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报告基因方法对壬基酚、双酚A雌激素样活性的体外研究
目的利用基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素检测方法对壬基酚(NP)、双酚A(BPA)的雌激素样活性及作用机制进行研究.方法合成人雌激素反应元件(ERE)核心片断并将其插入pGL3-promoter载体的多克隆位点构建而成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERE-Luc,用脂质体转染法将pERE-Luc及内对照质粒phRL-SV40瞬时转染MCF7细胞,用17β雌二醇(E2)、三苯氧胺(Tam)、壬基酚、双酚A等处理后检测报告基因荧光素酶的表达.结果转染pERE-Luc的MCF7细胞的报告基因表达与E2呈明显的剂量-反应关系,1×10-11mol/L E2可引起报告基因的表达,至1×10-9mol/L可达到大表达值,而未转染pERE-Luc时与E2无明显反应,三苯氧胺可以显著抑制E2引起的报告基因的表达.1×10-6mol/L以上NP和BPA出现雌激素样作用.NP的雌激素样活性略强于BPA.结论本试验建立并采用的基于报告基因的体外雌激素检测方法是可行的,NP和BPA有一定的雌激素样活性作用.
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壬基酚对离体培养大鼠睾丸支持细胞苗勒抑制物mRNA表达的影响
壬基酚(nonylphenol,NP)是具有雌激素样活性的环境内分泌干扰物,广泛暴露于洗涤剂等生活品.苗勒管抑制物(mullerian inhibiting substance,MIS)可由睾丸支持(sertoli)细胞分泌.研究证实MIS可调控雄性生殖管道分化,使雄性生殖系统正常发育[1].而NP经证实可致精子、生殖管道发育畸形等[2],但NP对于MIS表达的影响,尚未见报道.本实验通过研究NP对大鼠sertoli细胞MIS表达的影响,探讨NP致雄性生殖障碍的机制.
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薏苡仁水煎液雌激素样活性筛选研究
目的：对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选，探讨其作用机制。方法：首先通过小鼠子宫增重实验和人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖实验对薏苡仁水煎液进行雌激素样活性筛选；以质粒pERE-TAL-luc、pβgal-Control、pCXN2-hERα或pCXN2-hERβ共转染的HEK293细胞株为模型，采用以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测技术，评价薏苡仁水煎液雌激素样作用的信号通路。结果：薏苡仁水煎液可显著的诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加（P<0.01），且在去雌激素的培养基中能够显著促进MCF-7细胞的增殖（P<0.01）； ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示，分别由ERα和ERβ介导时，与正常组相比，薏苡仁水煎液的标准化荧光素酶活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：薏苡仁水煎液可诱导性未成熟小鼠子宫系数的增加，在去雌激素的培养基中诱导MCF-7人乳腺癌细胞的增殖，首次发现薏苡仁具有雌激素样作用，且主要是通过ERβ介导发挥雌激素样作用。
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不同产地10种卷柏雌激素样活性筛选的实验研究
目的:研究不同产地的10种卷柏雌激素样活性.方法:采用MCF-7细胞增殖实验与小鼠子宫增重实验结合,进行不同产地卷柏雌激素样活性筛选;结合血清药理学实验综合评价雌激素样活性;以pERE-TAL-luc、p β gal-Control、pCXN2-hER α或pCXN2-hER β转染HEK293细胞,雌激素应答元件(ERE)调控的报告基因瞬时表达检测,探讨卷柏发挥雌激素样作用的途径.结果:卷柏属植物卷柏(JB6)和江南卷柏(JB7)能明显升高小鼠的子宫系数,与空白组相比有显著性差异(P＜0.01);JB6和JB7可显著促进MCF-7细胞增殖;JB6和JB7不论由雌激素受体(ER)α或ERβ介导均具有雌激素活性,与ERα的亲和力高于ERβ.结论:JB6和JB7具有雌激素样活性,其中JB6的雌激素样作用强于JB7.卷柏激活基因转录发挥雌激素样作用主要是通过ERα介导的.
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三七皂苷对神经系统疾病药理作用机制研究进展
通过综述三七皂苷,包括三七总皂苷、三七三醇皂苷、三七二醇皂苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re和三七皂苷R1对神经系统疾病(阿尔茨海默病、帕金森病、缺血性脑中风和抑郁症)的药理作用,对比分析三七皂苷对神经系统疾病的药理作用研究热点及潜在优势(如类雌激素作用),为进一步的药理研究提供参考,也为临床上对神经系统疾病的治疗、药物的研究开发提供新的思路.
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从雌激素样活性解析中药诱导神经干细胞增殖及分化
中医药治疗神经退行性疾病的临床历史悠久,而近年来中药诱导神经干细胞增殖和分化的现代药理学研究进展迅速.为了发掘传统中医学理论的有关阐述与现代药理学研究成果的内在联系,笔者通过总结中药诱导神经干细胞增殖与分化的研究进展,以中医滋补肝肾理论及益气活血理论为出发点,结合雌激素诱导神经干细胞增殖与分化的研究成果,提出中药雌激素样活性滋补肝肾是中药诱导神经干细胞增殖分化的机制之一.
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《傅青主女科》应用植物雌激素治疗不孕症探究
植物雌激素是天然植物化合物，结构或功能与雌二醇相同。有雌激素或抗雌激素双向调节作用，对激素相关性疾病具有广泛防治作用。《傅青主女科》治疗不孕症十方是后世妇科治疗不孕症的准绳，方中共用中药38味，含植物雌激素中药19味，每方必用植物雌激素。通过植物雌激素调节雌激素或抗雌激素活性是《傅青主女科》治疗不孕症主要机理。
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高血压病方剂雌激素样活性补肾功效分析
高血压病的发病源于复杂的内因及外因.肾为先天之本,肾气亏虚是各种证型高血压病的重要发病因素.雌激素与中医补肾理论有着内在联系.雌激素样活性物质广泛存在于中药中,发挥补肾的作用.《中华人民共和国药典》中收录的高血压病中成药组方多含较高的雌激素样活性,后者的功效随处方治则的变化而同中有异.从现代药理学的研究成果分析,雌激素样活性物质的治疗机制包含了活血化瘀的功效.
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关键词：
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尿囊素雌激素样作用
筛选尿囊素雌激素样活性,并初步探讨其作用特点.采用小鼠子宫增重实验和人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖实验对尿囊素雌激素样活性进行筛选,同时ELISA法检测小鼠血清雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平的变化;采用特异性雌激素受体阻断剂(ICI 182,780)、雌激素受体α阻断剂(MPP)、雌激素受体β阻断剂(THC)、雌激素膜受体GPR30阻断剂(G15)拮抗实验及Western blot探讨其作用机制.结果显示,尿囊素可显著性提高未成熟雌性小鼠的子宫指数、血清E2与FSH水平(P＜0.05);且能够促进MCF-7细胞的增殖(P＜0.05),但促增殖作用可被ICI 182,780、MPP、G15所抑制;Western blot结果显示,尿囊素可以显著增加小鼠子宫ERα、GPR30的表达.本研究首次发现尿囊素具有雌激素样活性,且通过雌激素受体ERα、GPR30共同介导.
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怀地黄雌激素样活性筛选的实验研究
目的 对鲜地黄、生地黄、熟地黄和地黄叶进行了雌激素样活性筛选.方法 首先通过小鼠子宫增重实验和MCF-7细胞增殖实验对选定的四种药材进行雌激素样活性筛选;接着采用ICI182,780桔抗实验及以pERE-TAL-luc、pβgal-Control、pCXN2-hERα或pCXN2-hERβ共转染的HEK293细胞,以ERE调控的报告基因luc瞬时表达检测进行了雌激素样作用机制初探.结果 鲜地黄水提物和生地黄水提物能够诱导性未成熟雌性小鼠子宫系数的增加,且两者均能够促进MCF-7细胞的增殖,当与雌激素受体阻断剂ICI182,780同时干预时两者对细胞的促增殖作用被抑制;ERE调控的报告基因瞬时表达结果显示,由ERβ介导时,鲜地黄水提物与生地黄水提物的荧光素酶活性均显著高于正常组.结论 鲜地黄水提物和生地黄水提物体内、体外均具有雌激素样活性,且都主要通过ERβ介导发挥.不同炮制品中鲜地黄的雌激素样作用强,生地黄其次,熟地黄没有雌激素样作用,提示地黄炮制后会使其雌激素样作用发生改变.
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用MCF-7细胞检测多氯联苯拟雌激素样活性
目的 观察多氯联苯(PCB)对MCF-7细胞增殖及生长曲线的影响.方法 选用多氯联苯(1254)进行MCF-7人乳腺癌细胞增殖实验.结果 PCB组细胞增殖指数均明显高于溶剂对照组,10 ng/L PCB可诱导MCF-7细胞大增殖(P＜0.01).生长曲线分析也显示,PCB、E2生长曲线明显上移,有明显刺激MCF-7细胞增殖的类雌激素活性.结论 提示PCB具有拟雌激素样活性.
关键词： 雌激素样活性 人乳腺癌细胞增殖实验 多氯联苯 -
Thermal Shift高通量筛选法快速筛选覆盆子中雌激素样活性化合物
[目的]从覆盆子中筛选具有雌激素样活性的化合物.[方法]基于配体=受体理论,以人源雌激素受体亚型的配体结合域(hERα-LBD、hERβ-LBD)为靶点,以17β-雌二醇(E2)为阳性对照,采用Thermal Shift高通量筛选方法筛选覆盆子中具有雌激素样活性的化合物.[结果]山柰酚明显提高雌激素受体配体结合域的(hERα-LBD、hERβ-LBD)热稳定性.[结论]山柰酚能与hERα-LBD和hERβ-LBD结合,具有雌激素样活性.
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植物雌激素的研究进展
植物雌激素是植物中一类结构与功效类似于动物雌激素的天然杂环多酚类化合物,能够与雌激素受体亚基(ERα或ERβ)结合,发挥雌激素样或抗雌激素样作用.就植物雌激素成分的结构分类以及含植物雌激素成分的中药进行归纳总结,以期在数以千计的中药中寻找到具有雌激素样或抗雌激素样活性的新药源.
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三七皂苷对冠心病的药理作用机制研究进展
通过三七总皂苷、人参皂苷Rb1、Rg1、Re以及三七皂苷R1对冠心病的药理作用机制进行综述,分析三七皂苷对冠心病的药理作用研究热点和潜在的优势(如类雌激素作用),为进一步的药理研究提供参考,也为能在临床上对冠心病的治疗以及药物的开发提供新思路.
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丙烯腈对雄性大小鼠血清中性激素水平的影响
目的通过研究丙烯腈(ACN)对雄性大鼠、小鼠生殖性激素水平的影响,探讨ACN诱导生殖毒性的可能机制.方法选用ICR和昆明种小鼠用不同剂量的ACN(0,6.0,12.0,24.0 mg/kg)灌胃染毒8周,选用SD雄性大鼠用不同剂量的ACN(0,7.5,15.0,30.0 mg/kg)腹腔注射染毒13周,用放射免疫分析法(RIA)检测血清中睾酮(T)及雌二醇(E\-2)水平;选用出生后22～25 d的SD雌性大鼠,一次性腹腔注射不同剂量的ACN(5.0,15.0,30.0 mg/kg)染毒,设阴性对照组(溶剂)和阳性对照组(β-雌二醇,剂量30 μg/kg), 染毒后6 h取子宫称重.结果 ACN染毒8周后,ICR小鼠血清中T水平均低于对照组,高剂量组与对照组比较差异有显著性(P＜0.01); 昆明种小鼠血清中T水平也降低,中剂量组与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05).大鼠ACN染毒13周后,低剂量组E\-2水平明显高于对照组(P＜0.05),高剂量组T水平和E\-2水平明显低于低剂量组(P＜0.05), 但与对照组比较差异无显著性.雌性SD大鼠染毒后,各剂量组子宫重量与阴性对照组之间差异无显著性,但明显低于阳性对照组.结论 ACN能诱导雄性大鼠、小鼠血清性激素水平改变,对雄性大鼠、小鼠生殖内分泌系统有影响,在本实验条件下ACN没有出现雌激素样作用.
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用MCF-7细胞检测有机磷农药拟雌激素样活性
目的观察常用有机磷农药对MCF-7细胞增殖以及对雌激素受体基因和pS2基因表达的影响.方法选用乐果、乙酰甲胺磷、久效磷、马拉硫磷、对硫磷、对氧磷6种有机磷农药进行MCF-7人乳腺癌细胞增殖实验和转录活化实验.使pS2基因表达上调.结论乐果可能具有拟雌激素样活性,且引起pS2基因表达上调不通过雌激素受体介导.
关键词： 雌激素样活性 MCF-7人乳腺癌细胞增殖实验 转录活化实验 有机磷农药 -
子宫增重法检测壬基酚、双酚A雌激素样活性及其联合作用
目的 应用子宫增重法检测壬基酚(NP)、双酚A(BPA)的雌激素样活性并评价其联合作用.方法 选择性未成熟雌性昆明种小鼠110只,体重10～13 g,按体重随机分为11组:NP 240 mg/kg、120 mg/kg、60 mg/kg剂量组,BPA 480 mg/kg、240 mg/kg、120 mg/kg剂量组,联合240 mg/kg BPA+120 mg/kgNP、120 mg/kgBPA+60 mg/kgNP、60 mg/kgBPA+30 mg/kgNP剂量组,阴性对照组、阳性对照组(苯甲酸雌二醇1.47 μg/10 g),皮下注射染毒3 d,称子宫湿重,计算子宫重量系数.用金正均法评价联合作用的性质.结果 NP和BPA可致子宫重量系数增大,呈剂量-效应关系(分别为r＝0.819 2,P＜0.01;r＝0.689 8,P＜0.01);两者联合染毒致子宫重量系数增大,亦呈剂量-效应关系(r＝0.546 5,P＜0.01).各染毒组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),其联合作用性质在混合低剂量组呈协同作用(Q＝1.41),混合中、高剂量组呈相加作用(Q＝0.88,Q＝0.87).结论 NP、BPA具有雌激素样活性,其联合作用性质在较低剂量呈协同作用,较高剂量呈相加作用.
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DBP、DEHP及其代谢物MBP、MEHP的体内雌激素样活性分析
[目的] 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸-2-乙基己基酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单丁酯(MBP)和邻苯二甲酸-单-乙基己基酯(MEHP)的雌激素样活性.[方法] 按照经济合作与发展组织(Organization for Economic Cooperation and Development,OECD)推荐的标准试验方法,采用背部皮下注射的方式对出生后18 d雌性未成熟大鼠连续给药3 d,末次给药24 h后处死,观察化学物对大鼠体重、子宫重量、滤纸吸干后子宫重和子宫粘液重量等相关指标的变化.[结果] 虽然未观察到DBP、MBP、DEHP及MEHP有明显的促子宫增重作用,但MBP和MEHP对未成熟雌性大鼠的毒性大于DBP和DEHP,40～1 000 mg/kg MBP和1 000 mg/kg MEHP可减缓大鼠的体重增长速度,200和1 000 mg/kg MEHP则可明显降低大鼠子宫的粘液分泌量.[结论] DBP、DEHP及其代谢产物MBP和MEHP均无雌激素样活性,MBP可减缓大鼠体重增长速度,而MEHP则可影响大鼠子宫发育过程和子宫功能.
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基于荧光素酶报告基因的MCF7细胞雌激素样物质检测方法的建立
目的:建立基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素样物质检测方法,并研究2,2-双(对氯苯基)-1,1,1-三氯乙烷(2,4-DDT)和甲氧氯(METH)的雌激素样作用.方法:合成人雌激素反应元件(ERE)核心片段并将其插入pGL3-promoter载体的多克隆位点,构建成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERE-Luc,用脂质体转染法将pERE-Luc及内对照质粒phRL-SV40瞬时转染MCF7细胞,用17β-雌二醇(E2)及受体拮抗剂三苯氧胺(TAM)等处理后检测报告基因荧光素酶的表达,并用雌激素样物质2,4-DDT和METH对方法的有效性进行验证.结果:构建了ERE调控的报告质粒pERE-Luc,转染pERE-Luc的MCF7细胞报告基因的表达与E2呈明显的剂量反应关系,1×10-11mol/L E2可引起报告基因表达,至1×10-9mol/L可达到大表达值,而未转染pERE-Luc时与E2无明显反应,TAM可以显著抑制E2引起的报告基因的表达.验证结果表明,2,4-DDT浓度>1×10-7mol/L及METH浓度>1×10-6mol/L时可产生雌激素样活性,2,4-DDT的雌激素样活性强于METH.结论:建立的基于荧光素酶报告基因的体外雌激素样物质检测方法有效可靠,以此方法检测2,4-DDT和METH显示有明显的雌激素样活性作用.
