首页 > 文献资料
-
用肽核酸快速检验、鉴定和计数瓶装水中的铜绿假单胞菌
Stender H.等人在2000年11月美国出版的《微生物方法杂志》上,介绍了一种新的同时检测、鉴定和计数铜绿假单胞菌的CISH (Chemiluminescent in situ hybridization)方法,该方法已经研究成功。这种检验方法用一个工作日就可以完成上述工作。用大豆过氧化酶标记的肽核酸(Peptide nucleic acid,PNA)为探针结合铜绿假单胞菌的种特异性rRNA,单个的铜绿假单胞菌菌落标记5小时后,可直接在滤膜上找到。每种微生物的过氧化酶作用物都会发光,这个现象可以通过胶片或数码相机系统看到。每一个光点都是一个铜绿假单胞菌。通过对28株铜绿假单胞菌和17株其他菌包括种属关系非常相近的菌的实验证实,该方法的灵敏度和特异性均为100%。而且,铜绿假单胞菌可通过发光点进行计数。作者认为PNA CISH发光法与传统的薄膜过滤技术相比,PNA探针特异性技术使实验结果又快又准确。(王晓玲供稿 郑云雁校)
-
BCG-PSN通过抑制哮喘小鼠NF-κB影响BALF中细胞因子的水平
核因子NF-κB (Nuclear factor kappa B)是一个具有广泛生物学活性的核转录因子,可参与许多炎症的表达调控,是与支气管哮喘及气道炎症密切相关的因子之一.将28只6周龄BALB/c小鼠(山东大学医学院实验动物室)随机分为4组,每组7只.对照组:隔日腹腔内注射生理盐水(NS)0.03 ml, 第14天、28天、35天腹腔内注射1.5 mg Al(OH)3;BCG-PSN (卡介苗多糖核酸注射液,BCG-Polysaccharide nucleic acid)6周龄组:隔日腹部皮下注射BCG-PSN(商品名斯奇康1 ml/安瓿,长沙九芝堂公司产品)0.03 ml,在第14、28和35天腹腔内注射1.5 mg Al(OH)3;OVA(卵蛋白,aerosolization)组:隔日腹腔内注射NS 0.03 ml,建立哮喘模型;BCG-PSN 6周龄+OVA组:6周龄鼠,隔日腹部皮下注射BCG-PSN 0.03 ml,建立哮喘模型.
-
核苷酸衍生物相关技术在分子诊断中的应用与展望
近年来,一些人工合成的核苷酸衍生物,包括肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)、锁核酸(locked nucleic acid,LNA)、己糖醇核酸(hexitol nucleic acid,HNA)等开始在分子诊断领域中得以应用[1].与普通的核苷酸(DNA、RNA)一样,这些衍生物由A、T、C、G四种碱基组成,可通过碱基配对原则与互补的核酸序列结合.这些人工合成的核苷酸衍生物有诸多自身优势,如较高的热稳定性、酶抵抗性等.籍此,其可以明显改善普通分子生物学技术的性能特点,包括灵敏度、特异性、重复性等.譬如,利用3’端LNA修饰的引物可显著提高单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)检测的特异性,利用PNA夹止技术的抑制作用,可选择性扩增高野生背景中的少量突变[2,3].
-
肽核酸荧光原位杂交技术在临床微生物快速鉴定中的应用进展
肽核酸(peptlde nucleic acid,PNA)探针荧光原位杂交技术是一种诊断新技术,既具有PNA探针杂交的高度专一性,又具备传统染色技术的简便性,可为传染性疾病提供准确的诊断信息.它适用于临床微生物实验室的常规检验,能在短时间内为临床医生提供抗生素使用依据,具有传统微生物检验技术无法比拟的优势.笔者就其在临床微生物快速鉴定领域应用作简要综述.
-
卡介菌多糖核酸对哮喘儿童TH1/TH2细胞平衡的单细胞水平调节研究
辅助性T淋巴细胞(TH或CD+4淋巴细胞)亚群比例失调或功能紊乱是支气管哮喘的一个重要的免疫学特征,TH2型CD+4淋巴细胞在哮喘发病过程中起重要作用.本研究采用流式细胞术检测卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of Bacille Calmette-Guérin, BCG-PSN)治疗对哮喘患儿TH1/TH2细胞的平衡和转换,评价BCG-PSN对支气管哮喘气道炎症的非特异性调节作用.
-
肽核酸探针技术在赤潮生物检测中的应用
肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)是一类不带电荷的类似于肽链骨架结构并携带有碱基的新人工信息分子,该分子主链骨体为N-(2-氨乙基)-甘氨酸间通过酰胺键反复连接而成的长链,侧链则是利用亚甲羰酰键将碱基与主链骨架相连而形成[1].自PNA被发现10余年来,作为一种优良的寡核苷酸取代物而被广泛地应用于分子生物学研究及相关领域,被认为是非常有前景的探针工具.
-
维力安治疗急性缺血性脑血管病神经功能康复的疗效
Background: Cytridini triphophatis(CTP) takes part in the synthesis of phospholipid and nucleic acid directly, and makes an important role in protecting structure of cell membrane and blood brain barrier to reduce nerve cell lesions from toxic metabolites.
-
卡介菌多糖核酸对特应性皮炎患者PBMC产生嗜酸粒细胞活化趋化因子和CCR3的表达
卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of bacillus Calmette Guerin,BCG-PSN)是采用热酚法去掉蛋白质研制而成的新一代卡介菌提取物,具有免疫调节作用.临床研究显示:应用BCG-PSN预防和治疗特应性皮炎、过敏性哮喘、慢性荨麻疹等变应性疾病取得了满意的疗效.我们采用流式细胞仪、ELISA法研究特应性皮炎患者外周血单一核细胞(PBMC)产生嗜酸粒细胞活化趋化因子(eotaxin)及特异性受体CCR3表达的变化以及BCG-PSN对其的影响,探讨BCG-PSN治疗特应性皮炎的可能机制.
-
化学药物联合免疫调节剂治疗结核性胸膜炎的疗效观察
自2000年3月至2004年7月我们3家医院,应用卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid of Bacillus Calmette Guerin,BCG-PSN)联合常规抗结核药治疗结核性胸膜炎,并与常规抗结核治疗结核性胸膜炎进行比较,现将结果报告如下.
-
miR-130 a通过调控PPAR-γ的表达参与Ang II的促纤维化效应
目的:探讨miR-130a在血管紧张素II(angiotensin II, Ang II)诱导心脏间质纤维化中的作用及分子机制。方法:埋植Ang II微渗泵制备小鼠心室重塑模型,超声心动检测小鼠心功能;离体培养乳鼠心脏成纤维细胞,real-time PCR和Western blot检测分子的基因及蛋白表达。结果:在埋植Ang II微渗泵的小鼠心肌组织以及Ang II刺激的乳鼠心脏成纤维细胞,Ang II可上调miR-130a的表达。小鼠腹腔注射25 mg/kg miR-130a 抑制剂锁核酸(locked nucleic acid, LNA)-anti-miR-130a可显著抑制Ang II引起的心肌组织中miR-130a表达增加,改善Ang II引起心脏间质纤维化及舒缩功能障碍。转染miR-130a mimic可进一步促进Ang II引起的纤维化相关分子的表达增加以及肌成纤维细胞转化,miR-130a inhibitor则可抑制Ang II的上述作用。过表达PPAR-γ可抑制Ang II以及Ang II和miR-130a mimic联合应用引起的纤维化相关分子的表达。结论:miR-130a通过调控PPAR-γ的表达参与Ang II的促纤维化效应。
-
高通量核酸分析技术在体外诊断领域的应用前景
分子诊断技术是以目的核酸作为诊断目标,通过核酸扩增技术或者核酸杂交技术检测核酸的变化,并以此作为疾病诊断的依据.相对于传统的检测方法如显微镜技术或微生物培养,核酸分析技术的优越性在于其高灵敏度和特异性,核酸分析技术不仅在疾病诊断方面具有优势,而且在疾病的易感性,疾病的分型、分期以及预后判断和疗效检测都具有十分重要的意义.目前核酸检测技术已广泛应用于科学研究和临床检测,如感染性疾病和遗传性疾病筛查、肿瘤的分子诊断和药物基因组研究等,是临床检验医学的一个重要组成部分.
-
Xpert MTB/RIF 在结核病诊断中的研究进展
结核病( tuberculosis ,TB)目前仍然是严重危及全球的公共卫生问题之一,2014年大约有960万新发病例和150万死亡病例,其中只有大约600万新发病例上报到世界卫生组织,余下大约360万新发病例漏诊或漏报,并且,约3.3%的新发病例和20%的接受过抗结核治疗的病例为耐多药结核(multi drug resistant tuberculosis,MDR-TB),2014年约新发48万MDR-TB,大约19万死于MDR-TB[1]。传统TB诊断技术的不足是造成上述严峻形势的原因之一,涂片镜检方法不够敏感且易漏诊,并且不能够进行耐药检测,而经典的结核分支杆菌(M.tuberculosis,MTB)培养方法虽然敏感性和特异性均较高,也可以继续进行药物敏感试验( drug suscep-tibility testing,DST),但结果回报时间过长,导致其通常不影响临床医生对TB的初始治疗决策[2]。因此,亟需新诊断技术和诊断方法的出现。2010年12月,世界卫生组织批准新检测方法Xpert MTB/RIF的推广使用。 Xpert MTB/RIF是一种以半巢式实时定量PCR为技术基础,利用美国Cepheid公司生产的基因Xpert MTB/RIF平台同时检测MTB和利福平(rifampicin,RIF)耐药的分子水平上的检测方法,它不但结果准确可靠,而且结果回报时间可以控制在2 h内。 Xpert MTB/RIF 不像传统的核算扩增试验( conventional nucleic acid amplification tests ,NAATs)那样步骤繁琐,条件苛刻,而是把PCR扩增和检测过程全部整合到了一个封闭反应盒内,加入样本后,整个试验过程即在反应盒内自动完成。Xpert MTB/RIF样本处理过程也比较简单,用来液化样本的试剂具有灭活MTB的能力,这样就降低了试验过程中生物污染的风险,使其可以接近患者床边而作为即时检验( point -of-care testing,POCT)的工具,这也同时降低了其对实验室基础设施的要求,有利于在中低收入的城镇实验室的推广应用。
-
IntroductionVirus inactivation methods for blood have been explored as a means to further reduce the risk from tested agents and to decrease the risk of emerging or variant agents for whom no deferral or effective screening methods are available. Although inactivation methods promise to reduce transfusion-related infectious disease risk, these methods are not perfect. Most techniques for pathogen reduction will not kill bacterial spores, or inactivate bacterial endotoxin, prion protein, or certain non-enveloped viruses whose tightly packed capsid proteins prevent access of the virucidal agent to its nucleic acid target. In addition,various inactivation methods have been known to decrease blood cell yield, affect blood cell recovery or survival, and may pose risk to recipients or blood center workers. My presentation today will review two methods for pathogen inactivation of red cells.