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金花石蒜离体培养及快速繁殖
金花石蒜Lycoris aurea Herb属石蒜科石蒜属多年生草本植物,别名忽地笑、龙爪花、大毒蒜.其鳞茎有毒性,含有石蒜碱、石蒜胺碱、加兰他敏、多花水仙碱等10多种生物碱,具有较高的药用价值~[1].
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石蒜属植物忽地笑中化学成分的GC-MS分析
忽地笑是石蒜属多年生草本植物;多野生于山野阴湿处、丛林下或河岸边[1].性温,味平甘,有毒,有消肿、消痛散毒之功效.也为强力催吐药,可作进口吐根的代用品[2].
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不同产地忽地笑的叶绿体基因psbA-trnH序列分析
目的 通过叶绿体基因sbA-trnH序列分析,探讨我国忽地笑种质资源的系统进化关系及分子鉴定方法.方法 分别提取15省(市)52个忽地笑居群的DNA,经PCR扩增叶绿体基因sbA-trnH序列及测序,并用Mega 5.0等软件对测序结果进行分析.结果 52条sbA-trnH序列长度为544～656 bp,GC含量为35.8％～37.0％,遗传距离为0.000 00～0.009 47;核苷酸变异(多态性)位点数共33个,其中简约信息位点9个,单一突变位点18个,插入/缺失片段6个;单倍型数量(H)10个,单倍型多态性水平(Hd) 0.749,核苷酸多态性(π)0.002 63,收集的忽地笑资源具有较高的遗传多样性.大简约法(maximum parsimony,MP)系统树中52个居群聚为4类,并且该聚类结果与其地理分布基本一致.结论 不同产地忽地笑居群的遗传变异较大,psbA-trnH序列可作为忽地笑种源分子鉴定的依据;我国忽地笑种质资源在进化上具有明显的地域性特征.
关键词： 忽地笑 居群 psbA-trnH序列 核苷酸多态性 系统聚类 -
高效液相色谱法测定雪峰山不同海拔忽地笑石蒜碱和加兰他敏含量
建立了测定忽地笑鳞茎中石蒜碱和加兰他敏含量的高效液相色谱分析方法,同时应用该方法测定了雪峰山不同海拔高度忽地笑居群鳞茎中石蒜碱和加兰他敏含量.色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),检测波长288 nm,流动相0.1％磷酸水溶液-甲醇(65:35),柱温25℃,流速1.0 ml/min,进样量20μL.研究结果表明,不同海拔忽地笑居群鳞茎中石蒜碱和加兰他敏含量存在一定差异,其中海拔678 m忽地笑居群鳞茎中石蒜碱和加兰他敏含量均高,分别约为445.23 μg/g和75.71 μg/g,与其它海拔居群相比,差异显著.该方法精确、简便、灵敏度高.雪峰山地区海拔约678 m地带较适于以提取石蒜碱和加兰他敏为目的忽地笑栽培.
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超声辅助提取忽地笑中加兰他敏的工艺研究
目的 采用正交实验设计探讨超声辅助提取忽地笑中加兰他敏的佳工艺.方法 忽地笑鳞茎样品碱化后用醋酸乙酯超声辅助提取,用HPLC法测定加兰他敏含量.结果 优提取条件为:加入0.7 ml 10%NaOH溶液碱化样品,在65℃,210W下提取3次,10 min/次,共30 min.结论 超声辅助提取忽地笑中加兰他敏是一种简单、快捷、高效的提取方法.
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忽地笑加兰他敏生物合成代谢途径中COMT酶基因克隆及序列分析
目的 克隆忽地笑加兰他敏合成代谢途径中COMT酶基因及序列分析.方法 通过比较数据库中四种植物烟草、唐松草、玉米和罂粟的儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)基因的同源序列,设计简并引物,克隆出忽地笑COMT酶基因(LaCOMT)的部分序列,然后通过RACE技术获得LaCOMT的全长序列.结果 该序列开放读码框长度为1101bp,编码366个氨基酸,且此氨基酸序列具有依赖S-腺苷-L-甲硫胺酸(SAM)的甲基转移酶蛋白的三个保守序列,并与高等植物COMT氨基酸序列(CAA52462.1、AAQ01670.1、AAD29844.1和NP 001106047.1)的同源性大于74％.LaCOMT蛋白的预测分子量为40 501.9,等电点pI为5.95.结论 此研究所获得的碱基序列为COMT酶基因的全长序列,且其预测的三级结构与咖啡酸-3-氧位甲基转移酶单体三级结构的1kyzE模型相似,均为依赖S-腺苷-L-甲硫胺酸(SAM)的甲基转移酶.
关键词： 忽地笑 加兰他敏 儿茶酚氧位甲基转移酶 基因克隆 生物信息学分析 -
忽地笑多糖的体外抗氧化和抑菌活性研究
目的:研究水溶性忽地笑多糖的体外抗氧化和抑菌活性.方法:采用体外化学体系研究忽地笑多糖对超氧自由基(O2-)、羟自由基(·OH)、脂自由基(R')和过氧化氧(H2O2)的清除作用及用琼脂扩散滤纸片法测定其抑菌活性.结果:抗氧化活性测定以Vc为对照,忽地笑多糖的抗氧化活性总体卜弱于Vc,但对·OH和H2O2的清除活性与Vc相当.抑菌活性实验结果表明:忽地笑多糖对藤黄微球菌、短小芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑制活性较强.结论:忽地笑多糖具有良好的·OH和H2O2清除活性及对革兰氏阳性菌的抑制活性.
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Box-Behnken响应面法优化超声辅助提取忽地笑多糖工艺研究
目的:以忽地笑鳞茎为原料,利用Box-Behnken响应面法优化超声辅助提取忽地笑多糖工艺条件.方法:在单因素试验基础上,选取提取温度、提取时间、液料比为影响因子,以多糖得率为响应值,应用Box-Benhnken 中心组合试验设计建立数学模型,进行响应面分析,优选佳的超声提取工艺.结果:优化的忽地笑多糖提取工艺条件为:提取温度84℃、提取时间6.9h、液料比22:1 (mL/g),此条件下忽地笑多糖得率为40.95％.结论:采用响应面法优化得到的超声提取忽地笑多糖工艺稳定可行,可用于忽地笑多糖的提取.
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忽地笑鳞茎中产加兰他敏内生真菌的分离与鉴定
目的 筛选产加兰他敏的内生真菌,为生产加兰他敏寻找新的途径.方法 以忽地笑鳞茎为实验材料,分离内生真菌,利用HPLC对其发酵代谢产物进行检测,筛选能产生加兰他敏的菌株.结果 从忽地笑鳞茎中分离出5株内生真菌,经HPLC分析,真菌GF-1能产生加兰他敏.经初步鉴定,GF-1为半知菌亚门(Deuteromycotina)青霉属(Penicillium LK.ex Fries).结论 忽地笑内生真菌有希望成为生产加兰他敏的新资源.
