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活性碳和椰乳对文心兰离体芽尖培养的影响
目的:探讨活性碳和椰乳对文心兰离体培养的影响。方法:以文心兰顶芽和侧芽的芽尖为外植物体,接种到1/2 MS补加6-BA 3mg/L、NAA 0.2mg/L、5~20%椰乳、5~10%活性碳的不同培养基上诱导丛生芽。待丛生芽长到2~3cm高时,从丛生芽基部切下小单芽接种到1/2 MS + IBA 1.0mg/L+ 5%椰乳 + 5%活性炭的培养基上诱导生根,将生根苗转接到1/2 MS + 6-BA 3.0mg + NAA 0.2mg/L + 10%椰乳 + 5%活性碳的培养基上培养成大苗。结果:在1/2 MS + 6-BA 3.0mg + NAA 0.2mg/L + 10%椰乳(过滤灭菌)的培养基上可以诱导7倍以上的丛生芽。较适宜的生根培养基为1/2 MS + IBA 1.0mg/L + 5%椰乳 + 5%活性碳。结论:椰乳对文心兰丛生芽的分化具明显的促进作用,而活性碳可以降低椰乳和激素的作用。
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壬基酚对离体培养大鼠睾丸支持细胞苗勒抑制物mRNA表达的影响
壬基酚(nonylphenol,NP)是具有雌激素样活性的环境内分泌干扰物,广泛暴露于洗涤剂等生活品.苗勒管抑制物(mullerian inhibiting substance,MIS)可由睾丸支持(sertoli)细胞分泌.研究证实MIS可调控雄性生殖管道分化,使雄性生殖系统正常发育[1].而NP经证实可致精子、生殖管道发育畸形等[2],但NP对于MIS表达的影响,尚未见报道.本实验通过研究NP对大鼠sertoli细胞MIS表达的影响,探讨NP致雄性生殖障碍的机制.
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丹参注射液含药血清对离体培养兔脊柱运动节段椎间盘的影响
目的:观察丹参注射液含药血清对离体培养兔脊柱运动节段椎间盘活性及功能的影响.方法:将14只新西兰白兔随机分为空白组与含药血清组,各7只,处死后在无菌条件下取出脊柱运动节段各25个,其中空白组含有10%无药血清,含药血清组含有10%丹参注射液含药血清,两组于培养前及培养后第3、7、14、21天,各取5个椎间盘分别进行HE染色、Ⅱ型胶原免疫组化、蛋白多糖含量测定.结果:培养14d空白组椎间盘组织形态出现部分破坏,含药血清组组织形态维持良好,21d两组组织形态出现破坏;培养14d两组Ⅱ型胶原免疫组化染色强度无显著差异,21d时均出现显著下降(P<0.05),且空白组较含药血清组下降明显(P<0.05);培养7d两组蛋白多糖PAS/AB染色强度无降低,14d两组强度均有所减弱,21d进一步减弱,且空白组改变更为明显.结论:空白组14d以后椎间盘逐渐出现退变,21d时退变明显;含药血清组培养14d仍可维持椎间盘的活性与功能,21d时也出现退变,但退变程度不如空白组显著,提示含有丹参注射液的药物血清可以一定程度上减缓椎间盘退变.
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巴戟天离体再生及农杆菌介导的遗传转化
目的:在巴戟天离体再生的基础上,建立一套根癌农杆菌转化的有效方法,为巴戟天新品种选育、引入外源目的基因奠定基础.方法:以巴戟天带节茎为材料,农杆菌菌株为EHA101,含有质粒载体pGA482GG,质粒上插入了GUS、NPTⅡ基因.结果:MT基本培养基附加BA 1 mg*L-1,外植体出芽率高(97.8%),BA浓度升高,出芽率下降.外植体在培养基上的接种方式,以竖放为好,出芽所需的时间短且出芽率高.根的诱导,以MT附加0.2~0.5 mg*L-1NAA效果较好,生根率可达80.0%以上.巴戟天带节茎进行遗传转化,卡那霉素作为选择试剂,浓度为50 mg*L-1.头孢霉素用作抑菌剂,浓度为300 mg*L-1.经感染的外植体,在选择培养基上筛选1.5个月后,抗性芽发生率为14.8%,GUS基因表达检测结果,抗性植株中,GUS反应呈阳性所占比例为22.2%. 结论:通过探讨巴戟天的离体培养及根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了较高的离体再生频率,建立了有效的遗传转化系统.
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川黄柏离体培养及药用成分的抑菌试验研究
黄柏是芸香科植物黄皮树Phellodendron chinense Schneid及黄柏树P. amurense Rchpr除去栓皮的干燥树皮,前者习称"川黄柏",后者习称"关黄柏",其主要成分为盐酸小檗碱,有清热消炎抗腹泻之功效.由于黄柏的主要成分与黄连相同,因此常用黄柏来代替黄连提取盐酸小檗碱.
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丹参转基因毛状根离体培养体系的建立及分析
目的:建立起丹参的转基因毛状根诱导及离体培养体系.方法:考察了不同外植体、不同农杆菌侵染时间和共培养时间诱导丹参毛状根的效率,共培养外植体用400g·L-1Cef水除菌5 min,接种在MS+400g·L-1Cef+2.5 g·L-1Hyg的固体培养基上,完全除菌后转接入6,7-V +2.5 g·L-1Hyg液体培养基继代培养,GFP荧光检测阳性毛状根,PCR检测农杆菌特征基因rolC,并测定不同生长时期的毛状根干重和二氢丹参酮Ⅰ的积累.结果:用丹参叶片基部诱导毛状根,成功率可达到93.3%;农杆菌侵染10 min诱导效率高为63.3%;共培养2~3d诱导效果好;PCR结合GFP荧光检测的方法鉴定阳性转基因材料具有较高的可信性;丹参毛状根生物量变化与次生代谢物积累之间有着紧密联系.结论:成功建立起丹参转基因毛状根离体培养体系,为进一步的基因工程应用打下基础.
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金花石蒜离体培养及快速繁殖
金花石蒜Lycoris aurea Herb属石蒜科石蒜属多年生草本植物,别名忽地笑、龙爪花、大毒蒜.其鳞茎有毒性,含有石蒜碱、石蒜胺碱、加兰他敏、多花水仙碱等10多种生物碱,具有较高的药用价值~[1].
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激活素A对离体培养大鼠卵泡发育的影响
激活素A是一种由卵泡液中提取出来的蛋白,主要以旁分泌和自分泌途径调节卵泡颗粒细胞功能,而对卵泡发育的影响却不十分清楚.本实验目的旨在探讨激活素A对大鼠离体培养卵泡发育的影响.用胶原酶分离窦前卵泡并分别加入激活素A(140μg/L)、FSH(0.1IU/mL)以及卵泡抑素(FS)在DMEM培养液中进行离体卵泡培养4d,观察卵泡直径、雌二醇分泌的变化.结果表明:激活素A处理组和FSH+激活素处理组的卵泡直径显著增大(P<0.01).FSH+激活素A处理组雌二醇的分泌显著增加.FS可抑制激活素A对卵泡发育的影响.结果显示:激活素A可以促进未成年大鼠窦前卵泡的生长发育.
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纤溶酶原激活物抑制剂1反义RNA对猪主动脉内皮细胞中成纤维细胞生长因子的影响
许多研究表明纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)在动脉粥样硬化病变处的表达增加.PAI-1可以通过促进细胞外基质积聚、促进血栓形成和调节平滑肌细胞迁移和增殖而促进动脉粥样硬化的发展[1],因此,降低动脉壁PAI-1表达有可能延缓动脉粥样硬化的发展.我们观察了构建的PAI-1反义RNA重组质粒转导入离体培养的猪主动脉内皮细胞(EC)后,表达的PAI-1反义RNA对细胞中PAI-1表达的作用及对成纤维细胞生长因子(FGF)的影响.
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肿瘤浸润淋巴细胞过继免疫治疗黑色素瘤进展
肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)是存在肿瘤周围的一群异质性细胞,包括 CD4+T 细胞、CD8+T细胞、调节性T细胞、B细胞、NK细胞、NKT细胞、巨噬细胞等,以 CD3+T 细胞为主。TIL 在肿瘤周围浸润的程度及 CD8+T细胞所占的比例与肿瘤患者的预后呈明显正相关[1]。但部分TIL在肿瘤抑制性微环境中呈免疫耐受状态。基于TIL的过继性细胞治疗(adoptive cell transfer,ACT)是将浸润在肿瘤周围的淋巴细胞分离,经体外培养,活化和扩增后回输到患者体内,从而发挥杀伤肿瘤的作用。离体培养的TIL可以脱离肿瘤抑制性微环境的作用,再次活化。因TIL的ACT具有肿瘤特异性好、抗瘤谱广、杀伤活性强以及可在体外大量扩增的优点,在肿瘤过继免疫治疗的研究中受到较多关注。本文将重点探讨TIL的临床应用研究的现状,存在的问题及可能的解决途径。
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蛋白磷酸酶抑制剂对离体海马组织tau蛋白磷酸化的影响
老年变性型痴呆(AD)患者神经元内出现神经原纤维缠结(NFT)、老年斑(SP)的形成及神经元的丢失为其主要病理学改变.NFT的核心是过度磷酸化的tau蛋白.我们于2001年11月至2003年8月年采用离体培养海马片,经用磷酸酶抑制剂冈田酸(okadaic acid)处理后,观察tau蛋白磷酸化的改变及其相关酶的变化,以期寻找一种适于研究的体外AD模型.
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大鼠肝细胞缺氧预处理后基因表达谱的改变
离体培养的肝细胞经缺氧预处理后能耐受长时间缺氧,表明缺血预处理保护肝脏的现象也存在于体外[1].缺氧预处理保护肝细胞是一个受体介导的信号传导过程,但其确切机制至今仍不明了[1,2].为此,我们利用基因芯片技术研究缺氧预处理后肝细胞基因表达谱的变化,探索缺氧预处理预防肝细胞缺氧再灌注损伤的可能作用机制.
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单核细胞趋化蛋白1对子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子的影响
子宫内膜异位症(EM)以进行性发展为特点,常造成女性不孕和盆腔疼痛,发病率呈逐年上升趋势,但病因尚未完全阐明.近年来,有学者提出EM发生的诱导学说,使细胞因子和趋化因子等特定的诱导因子成为当前研究的热点.具有功能及活性的子宫内膜组织异位生长,并伴有血管生成,是EM的基本病理表现,这一过程受到血管内皮生长因子(VEGF)的调节[1].另有研究表明,VEGF可能在EM发生的早期阶段起重要作用[2];而Yih 等[3]发现,EM患者腹腔液中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)较非EM患者高.本研究采用离体培养的子宫内膜间质细胞,观察MCP-1对其分泌VEGF的影响,以探讨炎症在诱导和促进EM发生、发展中的作用.
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胆红素对离体培养大鼠耳蜗基底膜的药理效应观察
目的:观察胆红素对离体培养的新生SD大鼠耳蜗器官的损伤效应。方法健康新生3日龄SD大鼠18只,雌雄不限,分离其双侧的内耳共得到耳蜗器官组织36个,体外培养,12h后换液。选择贴壁、存活良好的组织30个入选实验,并随机分为两组(15个/组):实验组于贴壁第二天开始进行胆红素处理,对照组加入相应体积的生理盐水。处理后24h,实验组和对照组同时终止培养,并对其进行固定、免疫组织化学染色,共聚焦显微镜观察毛细胞及螺旋神经节神经元的形态变化并计数,统计对比。结果胆红素组离体培养的耳蜗器官中螺旋神经节神经元胞体及其树突纤维与对照组相比有明显的减少,内外毛细胞形态完整,数量无明显变化。结论大鼠耳蜗器官螺旋神经节神经元对胆红素的毒性敏感,而内外毛细胞对其毒性相对不敏感。
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硫酸新霉素对新生大鼠离体培养耳蜗毛细胞的毒性作用研究
目的 观察体外培养的新生大鼠耳蜗Corti器经不同浓度硫酸新霉素处理后,各回毛细胞损伤情况.方法 取新生大鼠完整耳蜗基底膜,体外培养12小时,存活贴壁后加药处理.对照组10个样本;3个实验组各10个样本,分别用终浓度为1 mmol/L、2 mmol/L、4 mmol/L硫酸新霉素处理24小时.进行Myosin Ⅶa免疫荧光组织化学染色,在共聚焦显微镜下观察各回毛细胞缺失情况.分别选取10个图片进行毛细胞计数(每张图片截取100μm计数毛细胞个数),并利用CHISS软件进行统计分析.对照组除不加入硫酸新霉素外,其他培养条件均与实验组相同.结果 硫酸新霉素对离体培养的新生大鼠耳蜗毛细胞具有损伤效应,且外毛细胞对硫酸新霉素的毒性作用比内毛细胞敏感.加入硫酸新霉素后,耳蜗毛细胞损失从底回外毛细胞开始,随着药物浓度增加,逐渐累及到中回,后顶回受累,且损失程度随着浓度的递增而加重,以外毛细胞为甚.单纯体外培养的耳蜗毛细胞没有缺失.经完全随机设计方差分析可得:顶回正常组内毛细胞数量与新霉素1 mmol/L组、2 mmol/L组无统计学差异,与新霉索4 mmol/L组有统计学差异;中、底回正常组内毛细胞数量与新霉素1 mmol/L组、新霉素2 mmol/L组、新霉素4 mmol/L组均有统计学差异;顶回正常组外毛细胞数量与新霉索2 mmol/L与4mmol/L组有统计学差异;中、底回正常组外毛细胞数量与新霉素1 mmol/L组、新霉素2 mmol/L组、新霉素4 mmol/L组均有统计学差异.结论 新生大鼠体外培养的耳蜗毛细胞随着硫酸新霉素药物浓度的增加损失越严重,且从底回向顶回发展,此与活体动物实验的损害规律基本相同,因此可作为耳毒性药物损伤后毛细胞再生研究的体外模型.
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中药脑脊液药理学方法研究进展
随着中医药研究的不断深入以及心脑血管疾病防治的需要,反映体内真实血药浓度下的中药作用物质基础和作用机制研究,已成为药理方法学研究的重点.血清药理学方法的广泛应用,已为中药体外研究提供了一种科学方法;但存在中药复方应用于离体实验时,体内外环境不完全一致等不足.中药脑脊液药理学方法的提出,初步解决了这一难点,为中医药研究中选择适宜的细胞离体培养体系提供了新途径,更为中药复方作用的物质基础和作用机制研究提供了新思路.
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乙醇诱导胃上皮癌细胞株(BGC-823)细胞凋亡
在整体动物和离体培养细胞,乙醇都可引起胃粘膜组织细胞损伤.但乙醇是否引起胃粘膜细胞发生凋亡,其在胃粘膜损伤中的作用如何,目前尚不清楚.本研究用257~686 mmol/L的乙醇(主要为343 mmol/L)作用于离体培养的胃上皮癌细胞株(BGC-823), 在不同时间作Giemsa染色, DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分析.
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离体培养时真菌对铁皮石斛和金钗石斛生长的影响
目的研究离体培养时瘤菌根菌属(Epulorhiza sp.)真菌AR-18对铁皮石斛和金钗石斛生长的影响.方法采用琼脂作支持物,考察真菌对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的影响;采用蛭石作支持物,考察真菌和营养液对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的影响.结果在琼脂培养基上,真菌AR-18对铁皮石斛和金钗石斛的鲜重和干重的增加均没有显著性影响(P>0.05).在蛭石基质上,真菌AR-18对金钗石斛鲜重的增加具有显著促进作用(P<0.05),接菌的金钗石斛的鲜重较不接菌提高16%;真菌AR-18对金钗石斛干重的增加具有极显著促进作用(P<0.01),接菌的金钗石斛的干重较不接菌提高21%.在蛭石基质上,真菌AR-18配合使用蒸馏水极显著促进了金钗石斛鲜重的增加(P<0.01),接菌的金钗石斛的鲜重较不接菌提高47%,真菌AR-18配合使用营养液对金钗石斛鲜重的增加没有显著性影响(P>0.05);真菌配合使用营养液或配合使用蒸馏水对金钗石斛干物质的积累没有显著性影响(P>0.05),所以佳处理组合为真菌AR-18配合使用蒸馏水.在蛭石基质上,真菌AR-18和营养液对铁皮石斛的鲜重和干重的增加没有显著性影响(P>0.05).结论在离体培养条件下选择合适的基质和控制真菌的适度生长是建立稳定的共生平衡系统和促进金钗石斛生长的重要条件.在人工栽培金钗石斛的过程中,使用真菌AR-18作为菌肥,有可能取得较好的效果.
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不同低温对缺氧复氧后海马神经元的存活和诱生型一氧化氮合酶表达的影响
低温已用于临床50余年,是目前公认的治疗脑损伤的有效措施,但对于不同低温的脑保护效果,存在争议.Rokkas等[1]认为深低温是治疗脑损伤的佳方法,而Wass等[2]认为降低2~5℃可获得同样的治疗效果,温度过低反而引起水、钠滞留,细胞肿胀.McDonald等[3]认为28℃以下时不能够提供进一步的脑保护作用.针对以上争议,我们采用离体培养的海马神经元作为缺氧实验模型,比较不同低温的脑保护效果,并探讨不同低温的脑保护能力与缺氧后诱生型氧化氮合酶(iNOS)表达的关系.
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工频磁场诱导淋巴细胞凋亡的实验研究
工频磁场对人体健康的影响,尤其是与肿瘤发生发展的关系日益为人们所关注.现代医学认为,肿瘤的发生发展与细胞凋亡有关.为此,我们设计了工频磁场诱导人离体培养T淋巴细胞凋亡的研究,以探讨工频磁场对人体细胞的生物学效应.