036 壬基酚对机体影响的研究进展

调查研究表明,壬基酚作为一种环境内分泌干扰物,具有雌激素样作用,能干扰多种动物的内分泌系统,影响生殖、免疫、神经、心血管等系统的功能.本文从整体和细胞水平介绍了壬基酚对机体不同系统以及对肿瘤发生的影响,重点从与受体作用、激素代谢、生物利用率、细胞信号传导等方面对其作用机制进行讨论.

围产期暴露壬基酚对仔鼠肝脏增殖细胞核抗原表达的影响

目的 观察母鼠孕期和哺乳期暴露于壬基酚(NP)对子代肝脏增殖细胞核抗原(PCNA)的影响.方法 试验分为2组:包括NP染毒组(NP 200 mg/kg·bw)和对照组(花生油).母鼠受孕第6d到仔鼠出生后21 d灌胃染毒壬基酚,60 d后剖杀仔鼠,检测肝脏PCNA的表达,并检测肝脏功能(包括血总蛋白TP、白蛋白ALB、前白蛋白PA、球蛋白GLB).结果 与对照组比较,NP暴露组60 d PCNA阳性细胞数明显增多(P＜0.01),积分光密度增高(P＜0.01).经检测仔鼠的TP、ALB(P＜0.05)与对照组差异有统计学意义,而PA、GLB(P =0.194、0.644)与对照组相比较差异无统计学意义.结论 NP暴露使仔鼠肝脏组织PCNA的表达增加,即处于增殖状态的细胞增多,并且可能对肝脏功能产生一定影响,提示NP对肝脏具有损伤作用.

壬基酚亚慢性染毒对大鼠胰腺结构及功能的影响

目的 研究壬基酚对大鼠胰腺的亚慢性毒性作用.方法 32只6周龄雄性SD大鼠随机分为0 mg/kg、20 mg/kg、60 mg/kg和180 mg/kg壬基酚染毒组,每组8只.采用每日灌胃染毒,持续90 d.染毒结束后测定空腹血糖、血清胰岛素、胰高血糖素和胰腺组织内胰岛素浓度;分离胰岛进行胰岛分泌胰岛素实验;采用酶联免疫法检测肝脏组织中肝糖原含量;采用免疫组织化学法观察胰岛面积、胰岛α、β细胞相对容积以及β细胞与α细胞比率.结果 与对照组比较,180 mg/kg染毒组大鼠体重减轻,血清胰岛素、胰岛分泌胰岛素及肝糖原水平下降,胰岛面积减小,β细胞相对容积增大,差异具有统计学意义(P＜0.05).60 mg/kg染毒组胰高血糖素、胰腺组织内胰岛素、肝糖原升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).各染毒组空腹血糖水平、α细胞相对容积和β细胞与α细胞比率与对照组相比无明显差异.结论 壬基酚能够改变胰岛形态结构,影响胰腺组织的正常分泌功能.

壬基酚致雄性仔鼠脑组织差异基因的表达

目的 应用基因芯片技术,检测壬基酚暴露对仔鼠脑组织差异基因的表达,筛选部分与神经毒性相关的差异表达基因及通路进行进一步机制研究.方法 建立孕期和哺乳期暴露壬基酚的仔鼠模型,提取暴露组和对照组出生21 d仔鼠脑组织mRNA,采用Roche Nimblegen公司生产的12 × 135位点的包含大鼠26 419个基因的表达谱基因芯片,检测脑基因的表达,扫描仪进行扫描及数据处理.结果 暴露组与对照组共有1 254个差异表达基因,其中619个基因上调,635个基因下调.部分与神经系统功能相关差异表达基因为:①神经营养相关的基因:甘丙肽基因下调,神经生长因子基因下调;②细胞凋亡的相关基因:凋亡蛋白酶活化因子-1基因上调,凋亡抑制基因-1基因下调,半胱氨酸蛋白酶7基因上调;③信号传递及离子通道相关基因的表达:谷氨酸盐受体基因下调,钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ基因下调.结论 壬基酚能导致仔鼠海马神经元信号传导、免疫应答、细胞凋亡、炎症反应因子、神经胶质细胞发育等相关基因的差异表达,以上改变有可能干扰神经系统的发育和功能.

壬基酚孕期暴露对仔鼠脑皮质尼氏小体的影响

目的 检测孕期暴露壬基酚对仔鼠脑皮质尼氏小体的影响.方法 将孕鼠分为4组,在受孕的8～14 d开始灌胃,分别为阴性对照组和低、中、高剂量组(壬基酚质量浓度为50、100、200 mg/kg),在小鼠出生后21、61 d解剖取其脑组织分别做HE染色和改良后的尼氏染色,观察其结构的组间差异.结果 HE染色显示,染毒低剂量皮质区神经元开始出现固缩,随着剂量的升高,皮质区神经元层次出现紊乱,排列稀疏散乱,脱失明显,细胞体积缩小,核深染.尼氏染色中,随着壬基酚质量浓度增加,尼氏体的数量相对于对照组来说数量依次减少,且分布不均,形状大小均不一样,染色的深浅、透明度也不一致.与对照组比较,高剂量组光密度有统计学差异(P＜0.05).结论 孕期暴露壬基酚可导致仔鼠皮质部位神经元出现形态学改变,随着染毒剂量的增加这种改变越明显,这可能是壬基酚导致仔鼠学习记忆下降的原因之一.

壬基酚对机体的毒性影响及其机制

壬基酚(Nonylphenol,NP)作为一种工业污染物,在环境中具有高度生物蓄积性,人群可通过食用被污染的水,水生动物、乳汁等食物接触NP,NP的雌激素样作用能干扰多种动物的生殖、免疫和内分泌等系统,导致胚胎发育毒性、生殖毒性、免疫毒性和神经毒性等.其毒性机制包括:诱导细胞凋亡、影响胚胎期器官分化相关基因的表达和影响细胞间的信号传递以及内分泌代谢器官产生脂质过氧化损伤等.本文从整体和细胞水平介绍NP对机体的毒性影响及其作用机制.

水中双酚A和烷基酚聚氧乙烯醚降解物的GC-MS测定方法研究

目的 建立水中烷基酚聚氧乙烯醚(APEOs)降解物(NP、OP、NP1EO、NP2EO、OP1EO和OP2EO)和双酚A(BPA)的GC-MS检测方法.方法 样品经盐酸酸化、二氯甲烷微液液萃取(micro-LLE)、浓缩、BSTFA硅烷化处理和正已烷定容后进行GC-MS分析.结果 标准物浓度在10 ～ 200μg/L范围内,本方法线性关系良好(R2度大于等于0.9992);方法的检测限为1.39 ～ 5.34 ng/L;加标(20和100 ng/L)回收率为85％～105％,日间偏差小于等于6％;在2个月的饮用水监测实际应用中,内分泌干扰物(EDCs)检出率为100％,各个EDCs的暴露水平为0.5 ～90 ng/L.结论 该方法灵敏度高、选择性好、操作简单且成本较低,可以在常规实验室条件下满足水样中该类的分析要求.

孕期暴露壬基酚对母鼠雌、孕激素及生产和哺乳的影响

目的 探讨母鼠(SD大鼠)孕期暴露壬基酚(NP)对孕中期及产后雌激素(E2)、孕激素(P)以及血清NP水平和生产的影响.方法 试验分为NP 50、100和200 mg/kg·d和玉米油对照4组.母鼠受孕第6～20 d灌胃染毒NP,分别在孕12 d,分娩后1d处死母鼠,取血清,化学发光法检测E2、P水平,液相色谱法检测NP含量,并观察母鼠生产及产后哺乳的相关指标.结果 孕12 d,与对照组比较,低、中、高剂量组大鼠血清中NP、E2、P及E2/P差异有统计学意义(P＜0.01).孕12 d,低、中和高剂量组大鼠血清中NP和E2高于对照组、P低于对照组(P＜0.01).分娩后1d,与对照组比较,低、中、高剂量组母鼠血清中NP、E2差异有统计学意义(分娩后1d,低、中、高剂量组母鼠血清中NP、E2均高于对照组,P＜0.01).各染毒组母鼠未能正常生产和产后不哺乳数量均高于对照组,低剂量组和中剂量组仔鼠窝重均小于对照组(P＜0.05),与对照组比较,中剂量组和高剂量组的雌雄比例较大(P＜0.05).结论 孕期暴露NP,可降低孕鼠的体质量,血清NP的含量随暴露剂量增高而升高,干扰孕鼠体内E2、P水平,导致孕鼠不能正常生产和产后不哺乳,增加F1代仔鼠雌雄比例.

壬基酚对原代培养大鼠间质细胞3β-HSD活性的影响

目的 探讨壬基酚对体外培养大鼠leydig细胞3β-HSD的影响.方法 建立体外培养大鼠leydig原代培养的方法,染壬基酚(0、0.1、1.0和10 μmol/L)24 h后,ELISA方法检测细胞上清液中睾酮及细胞内3β-HSD的含量,并运用反转录-聚合酶链反应( RT-PCR)的方法检测leydig细胞内3β-HSD mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,在设计剂量范围内,随着染壬基酚剂量的加大,细胞培养液中睾酮3β-HSD的含量逐渐降低.1.0和10 μmol/L时,差异具有统计学意义(P＜0.05).细胞内3β-HSD含量不断降低,1.0和10 μmol/L时,细胞内该酶的降低有统计学意义(P＜0.05).3β-HSD的mRNA的表达水平逐渐降低,1.0和10μmol/L时,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 壬基酚可下调3β-HSD的mRNA的表达水平,降低细胞内3β-HSD的含量,抑制体外培养leydig细胞睾酮的合成.

环境雌激素对卵巢癌细胞PEO-4凋亡的影响

环境中天然存在的或污染的能够模拟或干扰人和动物的内分泌机能的各类化学物统称为环境内分泌干扰物,环境雌激素是其中的一大类.已有研究资料表明,环境雌激素进入人体后可通过多种途径影响机体内分泌系统的正常功能并导致人体生殖功能障碍、发育行为、生殖障碍及其他与雌激素调节失衡而引发的恶性肿瘤.

壬基酚对SD雄性大鼠生殖功能的影响

壬基酚(nonylphenol,NP)是合成壬基酚聚氧乙烯醚(nion-ylphenol polyethoxylates,NPEs)所需要的基本成分,壬基酚聚氧乙烯醚作为非离子表面活性剂被广泛应用于洗涤剂、乳化剂、造纸工业1.NPEs在环境中降解产生壬基酚.由于NP的高度疏水性,使得其易于在水体下的淤泥中浓集;而在厌氧环境下,NP相当稳定,不易降解.所以造成NP在水环境中广泛分布.20世纪90年代以来,由于发现一些国家人群中精子数在过去50年中普遍降低;某些水生物(如:鳄鱼、龟等)和鸟类的性别畸形发生率增高;以及人类一些生殖系统的疾病发生率增高.科学家怀疑与环境中某些物质干扰了机体的正常生殖、发育等过程有关,并提出了"环境内分泌干扰物"(endocrine disrupters,EDs)的概[2],NP是受到重点怀疑的"环境内分泌干扰物"之一.因此本研究旨在研究NP在亚慢性染毒时对雄性大鼠生殖系统的毒性作用.

壬基酚对胎鼠海马突触形态可塑性的影响

壬基酚(nonylphenol,NP)作为一种表面活性剂被广泛应用于化学洗涤剂中,随着生活水平的提高和生活方式的改变,洗涤剂在日常生活中被大量使用,NP的安全性越来越受到关注.有关研究已表明NP对性发育方面的影响,但有关NP对大脑形态学的影响尚未见相关的报道[1-2].本实验通过透射电子显微镜及体视学方法研究NP对胎鼠海马结构的改变,探讨其对孕期母鼠暴露下胎鼠脑组织形态结构的影响.

围产期壬基酚暴露对子代雄鼠胰腺ER表达的影响

目的 探讨围产期壬基酚(Nonylphenol,NP)暴露对子代雄鼠胰腺功能的影响.方法 将32只受孕SD大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组;以适量NP溶于玉米油从受孕第6天到产后21天进行空腹灌胃,其染毒剂量分别为0、25、50和100 mg/(kg·d).随机选取10只/组雄性仔鼠,每周监测体重,出生60 d后剖杀.分别检测子代雄鼠血糖、胰岛素、ER-α、胰腺NP水平和胰腺ER-α表达;分析上述各指标与NP暴露之间的关系.结果 NP各剂量组子代大鼠0、7、21和42 d体重均低于对照组(P＜0.05);60 d,高剂量组大鼠体重均大于对照组和低、中剂量组体重(P＜0.05);中、高剂量组大鼠空腹血糖均高于对照组和低剂量组血糖(P＜0.05),NP各剂量组胰岛素分泌量均低于对照组(P＜0.05);胰腺NP水平与血清中ER-α水平与NP暴露剂量呈正相关(rNP =0.921,rER.α=0.977,P＜0.001).显微镜下观察到,随着剂量的增加ER-α蛋白表达增强.结论 围产期NP暴露可影响仔鼠胰腺ER表达,导致大鼠糖代谢紊乱发生.

壬基酚在大鼠组织中的分布与清除

人们怀疑近几十年来人类某些生殖系统疾病(如隐睾、尿道下裂、睾丸癌及前列腺癌等)的发生率升高及过去50多年人类精子数量下降与环境内分泌干扰物(endocrine disrupters,EDs)有关[1]，而壬基酚(nonylphenol,NP)是一种较为公认的内分泌干扰物，NP的弱雌激素样作用及对雄性大鼠的生殖危害已有文献报道[2]。NP在环境中主要由洗涤剂成分之一，壬基酚聚氧乙烯醚降解产生，且NP具有很高的油水分配系数，易沉积于淤泥中，在淤泥中相当稳定。有字春曾研究过鳟鱼对水体中NP的生物富集作用，富集系数在40～100之间[3]。有关NP在哺乳动物体内的代谢分布还未见报道，本研究旨在观察腹腔注射NP后，NP在血液、肝脏、肾脏和睾丸组织中的分布和清除速度。

壬基酚对围生期仔鼠生长发育的影响

目的攘挤壬基酚的雌激素效应已人所共知,而单独给予孕鼠壬基酚对F1代生长发育的影响报道较少.本文研究经口给予孕鼠壬基酚对围生期仔鼠生长发育的影响.

评价前庭功能的整体动物模型/壬基酚对体外培养大鼠Setoli细胞的毒性作用/影响阿片催促戒断反应的实验条件

一些化工原料的雌激素样效应

采用雌激素受体阳性乳腺癌细胞株T47D在DMEM培养基(含10%小牛血清)中开放式单层贴壁培养的方法,探讨几种常见化工原料壬基酚(NP)、双酚A(BisA)、邻苯二甲酸酯二丁酯(DBP)的雌激素效应.于开始实验前将培养细胞用PBS洗涤后改为在无酚红DMEM(含5%CDT-FBS)中培养持续5d,其目的是耗尽内源性雌激素,实验设溶剂对照、雌激素阳性对照及3种受试物各4个剂量组,采用MTT法、3H-TdR掺入法及流式细胞术对T47D细胞增殖情况进行分析.结果显示NP、BisA和DBP对T47D细胞增殖的影响同雌激素类似,可促进T47D细胞增殖和细胞DNA合成,并推进G0/G1期细胞进入S期,提高细胞增殖指数,随着培养时间,延长至96h,0.8μmol/L NP、32μmol/L BisA和320μmol/L DBP均对T47D细胞有明显促进增殖效果.结果提示这几种化合物具有雌激素效应,且其作用效果存在时间-效应和剂量-效应关系.由于T47D细胞增殖为雌激素依赖性,由此可推测它们有可能通过雌激素受体而发挥其作用的.

报告基因方法对壬基酚、双酚A雌激素样活性的体外研究

目的利用基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素检测方法对壬基酚(NP)、双酚A(BPA)的雌激素样活性及作用机制进行研究.方法合成人雌激素反应元件(ERE)核心片断并将其插入pGL3-promoter载体的多克隆位点构建而成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERE-Luc,用脂质体转染法将pERE-Luc及内对照质粒phRL-SV40瞬时转染MCF7细胞,用17β雌二醇(E2)、三苯氧胺(Tam)、壬基酚、双酚A等处理后检测报告基因荧光素酶的表达.结果转染pERE-Luc的MCF7细胞的报告基因表达与E2呈明显的剂量-反应关系,1×10-11mol/L E2可引起报告基因的表达,至1×10-9mol/L可达到大表达值,而未转染pERE-Luc时与E2无明显反应,三苯氧胺可以显著抑制E2引起的报告基因的表达.1×10-6mol/L以上NP和BPA出现雌激素样作用.NP的雌激素样活性略强于BPA.结论本试验建立并采用的基于报告基因的体外雌激素检测方法是可行的,NP和BPA有一定的雌激素样活性作用.

在线固相萃取-液相色谱串联质谱法测定饮用水中的双酚A和壬基酚

目的 建立测定饮用水中双酚A(BPA)和壬基酚(NP)的在线固相萃取-液质联用法(On-line SPE LC-MS/MS).方法 水样经On-line SPE在线富集和净化,以甲醇-水为在线固相萃取流动相,流速2.0ml/min,采用沃特世Direct Connect HPXBridgeTM C18在线固相萃取柱(填料粒径10μm)进行在线固相萃取.以甲醇-0.1％氨水为分析流动相,流速0.4ml/min,采用沃特世UPLC BEH C1s色谱柱进行分析.质谱检测器采用电喷雾电离源,以多反应监测(MRM)方式进行负离子监测,采用内标法对饮用水中的BPA和NP进行定量分析.结果 该方法每个样品总耗时10rmin.BPA线性范围为5～ 1000ng/L,NP为10～5000ng/L,相关系数(r2 ＞0.999).BPA、NP的定量限(LOQ)分别为5和10ng/L,两种内分泌干扰物在3个加标水平下平均回收率为86.6％～105％,相对标准偏差3.11％ ～ 18.2％,日间精密度11.3％ ～13.2％.结论 该方法实现了样品的自动化前处理,提高了分析效率,操作简单,灵敏度高,可用于饮用水中两种环境内分泌干扰物的痕量检测.

壬基酚对红鲫、草鱼和鲢鱼的毒性及组织蓄积研究

目的 了解不同鱼种对壬基酚的毒性差异.方法 选择红鲫、草鱼和鲢鱼鱼苗,4-壬基酚换水式染毒进行96h急性毒性试验、12周亚慢性毒性试验、外周血红细胞微核试验,高效液相色谱法测定组织中4-壬基酚.结果 ①4-壬基酚对红鲫、草鱼和鲢鱼的96h LC50分别为251.30、155.84和187.01 μg/L.②染毒12周,红鲫高剂量组肝胰脏系数降低,中、高剂量组卵巢系数增高(P＜0.05)；草鱼中剂量组肾脏系数降低(P＜0.05)；鲢鱼高剂量组肝胰脏系数降低(P＜0.05).③染毒4周时,红鲫和鲢鱼中、高剂量组及草鱼高剂量组微核细胞率与对照组相比显著增高(P＜0.05)；染毒8周及以后,受试鱼各剂量组微核细胞率均增高(P＜0.05)；④受试鱼肌肉、脑和肝胰脏等组织样品中均有4-壬基酚检出,其中肝胰脏的生物浓缩系数高；红鲫对4-壬基酚的生物浓缩系数高于草鱼和鲢鱼.结论 红鲫对壬基酚较敏感.