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活动性肺结核患者外周血单个核细胞表达TH1/TH2类细胞因子的特点
结核病患者免疫细胞产生TH1类细胞因子的能力低下,而TH2类细胞因子表达各家报道不一[1-3].CD4+ T和CD8+ T细胞是结核病免疫中主要的效应细胞,也是细胞因子的主要来源.我们采用流式细胞仪检测CD4+ T和CD8+ T分泌IFN-γ和IL-4的能力,从单细胞水平探讨结核菌感染患者TH1/TH2型免疫反应的特点.
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法国光动力研究概况
在法国,研究光动力学疗法(PDT)主要有两条途径:PDT的临床试验和细胞生物学方面的基础研究.主要研究方向包括已获批准的药物的临床研究,采用间-四羟基二氢卟吩(mTHPC)的基础研究,以荧光作为光敏剂的标志物从单细胞水平到肿瘤组织水平对光敏剂进行研究,其它还有PDT生物学效应,光剂量以及光敏剂药代方面的研究.
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单细胞凝胶电泳技术在运动医学中的应用
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis, SCGE)又称彗星实验(comet assay),是近年来发展起来的一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的新技术.SCGE实验初由Rydbery和Johanson(1978)提出,以后经Ostling和Johansont[1](1984)及Singh[2](1988)等对实验条件进行改良,使其具有简便快速、灵敏性高、重复性好、无需放射性标记等优点,目前已被广泛应用于临床药物筛选、肿瘤诊断与治疗、衰老和细胞凋亡机制的探讨以及遗传毒理学和生物监测等研究领域[3-5].
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当前临床流式细胞分析的发展趋势
流式细胞分析,又称流式细胞术(Flow cytometry,FCM),是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它具有如下几个特点:①标本只要是单细胞即可用于分析,如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等,实体组织只要经处理后制成单细胞悬液也能分析,因此,实际上所有组织细胞均可用于分析.②极短时间内可分析大量细胞,只要标本中的细胞数量足够,流式细胞仪(Flow cytometer)可以每秒钟数十、数百、数千个细胞的速率进行测量,测量的细胞总数可达数千、数万乃至数百万个.③可同时分析单个细胞的多种特征,当同时用多种分子探针,如用不同荧光素标记的不同单克隆抗体进行多色荧光染色,通过流式细胞分析,即可获得单细胞的多种信息,使细胞亚群的识别、计数更为准确.④定性或定量分析细胞:通过荧光染色对单细胞的某些成分如DNA含量、抗原或受体表达量、Ca2+浓度等均可进行单细胞水平的定性与定量分析.
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一氧化氮对被动致敏人气道平滑肌细胞钾通道的作用
一氧化氮(NO)是一种重要的细胞信号分子,参与多种病理生理过程.既往动物实验发现硝普钠 (SNP)能通过开放钾通道松弛大鼠气道平滑肌,并且在单细胞水平上SNP(NO的供体)能使支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型的气道平滑肌细胞的大电导依赖性钾通道(BKCa)和电压依赖性钾通道(Kv)开放[1],但一氧化氮对哮喘患者的气道平滑肌细胞(HASMC)钾通道作用尚不十分清楚.我们采用全细胞膜片钳技术,通过哮喘患者血清致敏培养的人气道平滑肌细胞,观察SNP对BKCa和Kv电流及细胞兴奋性的影响.
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酶联免疫斑点技术在结核病诊断中的应用现状
酶联免疫斑点技术(ELISPOT)由Czerkinsky等[1]于1983年根据酶联免疫吸附实验(ELISA)而建立的一种体外检测单细胞水平特异性抗体分泌细胞功能的免疫学新技术.起初用于检测B淋巴细胞分泌抗体的数量来推断B淋巴细胞的功能,后来用于检测T淋巴细胞分泌细胞因子的数量来推断T淋巴细胞功能.Lalvani等[2]首先将ELISPOT用于结核病的诊断后,相关报道日益增多[3].现将ELISPOT在结核病诊断中的进展综述如下.
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辅助生育技术的新进展
试管婴儿的问世,为人类生殖自我调控树立了新的里程碑。20多年来,辅助生育技术不断发展。80年代,试管婴儿技术主要为解决女性不孕症,以Edwards和Steptoe首创的体外受精(IVF)与胚胎移植(ET)为常规试管婴儿技术。1992年,Palermo首先使用单精子卵胞浆注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)治疗少弱精不育,技术难度更高,被称为男性不育治疗的里程碑。随着近年来分子生物学技术的进步,使单细胞水平进行人类基因诊断成为可能。在辅助生育的显微操作基础上结合现代分子生物学,发展为人类胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis, PGD)的优生辅助生育技术。随着核移植技术不断发展,利用核移植技术进行配子重构,不久的将来有可能成为人类生殖医学应用的新突破。 至少,在现阶段人们可通过改进超排卵方案、提高卵子质量、发展实验室培养系统、开拓分子生物学技术等方面,来达到提高辅助生育技术的妊娠率,降低多胎率,减少并发症,出生健康婴儿的终目的。 一、超排卵方案面临的挑战 90年代初期,常规使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)联合促性腺激素(Gn)超排卵,对早发黄体生成素(LH)峰起到了良
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卡介菌多糖核酸对哮喘儿童TH1/TH2细胞平衡的单细胞水平调节研究
辅助性T淋巴细胞(TH或CD+4淋巴细胞)亚群比例失调或功能紊乱是支气管哮喘的一个重要的免疫学特征,TH2型CD+4淋巴细胞在哮喘发病过程中起重要作用.本研究采用流式细胞术检测卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of Bacille Calmette-Guérin, BCG-PSN)治疗对哮喘患儿TH1/TH2细胞的平衡和转换,评价BCG-PSN对支气管哮喘气道炎症的非特异性调节作用.
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人慢性粒细胞白血病干细胞被确认
据2004年12月16日<中国医学论坛报>报道,中国医学科学院组织工程中心赵春华教授领导的863课题组成功地找到了人慢性粒细胞白血病(慢粒)干细胞,并证实了慢粒癌基因突变发生在比造血干细胞更为原始的干细胞水平.这一发现加深了人们对慢粒发病机制的理解,明确了白血病治疗上的一个直接、有效的靶点,有助于清除可导致白血病复发的微小残留病变,并可能成为根治白血病的突破口.随着干细胞生物学研究的日趋成熟,肿瘤学家提出肿瘤可能源于恶性增殖的母细胞,即"肿瘤干细胞".通常人们认为慢粒是造血干细胞水平发生的克隆性疾病,而"慢粒肿瘤干细胞"却源于慢粒患者骨髓中分离出的表型为血液血管干细胞群体,它已表达BCR/ABL肿瘤基因.在单细胞水平上证实该细胞群体具有成血管内皮细胞和造血的潜能,且可以在健康小鼠体内复制出慢性粒细胞白血病.慢粒肿瘤干细胞群体的分离确认,证实了慢粒的基因转化发生在比造血干细胞更为原始的血液血管干细胞水平上.
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彗星荧光原位杂交技术在检测特定基因损伤与修复中的应用
彗星荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization in combination with the Comet assay,Comet-FISH)是彗星试验(Comet assay,又称单细胞凝胶电泳)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术的结合,是一种在单细胞水平上检测特定基因损伤和修复的有效方法[1].
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石蜡切片挑取单个H/RS细胞的研究
1994年德国科隆大学的Küppers等将“分子组织学”方法应用到霍奇金病(HD)中,采用微操作仪(micromanipulator)从冰冻组织切片上挑取单个H/RS细胞,成功检测到免疫球蛋白基因(Ig)重排,从而在单细胞水平第1次证实了H/RS细胞来源于B细胞[1].我们将探讨此方法在石蜡切片中的应用.
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PMA+Ion和PHA用于流式细胞术检测Th1/Th2细胞的结果比较
流式细胞术检测Th1/Th2细胞是近几年发展的基于细胞内细胞因子染色的新技术,可在单细胞水平区分Th1/Th2[1].采用细胞活化刺激剂诱导细胞活化,进一步刺激细胞分泌细胞因子,从而达到放大但仍能反应原有细胞因子分泌格局的目的.常用的活化刺激剂为植物血凝素(Phytohemagglutinin,PHA)和佛波酯(Phorbol myristate acetate,PMA)加离子霉素(ionomycin,Ion).本实验采用四色标记流式细胞术比较了上述两种刺激剂对全血检测细胞表面分子及胞内细胞因子的影响,以期为该方法的进一步优化及检测结果的分析提供可靠的依据.
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抗原特异性T细胞的检测方法及其应用
抗原特异性T细胞(antigen specific T cell,AST)在防御病毒感染,肿瘤发生以及自身免疫性疾病方面都具有重要作用,检测细胞的活动以鉴别淋巴细胞对特异刺激的反应,在研究这些疾病的发病机制及治疗方面都有重要意义.在单细胞水平同时检测相关功能分子的活性状态将有助于更全面的分析细胞的活性状态[1].一些新方法已经建立,这使得抗原反应性T细胞可直接检测而无需通过体外扩增[2],新一代的T细胞分析使得直接定量或鉴定特异性T细胞反应更为方便.本文主要就有关抗原特异性T细胞检测方法及应用状况综述如下.
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通过单细胞测序发现结肠癌双系起源的新型癌基因--SLC12 A5
单细胞测序是一种为划定遗传关系和个性化癌症管理确认重要驱动基因的功能强大的工具。本研究运用单细胞测序分析1例结肠癌。群体遗传学分析确定了肿瘤群体中两个独立的克隆。作为早期致癌事件的大部分肿瘤克隆包含APC和TP 53基因突变,然而少数克隆却包含CDC27和PABPC1基因的优势突变。 APC和TP53基因突变在少数克隆中的缺失说明这两个克隆来自两个细胞起源。对于另外21例整个组织外显子测序并检查其体细胞突变的等位基因频谱,揭示了结肠癌克隆起源具有异质性。该研究确定SLC12A5基因的突变,显示其在单细胞水平的高频突变,然而群体水平上却呈低频突变。 SLC12A5突变的功能特征揭示其在结肠癌中潜在的致癌作用。该研究提供了结肠癌单细胞水平上第一个广谱外显子组的证据,支持结肠癌双系克隆起源以及人群中的低频突变可能发挥的重要促癌作用。
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单细胞凝胶电泳在检测人精子DNA损伤中的应用
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)又称彗星实验,是一种在单细胞水平上检测真核细胞DNA损伤与修复的方法.由于SCGE快速、简便和灵敏,已广泛用于检测外来化学物质对体细胞DNA的损伤[1].目前,这项技术广泛应用于检测人的肿瘤细胞[2]、淋巴细胞[3]、成纤维细胞[4]等,对动物的检测则有肝细胞、血细胞[5]等,以及植物细胞[6]DNA的损伤.精子DNA是精子细胞内重要的成分,是遗传物质的直接载体.临床资料显示,精子DNA损伤与男性不育有直接的关系,精子DNA的损伤关系到子代和亲代两代的健康[7,8].然而,由于精子细胞核特有的致密结构,DNA很难与核蛋白分离,使SCGE用于检测人精子DNA损伤有一定的局限.国内学者徐德祥[9]用改进的SCGE技术,成功地在显微镜下观察到人精子细胞DNA链的断裂,使近几年SCGE技术在评估男性生殖中得到了广泛的应用和迅速的发展.全文主要就SCGE的原理、具体操作方法及其在检测人精子DNA损伤中的应用和一些注意事项作一介绍.
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彗星实验检测单细胞DNA损伤的方法
彗星试验(Comet assay),又称单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是由Ostling和Johanson[1]首先提出,后经Singh等[2]进一步改进和完善的一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的方法.因具有快速、灵敏、简便、花费少等特点,SCGE目前已被广泛应用于放射生物学、遗传毒理学、生物检测、细胞凋亡、肿瘤细胞治疗评价等诸多领域的研究[3,4].用于SCGE方法研究DNA损伤的细胞有许多种,如肝脏细胞、各种肿瘤细胞、淋巴细胞等.其中,因外周血淋巴细胞具有易于采集、对机体损伤小、可用于活体检测等优点而被广泛采用,尤其在自然状态下DNA损伤的检测中更显示其优势.就SCGE的原理、操作方法及其在外周血淋巴细胞DNA损伤中的应用作一介绍.
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单相动作电位技术及其临床应用
单相动作电位(monophasic action potential,MAP)是指能够在形态和时程上准确反映跨膜动作电位(transmembrane action potential,TAP)的细胞外电位,它是群细胞的平均胞外电位.与胞内微电极记录的TAP不同的是,MAP可于完整搏动心脏上,尤其重要的是能够从病人心脏上记录到.来自于组织条和单细胞水平的基础研究对阐明细胞的电生理学特性固然重要,但它在一定程度上不能够真实地再现人类心脏病的病理生理学,因为相当一部分心律失常只存在于完整的器官或机体.MAP技术正好架起了基础与临床电生理学之间的桥梁[1,2].
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小鼠腹腔巨噬细胞内的游离钙离子浓度及PMA、fMLP反应性的不均一性
目的:巨噬细胞(Mφ)的反应性是炎症过程中的重要问题.迄今为止绝大多数的工作是以细胞群作为研究对象.我们推测在细胞群中各个细胞的反应可能是不一样的,因此有必要在单细胞水平上对白细胞的反应性进行研究.
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彗星试验中磨砂玻片的制作
彗星试验(COMET)又称单细胞凝胶电泳(singlecell gel electrophoresis,SCGE)是一种简便而灵敏的在单细胞水平上检测有核细胞DNA损伤与修复的方法,在国外广泛的用于各类化学诱变剂的检测.该试验是把在培养过程中经诱变剂或有毒物质干预后的细胞放在凝胶中制片,然后经裂解、解旋、电泳和漂洗及染色一系列过程,后在荧光显微镜下观察,求出拖尾细胞的百分率及拖尾细胞的尾长进行统计分析.