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基于PCR技术探究食品检测新技术的应用
“民以食为天,食以安为先”,食品安全问题事关人民群众的切身利益,食品安全的维护对于稳定人民生活、促进社会发展具有重要作用。目前,生物技术已成为食品安全检测技术中具竞争力和挑战力的新技术,如免疫学检测技术、PCR技术、基因探针技术、生物传感器技术、生物芯片技术等生物技术已广泛应用在食品检测领域。PCR技术自1985年发明以来,因其灵敏、快速、操作简便的优点,在食品检测领域得到广泛应用。近年来,关于PCR改进技术在食品检测中的应用研究越来越多。本文详细介绍了常规PCR检测及其改进技术多重PCR检测、荧光定量PCR检测技术的原理,基于原理,分别介绍三种技术在食品检测中的应用研究进展。
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现代技术在食品检测领域的应用
食品的安全关乎百姓的生活质量,对于百姓的重要性不言而喻。随着生活水平的逐渐提高,人们对食品安全的要求也越来越高。近年来,食品安全事件屡有发生,从欧洲的疯牛病、二恶英到国内发生的苏丹红、瘦肉精和三聚氰胺等事件让人对食品安全产生不少担忧。因此,加强食品检测刻不容缓,重要的是不断加强食品检测技术。传统的检测技术已无法满足现代食品检测要求,要将现代生物分子技术应用到食品检测领域才能让食品的质量更安全,使百姓的生活更有保障。现代生物技术应用在食品检测领域也已有一定成果,本文围绕实时荧光定量PCR技术、核酸探针技术、近红外光谱技术、生物芯片技术等技术在食品检测领域的应用及其优缺点进行介绍。
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应用DNA探针技术快速检测食品中产气荚膜梭菌产肠毒素基因的研究
产气荚膜梭菌是引起食物中毒的病原菌,其为G-厌氧菌.有芽胞,常存在于自然界、健康人和动物肠道内.产气荚膜梭菌食物中毒的起因物质是该菌在形成芽胞时产生的A型肠毒素.因此,检测产气荚膜梭菌的产肠毒素株是非常必要的.本实验建立一种基因探针方法,能快速准确地检出产气荚膜梭菌的产毒株.我们于1999年5月~10月间,共检测样品180份,结果报告如下.
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聚合酶链反应斑点杂交技术在临床乙型肝炎病毒检测中的应用
利用半抗原地高辛配基(digixigenin)制备非同位素标记探针技术,分别标记乙型肝炎病毒全基因探针(DIG-HBVDNA)及乙型肝炎病毒PCR产物C区探针[DIG-HBV(C/preC)],经斑点杂交检测血清HBVDNA及血清聚合酶链反应(PCR)产物,与PCR平行检测122份血清标本.
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结直肠癌缺失基因201单核苷酸多态性与结直肠癌的相关性研究
结直肠癌缺失基因(DCC)因位于结直肠癌高频杂合缺失区域18q21而被认为是抑癌基因[1].重组腺病毒携带DCC基因转染多种癌细胞株均发现其能诱发凋亡[2].研究表明,DCC能与.netrin-1结合共同介导轴突细胞间的黏附和分化,并在结直肠癌中发现netrin-1的异常表达[3-4].鉴于DCC基因序列中168位的单核苷酸多态性引起的氨基酸替换与恶性肿瘤淋巴转移相关联[5],本研究应用Taqman探针技术对我国上海地区散发性结直肠癌患者和非癌对照组进行DCC基因201Arg/Gly多态性基因型测定与比较,旨在从单核苷酸多态性的角度揭示DCC基因参与散发性结直肠癌发生和进展的情况.
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XRCC3单核苷酸多态性与肺癌放疗近期疗效的相关性研究
一般认为肿瘤细胞DNA损伤修复能力与放射敏感性密切相关.DNA损伤修复过程中许多基因扮演着重要角色,这些基因的单核苷酸多态性(SNP)可改变蛋白质功能,并改变DNA修复能力,从而为通过检测这些基因SNP来预测机体细胞的放射敏感性指明了方向.笔者采用TaqMan-MGB探针技术和等位基因特异适时荧光PCR技术研究XRCC3第241密码子C/T SNP与肺癌放疗疗效的相关性.
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PET/CT分子影像学的临床应用
正电子计算机发射断层显像仪(positron emission tomography,PET)是人体分子水平显像或探针技术,临床应用价值越来越受到人们的重视和认可[1].国内外,尤其北美放射学会,美国、欧洲核医学年会和世界核医学和生物学大会交流内容主要为肿瘤学,其中大部分内容都涉及PET/CT显像,约80%用于肿瘤学,用于神经病学和心脏病学各占10%,1995年以后,PET在全世界得到迅速发展.我国现有运行的PET和PET/CT达100多台.
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透析基层医疗机构使用体外诊断试剂现状
体外诊断试剂在20多年的发展中,先后经历了化学、酶、免疫测定和探针技术4次技术革命,在疾病的预防诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测等方面正发挥着越来越大的作用.笔者通过几年来对医疗机构的监督检查发现,医疗机构对检验室使用体外诊断试的管理还存在不少漏洞,从产品的购进验收、仓储保管到使用各环节乱象丛生、亟待规范.
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第二代法医DNA指纹的研究
1985年英国科学家Jeffreys等人应用基于限制性片段长度多态性的多基因座探针技术(DNA fingerprinting,DNA指纹),克服了传统法医物证检验鉴别机率低的缺陷,使法医学个人识别和亲子鉴定实现了从只能排除到高概率认定的飞跃,标志着法医物证检验技术新纪元的开始.然而,DNA分型技术作为一种崭新的科技手段应用于法庭审判,在世界各国引起了巨大的争论与关注.近年研究证明,应用Jeffreys的DNA指纹法进行法医物证检验有一定限制.DNA指纹分析在标准化方面的困难和对检材需求量的苛求,至今难以克服.加之,DNA指纹分析无法确定每条谱带的染色体定位以及各位点之间的独立性,其概率计算至今仍有争论.因此,大多数国家转向了以单基因座多态性为基础的DNA分析技术.
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血液病患者伴发弓形虫感染的临床研究
我们应用PCR/DNA探针技术,直接检测血液病患者外周血中弓形虫病原体DNA,并与正常人及同期住院其它类患者比较,探讨不同血液病患者的易感性.
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霍乱弧菌的检测研究进展
霍乱是由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,属甲类传染病,在甲类传染病中因其处于鼠疫之后,故俗称"二号病".霍乱主要是在夏秋季节流行,传染源是病人和带菌者,通过病人或带菌者的粪便污染水源和食物,经口传入肠道,引起感染.人类是霍乱弧菌的惟一易感者.长期以来,对该菌的鉴定都采用传统的检验方法,即形态学、生理生化特征及血清学鉴定,系细胞水平鉴定,快也要十几个小时才能完成.近年来,国内外已开始采用PCR技术[1]、DNA探针技术对霍乱弧菌特别是流行株进行鉴定.这些方法简单、快速、特异性强,已得到广大医疗、卫生防疫实验室人员的关注,并成为研究的课题.
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肽核酸探针技术在赤潮生物检测中的应用
肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)是一类不带电荷的类似于肽链骨架结构并携带有碱基的新人工信息分子,该分子主链骨体为N-(2-氨乙基)-甘氨酸间通过酰胺键反复连接而成的长链,侧链则是利用亚甲羰酰键将碱基与主链骨架相连而形成[1].自PNA被发现10余年来,作为一种优良的寡核苷酸取代物而被广泛地应用于分子生物学研究及相关领域,被认为是非常有前景的探针工具.
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赤潮生物检测的分子探针技术研究进展
赤潮(Red Tide)也称有害藻华(HAB),是由于海域环境条件的改变,致使某些单细胞浮游生物爆发性繁殖,引起水色异常的生态现象.海洋中HAB藻类的爆发性增殖并通过食物链转化,对海洋生态环境、水产养殖业和人类健康安全产生直接或间接的危害,尤其是产毒赤潮.在赤潮毒素检测的上游即在赤潮发生之前监测赤潮生物尤为重要.赤潮监测大多采用传统的分类学技术如显微镜等,但由于赤潮生物(藻)形态的相似性和复杂性,使传统检测方法如光学显微镜在实际应用中存在困难,电子显微镜耗时、昂贵,难以在基层监测和防疫部门推广.分子探针技术具有快速、准确、专一性强等特点,特别是目标生物在复杂生物群落中不占优势或者有大量背景噪音干扰情况下,分子探针技术优势尤显突出.针对不同赤潮藻种,目前主要有3种探针,抗体、寡核苷酸和细胞凝集素(Lectin)探针,能够快速准确地鉴定、计数赤潮种类.现对赤潮生物检测的分子探针技术研究进展作一综述.
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淋球菌感染实验室诊断的实用技术
淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)是淋病的病原体,该菌也称淋病双球菌(diplococcus gonorrhoea)或淋球菌(gonoccus).淋球菌的分离培养检测法仍是诊断淋病的金标准试验技术,基因探针技术有可能比分离培养法更敏感和特异而成为另一种可行的诊断方法[1].在设计淋病的诊断技术时,实验技术人员要考虑所在单位的实际、社区淋病患病率以及试验方法的成本效益等,试验效果(test performance)是选择淋病诊断试验的关键指标.当社区淋病患病率低时(如产前检查的妇女),敏感度与特异度均高的试验方法的阳性预测值(PPV)也低;类似试验在高患病率人群(STD诊所病人)中的PPV和阴性预测值(NPV)都很高,这对降低假阳性率、明确诊断并正确治疗患者有重要意义,符合成本效益原则.
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霍乱弧菌检验研究进展
霍乱是一种烈性传染病,其致病菌为霍乱孤菌.霍乱孤菌是孤菌属的一个种,有2个生物型(古典生物型与埃尔托生物型),均为O1群血清型.长期以来,对该菌的鉴定都采用传统的检验方法,即形态学、生理生化特征及血清学鉴定,系细胞水平鉴定,快也要十几个小时才能完成.近来来,国内外已开始应用PCR技术[1]、DNA探针技术对霍乱孤菌特别是流行株的鉴定.还有几种分子生物学水平的鉴定方法,也逐步应用到霍乱孤菌的检验中.这些简单、快速、特异性强的检验方法,已得到广大医疗、卫生防疫实验室人员的关注,并成为研究的课题.
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漏斗技术结合探针技术置入胸椎椎弓根螺钉在脊椎畸形矫形术中的应用
目的 探讨应用漏斗技术结合探针技术置入胸椎椎弓根螺钉在脊椎畸形矫形术中的实用性和安全性.方法 12例脊椎畸形患者接受了后路矫形固定术,在手术矫形过程中,胸椎椎弓根螺钉的置入均采用“漏斗技术结合探针技术”,记录术中和术后并发症;术后常规复查X线片和CT,记录穿出骨皮质螺钉数目及距离.结果 采用“漏斗技术结合探针技术”共置入胸椎椎弓根螺钉129枚,术后复查CT见129枚螺钉中2枚穿透椎弓根内侧壁,3枚螺钉穿破外侧壁;1枚螺钉穿透椎体前壁.Heary分级,其置钉准确性达96.12%.结论 在脊椎畸形矫形术中,应用“漏斗技术结合探针技术”置入胸椎椎弓根螺钉的方法是实用的、安全的.
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随机扩增多态性DNA技术及其在蚊虫研究中的应用进展
近20年,分子生物学技术迅猛发展,为蚊虫研究提供了新思路、新方法.目前,应用于蚊虫分类学研究的方法主要有DNA探针技术、聚合酶链式反应(poly-merase chain reaction,PCR)技术、基因测序技术、限制性片段长度多态性(Restriction fragment lengthpolymorphism,RFLP)技术和随机扩增多态性DNA(random-amplified polymorphic DNA,RAPD)技术.这些方法的出现,不仅解决了许多传统方法无法解决的问题,而且还在基因水平对蚊虫分类研究作了许多有益的探索,取得了较为满意的结果[1,2].
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涂片法检查血中疟原虫应用体会
目前,疟疾的实验室诊断已发展到免疫诊断技术,如测疟原虫抗原,疟疾抗体及DNA探针技术等.但在广大基层医院,病原检查的血涂片瑞氏或姬氏染色法仍是诊断疟疾的普遍和基本的方法.这里,就作者在工作中用血涂片法查疟原虫谈一些体会.
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RCR Ribotying在细菌分子流行病学研究中的应用
细菌流行病学鉴定的分子标记技术迅速发展,常以染色体或染色体外DNA为材料,产生特异的或随机的多态性.如DNA限制性片段长度多态性分析(RFLP)、脉冲凝胶电泳技术是非常有效的,但二者都受到耗时及需要昂贵设备等因素的限制,不适于临床实验;rRNA基因的DNA探针技术也适于流行病学研究,但操作较烦琐;Srull[4]等率先把rRNA基因的限制性片段长度多态性(RFLP)分析应用于实践,并称为ribotyping.利用rRNA为基础的广谱探针,分析Southern杂交后呈现的染色体探针指纹谱,已被众多研究者用作描述细菌特征和菌株分型(ribotypes)的一种方法.
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三相寡核苷酸探针原位杂交方法研究
为探讨寡核苷酸探针技术在原位杂交应用中的敏感性和特异性,我们采用三相寡核苷酸探针对胃癌和胃溃疡手术切除标本进行甲基鸟嘌呤甲基转移酶基因(MGMT)检测,结果敏感性高,特异性强.