验、双向凝胶电泳图象分析,肽质量指纹图谱与电喷雾串联质谱鉴定蛋白质,分析差异蛋白质意义.结果:通过比较正常及脾阳虚证大鼠脾组织差异蛋白质,发现5个有意义的差异蛋白质:载脂蛋白A-I、真核翻译起始因子5a-1、3-磷酸甘油醛脱氢酶、结蛋白、异质核核糖核蛋白A2/Bl.结论:正常及脾阳虚大鼠脾组织蛋白质存在差异表达.这些差异蛋白质可能是与脾阳虚证相关的疾病特异性蛋白,并有可能成为诊断脾阳虚证的分子标志物.
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金匮肾气丸对肾阳虚证模型大鼠股骨髁松质骨差异蛋白质表达的影响
目的 探讨金匮肾气丸治疗肾阳虚证的可能作用机制.方法 60只Wistar大鼠随机分为正常组20只和造模组40只,将造模成功的38只大鼠再随机分为中药组和模型组各19只,中药组大鼠给予金匮肾气丸8.44g/(kg·d)灌胃,正常组和模型组大鼠给予生理盐水3 ml灌胃,每日1次,连续3周.分别取正常组、模型组和中药组大鼠的股骨髁松质骨,进行总蛋白的提取与制备;采用蛋白质双向凝胶电泳技术展示各组大鼠股骨踝松质骨蛋白质组图谱,应用PDQuest 8.0软件分析各组间差异表达蛋白点,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)初步鉴定差异表达蛋白点.结果 各组大鼠股骨髁松质骨双向凝胶电泳图谱的蛋白点数目均为552个;与正常组比较,模型组有23个差异表达的蛋白质;与模型组比较,中药组有16个差异表达的蛋白质.给予金匮肾气丸溶液后,肾阳虚模型大鼠股骨髁松质骨中原来表达上调的磷酸甘油酸激酶1及表达下调的14-3-3ζ蛋白、网钙蛋白3、原肌球蛋白异构体2α-3链、原肌球蛋白α-4链、原肌球蛋白异构体α-1链、40s核糖体蛋白sa、半乳糖凝集素1、线粒体ATP合成酶亚基α、膜联蛋白A1、GDP解离抑制因子1、Ⅰ型胶原α-1链、LOC683667蛋白、膜联蛋白A5、过氧化氧化还原蛋白2和蛋白质二硫键异构酶A3均出现表达趋势的反向调整.结论 金匮肾气丸对肾阳虚证的调节可能涉及股骨髁松质骨结构构成、物质转运、能量代谢和细胞增殖与凋亡等方面.
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人卵巢癌细胞系A2780及顺铂耐药系蛋白质双向电泳图谱的差异分析
近年来,生命科学研究领域的热点,蛋白质组学理论和技术的迅速发展和完善,可望从组织或细胞蛋白质整体水平这一全新角度,探讨卵巢癌顺铂耐药的机理[1].本研究应用固相pH梯度双向凝胶电泳技术,分离人卵巢癌细胞系A2780及顺铂(DDP)耐药系(A2780-DDP)的总蛋白,建立双向凝胶电泳(2-DE)图谱,再应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,及数据库鉴定部分差异蛋白质,希望发现与顺铂耐药有关的特异性蛋白质.
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应用SELDI-TOF MS技术筛选卵巢癌早期血清标志物研究
表面增强激光解吸电离子行时间质谱(SELDI-TOF MS)技术具有高通量、高灵敏度等特点,能对样品中蛋白质进行全景式分析,已被广泛地用于肿瘤标志物的筛查等研究[1].我们利用SELDI-TOF MS技术对不同分期(早期:FIGO Ⅰ期、Ⅱ期;进展期:FIGOⅢ期、Ⅳ期)的卵巢癌患者的血清蛋白质进行前瞻性测定,以寻找能够用于早期诊断的差异蛋白质峰.
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红芪多糖3促进小鼠脾淋巴细胞增殖的差异蛋白质点分析
目的:分析红芪多糖3(HPS-3)作用于小鼠脾淋巴细胞后的差异蛋白质点,探讨红芪多糖3调节免疫的分子生物学机制.方法:提取正常小鼠脾淋巴细胞进行体外培养,用MTT法检测红芪多糖对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖作用,ELISA试剂盒测定培养上清中的IL-2含量,并运用双向电泳技术对脾淋巴细胞总蛋白进行分离,银染显色,PDQuest软件对凝胶图谱进行差异点分析,找出差异明显的蛋白质点.结果:HPS-3能够提高T淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌,实验所得2-DE凝胶图谱经PDQuest软件分析得出以下结果:HPS-3组中共有16个蛋白点发生明显改变,其中11个蛋白质点高表达,4个蛋白质点消失,1个蛋白质点低表达.结论:HPS-3能促进脾淋巴细胞增殖,显著影响小鼠脾淋巴细胞蛋白质表达.
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基于差异蛋白质鉴别僵蚕及其新型伪品
目的 通过总蛋白含量、可溶性蛋白含量差异以及应用SDS-PAGE蛋白质电泳寻找差异蛋白质来鉴别僵蚕与伪品黑死蚕、空心僵蚕.方法 采用SDS-PAGE法对僵蚕真品与伪品差异蛋白条带进行鉴别.结果发现僵蚕总蛋白含量不低于60.00％,可溶性蛋白含量不低于4.29％,伪品远低于上述指标,可作为僵蚕质量评价的检查项指标,辅助鉴别僵蚕与其伪品;僵蚕特有差异蛋白质(SP)的有无和含量差异,可有效鉴别上述两种新型伪品.结论 本研究初步建立基于差异蛋白质的僵蚕真伪鉴别新方法,为下一步完善僵蚕质量标准,以及僵蚕的质量控制提供科学的依据.
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宁夏回、汉族2型糖尿病患者血浆差异蛋白质初步筛选及脂多糖结合蛋白、载脂蛋白C3的验证
目的 初步筛选宁夏回、汉族2型糖尿病(T2DM)患者血浆差异蛋白质,并对脂多糖结合蛋白(LBP)和载脂蛋白C3(apoC3)进行验证.方法 按照纳入与排除标准,选择2015年8月至10月在宁夏医科大学附属总医院与吴忠市人民医院确诊的T2DM患者142例为研究对象,包括回族72例,汉族70例,以及6例健康人.采用色谱-质谱联用技术和Proteome Discoverer软件与检索数据库NCBI Human-RefSeq(人参考序列库)进行差异蛋白质筛选和信息分析.用双抗体夹心ELISA法测定血浆中LBP和apoC3表达水平.结果 与健康人对照组比较,汉族与回族均上调的蛋白质有8个,仅汉族上调的蛋白质7个,仅回族上调的蛋白质9个;汉族与回族均下调的蛋白质15个,仅汉族下调的蛋白质14个,仅回族下调的蛋白质6个.汉族组血浆LBP为(26.858±0.911) ng/mL,回族组血浆LBP为(24.538±1.030) ng/mL,2组间比较,差异有统计学意义(t=12.398,P＜0.01);汉族组血浆apoC3为(124.920±2.057) ng/mL,回族组血浆apoC3为(147.218±1.572) ng/mL,2组间比较,差异有统计学意义(t=-63.291,P＜0.01);回、汉族男、女患者血浆LBP与apoC3差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 宁夏回、汉族T2DM患者血浆中蛋白质存在差异表达,T2DM汉族组血浆LBP较回族组明显升高,T2DM回族组apoC3较汉族组明显升高,且血浆LBP与apoC3的表达与性别无关.
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人精浆中弱精子症相关蛋白质的"shotgun"鉴定
目的:利用"shotgun(鸟枪)"蛋白质组学策略鉴定精浆中弱精子症相关的蛋白质. 方法:正常健康已生育和弱精于症男性各3例自愿捐献的精液标本,通过Percoll分离获取精浆,等量混合后在SDS-PAGE上进行分离,切胶取条带进行胶内酶解,抽提肽段后利用"shotgun"蛋白组学策略鉴定蛋白质.然后,将两组鉴定到的唯一肽段数≥2和唯一肽段数＝1但肽段总数≥4的蛋白质对比分析. 结果:正常生育男性和弱精于症男性精浆中共得到172种差异蛋白质,全部是有和无的关系.其中89种蛋白质存在于弱精于症患者,而正常生育者没有鉴定到;83种蛋白质存在于正常可生育者,而弱精于症患者没有鉴定到.这些差异蛋白质集中在信号转导和酶催化活性类. 结论:通过分析差异蛋白质的功能,有10种蛋白质尤其重要,可能与弱精子症相关,这10种蛋白质为:膜联蛋白Ⅵ同工型2、白介素6受体β亚单位同工型1前体、相对分子质量为400000的蛋白质、胞质动力蛋白重链、α-辅肌动蛋白4、受体型酪氨酸蛋白磷酸酶η前体、维生素D结合蛋白前体、蛋白S100-A11、蛋白S100-A9和膜联蛋白A4.
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严重少精子症患者与正常生育男性精浆蛋白质群比较分析
目的:探讨严重少精子症和正常生育男性精浆蛋白质群的差异性. 方法:11例正常健康已生育的自愿者(正常组)和6例严重少精子症男性精液标本通过Percoll分离获取精浆.采用SELDI-TOF-MS,经CM10芯片捕获蛋白质并用TOF-MS对蛋白质进行检测,获得各样本的蛋白质指纹图谱,经过归一化处理后进行组间比较. 结果:严重少精子症组与正常组比较仅有2种低丰度蛋白质表达存在差异,与非梗阻性无精子症组比较差异蛋白质达15种.蛋白质荷比(m/z)分别为7 196.058、7 547.610、5 780.493、7 059.844、7 409.589、5 379.173、10 778.810的7种蛋白质是严重少精子症、正常组与非梗阻性无精子症组的共同差异蛋白质,除后两者在非梗阻性无精子症中含量升高外,其余含量均降低.结论:严重少精子症的精浆蛋白质群与正常组差异较小,即两者的精浆蛋白质组成较为相似,但二者均与非梗阻性无精子症存在显著差异.提示严重少精子症和非梗阻性无精子症的发生机制不同,并非仅是遗传因素量的累加.
关键词： 严重少精子症 精浆 差异蛋白质 SELDI-TOF-MS -
无精子症患者与生育男性精浆蛋白质群的比较分析
目的:探讨无精子症患者精浆蛋白质群的改变. 方法: 11例正常健康自愿者和6例非梗阻性无精子症者精液标本,以99%和45%Percoll分离获取精浆.采用PBS IIC型蛋白质芯片-飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS),经CM10芯片捕获蛋白质,并采用TOF-MS对蛋白质进行检测获得各样本的蛋白质指纹图谱,经过归一化处理后进行组间比较. 结果: 无精子症组与正常组比较有28种蛋白质表达存在差异,差异的蛋白质中有24种含量低于正常组,其中4个M/Z在7 196.058、7 630.573、7 547.610和7 709.833的蛋白质差异极显著(P＜0.01). 结论: 无精子症患者其精浆蛋白质群较生育男性有显著改变,改变的蛋白质主要是含量减少,这些蛋白质的减少可能与无精子症的发生有重要相关性.
关键词： 无精子症 精浆 差异蛋白质 蛋白质芯片-飞行时间质谱 -
ⅢA型慢性前列腺炎患者前列腺按摩液差异蛋白质表达的初步研究
目的:初步研究ⅢA型慢性前列腺炎患者与健康男性前列腺按摩液中差异蛋白质的表达. 方法:对ⅢA型慢性前列腺炎患者前列腺按摩液标本35例和正常成年无前列腺炎的男性前列腺按摩液标本18例,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)检测各组标本中差异表达的蛋白质,所得数据运用相关软件对不同蛋白质峰的质荷比(M/Z)进行统计分析,并运用蛋白质数据库对相关蛋白质进行检索分析. 结果:ⅢA型慢性前列腺炎组和正常男性对照组比较,表达差异超过2倍的有5种蛋白质,其中M/Z在Mr为3 372、3 487、4 257、5 325的蛋白质高表达(P＜0.01),M/Z在M,为1 0631的蛋白质低表达(P＜0.01).这5种蛋白质可能分别为Brevinin-2Eg、巨大内皮素-1、α-防御素15、β-防御素134、前列腺甾体蛋白C2. 结论:ⅢA型慢性前列腺炎患者与健康男性前列腺按摩液中蛋白质表达存在差异,这些蛋白质可能与ⅢA型慢性前列腺炎的发生、发展有重要相关性.
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强骨宝1号对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎松质骨蛋白质组的影响
目的 从差异蛋白质组角度探讨去卵巢腰椎骨质疏松症及强骨宝1号干预的内在机制.方法 建立去卵巢大鼠骨质疏松症模型,设立假手术组、模型组及中药组,双相电泳技术展示腰椎松质骨蛋白质组图谱,比较各组间差异蛋白点并进行质谱分析及初步鉴定.结果 3组电泳图谱的蛋白点均为600个,与发病相关的有6个;与中药干预相关的有7个.结论 角蛋白、果糖二磷酸醛缩酶、肌动蛋白、ATP合酶α-亚单位、α-烯醇化酶、蛋白二硫键异构酶表达改变可能与骨质疏松发病有关,血清白蛋白、ATP合酶β-亚单位、碳酸酐酶、晶体蛋白β-链、过氧化还原酶-6、β-烯醇化酶、肌动蛋白表达改变可能与强骨宝1号干预效应有关.
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金匮肾气丸对肾阳虚证模型大鼠股骨皮质骨差异蛋白质表达的影响
目的:从差异蛋白质角度探讨金匮肾气丸治疗肾阳虚证的机理.方法:建立肾阳虚证大鼠模型,设立正常组、肾阳虚组和中药组(金匮肾气丸组),双向电泳技术展示股骨皮质骨蛋白质组图谱,比较3组间差异蛋白点并进行质谱分析及鉴定.结果:3组股骨皮质骨双向电泳图谱的蛋白点数目均为480个.与正常组比较,肾阳虚组有16个差异表达的蛋白质.经金匮肾气丸治疗后,肾阳虚模型大鼠股骨皮质骨中表达上调的载脂蛋白A-I和线粒体热休克蛋白60及表达下调的原肌球蛋白异构体20-3链、GDP解离抑制因子β、Ⅰ型胶原o-1链和LOC683667等6个蛋白均出现表达趋势的反向调整.结论:金匮肾气丸治疗肾阳虚证可能与调整大鼠股骨皮质骨中原肌球蛋白异构体20-3链、GDP解离抑制因子β、Ⅰ型胶原o-1链、LOC683667蛋白、载脂蛋白A-I和线粒体热休克蛋白60等6个相关蛋白的表达有关.
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变应性鼻炎和鼻息肉病患者血清蛋白质的差异表达
目的 研究变应性鼻炎、鼻息肉病患者血清和对照血清中蛋白质的差异表达.方法 采用表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)和配套的WCX2(弱阳离子交换)蛋白质芯片技术检测变应性鼻炎、鼻息肉病患者血清差异表达蛋白质.结果 变应性鼻炎患者血清检测出的138个蛋白峰中17个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.01),鼻息肉病患者血清检测出的138个蛋白峰中23个蛋白峰差异有统计学意义(P<0.01),其中6个蛋白峰在两组中的表达差异均有统计学意义.结论 变应性鼻炎、鼻息肉病患者血清和正常对照血清的蛋白质谱有差异蛋白表达.
关键词： 鼻炎 变应性 鼻息肉病 差异蛋白质 表面增强激光解析离子化 -
冠心病血瘀证的血清差异蛋白质组学研究
冠心病属于中医学"胸痹"、"心痛"范畴,血瘀证是冠心病中医证候辨证中较常见的症候类型.蛋白质组学技术在中医药领域中的应用,为中医证型实质的研究提供了新的方法.本研究采用蛋白质组学的相关技术方法,分析冠心病血瘀证患者和健康人群之间血清蛋白质的差异,以期发现与冠心病血瘀证相关的特异性蛋白质.
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特发性高草酸尿症大鼠肝脏差异蛋白质的筛选
目的 寻找特发性高草酸尿症大鼠肝脏组织差异表达的蛋白质.方法 取3只雄性特发性高革酸尿症大鼠和3只正常对照雄性大鼠,分别取其肝脏组织约300 mg后提取其中的总蛋白.以荧光差异显示凝胶电泳(DIGE)技术分离肝脏中的全部蛋白质,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)和DeCyderTM v6.5软件进行蛋白质的分析和鉴定.结果 总共筛选出21个差异表达蛋白质点,其中11个蛋白质点在特发性高草酸尿症组表达上调,10个蛋白质点下调.终有18个差异蛋白质点被鉴定确认.结论 筛选出的这些差异蛋白质可能与特发性高草酸尿症有关.
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大鼠胰腺癌组织蛋白组学分析
我们诱导形成与人类胰腺癌的病理生物学特性很相近的大鼠胰腺癌[1],并将大鼠胰腺癌组织作为研究对象,进行双向电泳和质谱分析,初步筛选胰腺癌组织与正常胰腺组织中的差异蛋白质。一、材料与方法清洁级SD大鼠70只,随机分为模型组50只和假手术组20只。模型组将二甲基苯并蒽(DMBA)植入胰腺被膜内并荷包缝合后关腹。假手术对照组只进行荷包缝合。术后两个月处死。所有胰腺组织取下后,各取1块组织行苏木素-伊红(HE)染色,进一步确认癌组织及良性组织。分别取胰腺癌模型及正常胰腺组织,参照文献[2]方法制备组织总蛋白。等电聚焦主要按IPGphor电聚焦系统指南以及Rajcevic等[3]的方法优化进行。为了减小误差,每份蛋白样品重复电泳3次。凝胶染色参照文献[4]优化进行。
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鼻息肉病与正常鼻黏膜组织的蛋白质组差异分析
目的:建立分辨率高和重复性好的鼻息肉病及对照鼻黏膜双向凝胶电泳(2-DE)图谱,筛选鉴定差异表达蛋白质.方法:收集鼻息肉病(鼻息肉病组)及对照鼻黏膜标本(对照组)各7例,固相pH梯度2-DE、凝胶银染,扫描图像, Image Master 2-DE Elite 4.01软件分析,识别差异表达蛋白质,质谱仪得到相应肽质指纹图谱(PMF),PeptIdent软件查询Swiss-Prot and TreMBL数据库,鉴定差异表达蛋白质.结果:①鼻息肉病组和对照组各自随机挑选的1个样本3次重复2-DE,平均蛋白质点数分别为891±67和936±62;匹配点数为767±83和821±78,平均匹配百分率为86.1%和87.7%;同一鼻息肉病的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦电泳(IEF)方向偏差为(1.13±0.16)mm,在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向偏差为(1.45±0.21)mm.分析2种组织各7例样本的2-DE图谱的平均凝胶图谱,鼻息肉病组和对照组蛋白质点数为1532和1617,匹配点数为1065个.②质谱分析差异蛋白质点20个,获取16张PMF,查询数据库鉴定出差异蛋白质11个.结论:本研究建立了分辨率高和重复性好的鼻息肉病及鼻黏膜的2-DE图谱,识别鉴定出一些与鼻息肉病变相关的差异表达蛋白质.
